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1、人肝素辅因子H(HCIl)E1.ISA试剂盒使用说明书本试剂盒运用双抗体夹心E1.ISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中人肝素辅因子II(HCll)含量。检测范围0.156-10ngm1.此检测范围仅供参考,可根据您的要求定做.最低检测限0067ngm1.实验原理本酶联免疫吸附测定E1.lSA试剂盒运用采用双抗体夹心EiJSA法。用抗人肝素辅因子II(HCII)抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人肝素辅因子Il(HCil)与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人肝素辅因子H(HCIl)抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人肝素
2、辅因子Il(HCIl)抗体与结合在包被抗体上的人肝素辅因子Il(HCll)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在45Onm波长处测OD值，人肝素辅因子II(HCll)浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人肝素辅因子H(HCll)的浓度。具体参照各指标试剂盒相应的使用说明书。试剂盒内容试剂名称数量试剂名称数量96孔板(预包被)196孔板覆膜2标准品0.5ml标准品稀释液1.5ml瓶显色剂A液6ml瓶样品稀释液6ml瓶显色剂B液6ml瓶终止液6ml瓶酶标试
3、剂6ml瓶密封袋1浓洗涤液(30)l20m1.使用说明书1人肝素辅因子Il(HCII)E1.ISA试剂盒需自备的设备及试剂1 .45010nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)2 .单道或多道微量加液器及吸头3 .稀释样品的EP管4 .蒸储水或去离子水5 .吸水纸6 .盛放洗液的容器试剂盒的储存及有效期1 .未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将TMB洗涤液，终止液保存于4C。，其他试剂保存于-20C。2 .使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20C。，避免潮湿。注意：试剂盒内酶标条可拆卸
4、，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。试剂盒标本的采集与保存1 .血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4oC过夜，然后100Oxg离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20OC或-80OC保存，但应避免反复冻融。2 .血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8oC1000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20。C或-80。C保存，但应避免反复冻融。3 .组织匀浆：1）取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol1.1pH7.0-
5、7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；2）可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-IOm1.预冷PBS进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2次）。3）将制备好的匀浆液于500OXg离心5分钟，留取上清即可检测。4 .细胞裂解液：1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；2）将收集到的细胞用冷PBS洗3次；3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：i超声破碎：取适量PBS
6、重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。ii反复冻融：将待破碎的细胞在-20OC以下冰冻，室温融解，反复3次，使细胞溶胀破碎。4）将标本于2-8oC1500g离心10分钟，收集上清备用。5 .细胞培养上清或其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20。C或-80。C保存，但应避免反复冻融。注意：1 .以上标本均需密封保存，4oC保存应小于1周，-20oC不应超过1个月，-80OC不应超过2个月。2 .标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。3 .实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。试剂准备1 .使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室
7、温（18-25oC）,试剂不能直接在37oC溶解。2 .标准品（冻干品）：每瓶标准品加入标准品稀释液Im1.,盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为Iongm1.准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入1501.的标准品稀释液，如图依次倍比稀释成不同的梯度，IOngm1.-5ngm1.-2.5ngm1.-1.25ngm1.-0.625ngm1.-0.3125ngm1.,标准品稀释液（OPgm1.）直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。3 .浓洗涤液：用580m1.蒸储水或去离子水将20m1.浓洗涤液稀释至600m1.,进行30倍稀释。标本处理1 .本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。2 .实验前应预测标本含量，如果标本浓度过高，应对标本进行稀释，使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。3 .若所检样本不包含在说明书所列样本之中，建议进行预实验验证其有效性，并注意留存样本。
