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1、饲料中220种农药残留与白芍中33种禁用农残的的气相色谱串联质谱检测方法摘要本中心建立了一种定量分析饲料中220种常见农药残留的气相色谱一串联质谱(Ge-MS/MS)检测方法，并进行了方法学验证。结果表明，该方法对不同农药的检测限为0.5-10gkg,定量限为1.015gkg,回收率在76.10%8839%之间。该方法可以准确高效地检测饲料中农药残留量，可为饲料中农药残留监测提供技术支持。1 .绪论随着现代农业的快速发展，农药的广泛使用可以帮助保障农产品产量和质量。然而，农药残留也成为随之产生的问题。以玉米和大豆为代表的饲料原料中也有不少农药残留的报道。饲料原料中的农药残留及随着生产过程进入配
2、合饲料的农药残留可能对畜禽的生长性能和畜禽产品安全产生影响，因此，有必要对饲料和饲料中的残留检测进行筛查。目前，国内外已开发了一些方法可应用于饲料或饲料原料中的农药检测，如HP1.CRAD法、HP1.C-MS/MS法、GC-MS法等，但是这些方法往往只能针对一类或几类农药，不能满足一次性筛查饲料中多种农药的要求。本研究旨在开发一种GCMSMS检测方法，用于检测饲料中220种农药残留物的含量。可检测的农药如表1所示。表1可检测的220种农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称农药名称故敌於野麦慢对陵磷环辄菌胺生物飘第他克百威唯唯修杀螭的PP-甲班海滴涕敌草腑久效磷
3、异柳磷虫蜻磷/裨磷乙噫Ki硝壤虫硝乙酯杀蜻醇恶霜灵甲胺磷乐果戊卿专Mttft腱械前胺绿谷隆唬前环胺由籁禾草灵哒曝破硝虫蜻伐乙草胺甲基异柳磷3瑜丹款富的酯西玛津DDE-o,p,格就灵氟西菊脑速灭磷异稻疽净甲拌磷花破三陵磷抑不喊特丁津乙氧陕草黄多效嚏治草般禾草故抗财威甲拌磷联笨艾氏剂杀飒战瞬破坏磷氯氟M辆将乙丁烯氟灵除找磷DDE-PP,18畦*氯理灵甲基毒死!辄异柳磷苯雷灵笨嚏草胺乙酸甲胺乙烯菌核利三畦髀增效醍H甲甲笨敌草净二甲戊灵环畦醇伏杀磷六氯苯嗪华用丙草胺附曲的四家硝基笨皮蝇磷乙基涣祕磷DDT-p.p亚胺磷磷异丙成甲基基噪磷一草草班草胺氯唾磷反式氯丹禾草具益棉磷灭戊磷甲基对乳瞬涣苯烯磷申索磷
4、二笨胺五氯苯胺毒虫投烯畦醇氟暧嘎环草政甲甲草特丁丁瞬取敌政磷仲丁威戊快草胺水胺破磷乙敏修蝇毒磷六六六甲雷灵脱叶硝我笨菊断二浪硝甲甲立立硝敌牌倍破硝亚W默氯飙菊酒残杀威禾草丹羊修威Itt丙虫伐磷劳灭净J草胺氟虫睛晴笨哩治螟磷三氯杀蜻醇除草定哦蜻脓氯笨胺灵丙硫磷消草S!氟肌戌篇临J班嘘嘘倍疑瞬DDD-PP,Mffl帆五氯硝希笨毒死鳏四版联嚏。.户甲辄滴涌涕械旅机菊尚地虫酸磷安破磷DDT-oP哌草草甲拌磷马拉辄磷赋丁酸草胺新着哇DDD-o.p*扑灭津对氧磷乙喊酚碱酸商戊畦*莞大通扑草津抑草罐丙环嚏尿戊病顺敌恶瞬异丙甲草胺乙班赋草艇旗环畦异喳草制特丁净狄氏刑乙蜻哇浜机菊临氯硝籁浪成磷唠草用二曝农-己陛
5、脖伐灭磷氯笨呢静特丁酸磷一丙菊能地胺磷胺炳南百治磷异丙净杀扑磷甲系炳陆对澳磷环内班灵硫丹异狄氏剂三氯杀螭做辄乐果马拉破磷敌草胺倍酶瞬妣杀虫畏胺丙提二.畦福抑需唾哦着瞬噬霉胺烯虫赭席霹利咯馅躺硝胺脱乙基拷去津aw氟帙胺哒蜻灵并去津甲基对硫磷内澳磷异两胞笨院甲环三畦瞬灭翦磷多着灵2 .试验材料与方法2.1 实验仪器表2试验仪器清单仪寄名除仪Hlfe三UAfiknlTccbooAopes89OA巾“四靖忏质询仪AfUleSf,JX)OOATnpleQuadmpoleMassSpectionKler岗处水位MilliporeMHhQe化条电f分析天IFBSAI24S台式寓。叽B(Ugc22R气动现合B
