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1、S007红细胞ABO血型（正反定型卜RhD鉴定标准化操作规程S007红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程标准化操作规程作业指导书S0PREG007.Ol赣州市人民医院输血科S0PREG007.01标准化操作规程作业指导书SOPREG007.Ol赣州市人民医院输血科红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血平安、有效，依据临床输血技术规范第卜五条特制定本标准化操作规程。二、方法采纳微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD血型。三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体
2、发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。微柱检测系统的上端为反应室，将葡葡聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右依次第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM试剂,检测人红细胞AB0、RhD抗原。第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性比照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型梵查。五、仪器设备S
3、0PREG007.Ol标准化操作规程作业指导书S0PREG007.Ol赣州市人民医院输血科一般离心机：血型血清学多用离心机；37C免疫微柱孵育器:六、试剂1、试剂名称：AB0、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S20063037：包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒：贮藏条件：18-25C避光保存：有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗效价128；抗B效价128；抗D效价32；特异性试验合格。2、试剂名称:人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S20060059：包
4、装规格：Al、B、0试剂各1支，IOml/支；贮藏条件；2-8C保存，不能冰冻；有效期:自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率以特异性、抗原性均符合检定规程要求。七、检测样本要求1、标本类型：静脉血（EDT抗凝剂：血液=1:10）。2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。3、标本储存和运输：簇新血28贮存时间不超过72小时。4、标本拒收状态：标识不精确、标本稀释、细菌污染，严峻溶血等不能测定。八、操作步骤1、将被检者血样标本在3400rmin（1200g）离心5分钟：2、将微柱凝胶试剂卡进行标编号：SOPREG007.Ol标准化操作规程作业指导书S0PREG007.Ol赣州市人民
5、医院输血科3、待检者与标准红细胞稀释悬液的制备：采纳塑料试管将被检者红细胞（IOUl压积红细胞加入1.2ml生理盐水中）及标准红细胞（05ml标准红细胞试剂+3.Oml生理盐水）配制成0.50.8与红细胞生理盐水悬液。4、将待检者红细胞稀释悬液分别加入第一至第四管中，每管50