6、HQ(X-112.2 试剂与溶液农药混合标准溶液（100ilg/m1.）、环氧七氯B标准溶液（100pg/m1.）、多菌灵标准溶液（100gm1.）,纯度98%,购自科技有限公司。环氧七氯B内标工作溶液（lgm1.）:准确移取100gm1.环氧七氯B溶液各100H1.,用乙酸乙酯定容至Iom1.,在20C下避光保存，备用；标准工作溶液：准确移取208种农药混合标准工作液和多菌灵标准溶液（100Hgm1.）,配制浓度为0.01gkg0.03gkgx0.1gkg0.5gkgl.Opg/kg、2.0gkg5.0gkg和10.0gkg的系列标准溶液；2.3 样品前处理称取5g饲料样品（精确至0.0Ig
7、）于50m1.离心管中，加入IOm1.超纯水后充分震荡涡旋，静置20min,加入15m1.的1%乙酸-乙月青溶液（V：V）、一颗陶瓷均质子和一份QUEChERS萃取盐包，剧烈震荡并涡旋，离心。取上清液5m1.于一支ISm1.的QuEChERS净化管中，离心。准确吸取上清液2m1.于IOm1.离心管中，40水浴中氮吹至近千。加入201.环氧七氯B内标工作溶液和Im1.乙酸乙酯复溶，用0.22m的微孔滤膜过滤，收集滤液于进样小瓶中。因样品中的多菌灵直接检测灵敏度低，故需进行衍生化提升方法灵敏度，另取一份上清液5m1.于一支15m1.的QUEChERS净化管中，充分涡旋后以4,000rmin离心Io
8、min。准确吸取上清液2m1.于IOm1.离心管中，40水浴中氮吹至近干，加入Im1.丙酮、1501.的15%五氟苇基澳溶液和150H1.的25%碳酸钾水溶液，涡旋后超声IOmin,置于60烘箱中反应2h,向离心管中加入适量无水硫酸钠充分除水，用0.22Hm的微孔滤膜过滤，收集滤液于进样小瓶中。2.4 仪器参数色谱柱：AgilendWVF-1701ms型14%氟丙基/苯基和86%PDMS固定相色谱柱(0.25mm30m,O.25m);流速：Im1./min：色谱柱温度设置：40保持Imin,然后以40Cmin速度升温至120,再以5Cmin升温至240C,再以12Cmin速度升温至300,保持
9、12min:进样体积：l1.;进样口温度：280；进样方式：不分流模式；传输线温度：2804C；电子轰击源：70eV：离子源温度：280；溶剂延迟：3min；检测方式：多离子反应监测(MRM)。图2代表性农药的特征离子图3 .试验结果3.1 方法优化分别采用食品安全国家标准(GB23200-113.2018)中的固相萃取方法和本方法的QuEChERS的前处理方法处理空白加标样品。选择分属不同类别的几种代表性农药，按两种方法提取后，进行回收率的比较，如图3所示，固相萃取法整体而言回收率略高于QuEChERS的前处理方法，但是差别不大，但是考虑到QUEehERS方法步骤更少，操作更简便且耗时更短，
10、最后仍然选择QUEChERS方法。农药类别Pcxticidccategoric%-%)w2N(%)*娑=一周相萃取法SPI-QUECh卜RS法(Jul(hlRS图3不同前处理方法对几类农药的回收率农药类别Pesticidecategories乙腑Acctonitrilc1%乙酸/1%aceticacidacctonitrilc()*M三一之后，考察不同酸度的提取液对回收率的影响，分别选用乙腊和1%乙酸乙月青作为提取液，其他提取步骤不变，选择分属不同类别的几种代表性农药，比较两种提取液对回收率的影响。如图4所示，两种不同体系对不同种类农药的回收率各有高低，但总体而言1%乙酸-乙月青体系波动更小，
11、因此最后采用1%乙酸乙睛体系。图4不同提取液对几类农药的回收率3.2 方法验证3.2.1 线性关系农药混合标准溶液（定量限200gkg）范围内，以被分析物峰面积与同位素内标峰面积比值为纵坐标，被分析物的浓度为横坐标，进行线性回归分析，同时生成标准曲线。在所选定线性范围内，待测农药的峰面积与内标峰面积比值与对应浓度呈良好线性关系，绝大多数农药的标准曲线相关系数大于0.99o3.2.2 方法的检出限和定量限划定非样品出峰位置处的响应结果为噪音基线,将不同浓度被分析农药的峰面积与噪音基线进行比对，当信号噪音比(SN)3时，对应的浓度认定为方法检测限，当SN10时,对应的浓度被认定为定量限。该仪器方法
12、的检测限在O.5-lOgkg之间，定量限在l.O-15gkg之间。3.2.3 准确度与精密度在25100gkg的添加浓度下，有机磷杀虫剂、有机氯杀虫剂、氨基甲酸酯类杀虫剂、杀菌剂、除草剂和植物生长调节剂的添加回收率范围分别介于75%90%之间，日内变异系数(CV)均小于15%,日间变异系数均小于20%t.说明该方法满足定量分析饲料中的农药的准确度和精密度要求。3.2.4本研究建立了一种饲料中220种农药残留的GC-MS/MS检测方法,并对其进行了方法学验证，结果显示该方法能够满足饲料中220种农药残留定量检测的要求。基于气相色谱一串联质谱开展白芍中33种禁用农残的检测背景介绍药用植物中经常施用
13、的农药主要包括有机氯、有机磷、有机氮和拟除虫菊酯类等。有机氯农药在食物链中有极强的富集作用，在人类和动物的脂肪组织内长期积累容易引起慢性中毒；有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶有抑制作用，易产生极性中毒，有时严重危及生命。中药作为一种特殊的食品为患者及体弱者所服用，且服用时间长，更易造成蓄积中毒。目前，农药残留检测方法主要有气相色谱串联质谱法(gaschromatographytandemmassspectrometry,GC-MS/MS)液相色谱-串联质谱法(IiqUidChromatograPhy-tandemmassspectrometry,1.C-MSMS)o实验流程Ol样品前处理
14、将白芍样品参照2341农药残留测定法中第五法药材及饮片(植物类)中禁用农药多残留测定法中的直接提取法进行样品前处理。02仪器GC2000气相色谱仪、EXPEC5230三重四极杆串联质谱仪配置：AS5016自动进样器、FPI6.159.438柱温箱、MaSSEXPert质谱工作站03仪器分析参数设置气相色谱条件：色谱柱：DB-17MS气相色谱柱色谱柱(3OmXo.25mm,0.25um)升温程序：初始温度为60,保持Imin,以每分钟I(TC的速率升温至160,再以每分钟2的速率升温至230,最后再以每分钟15的速率升温至280,保持13min,进样口温度：250进样方式：不分流进样载气控制方式：恒压力，146KPa进样
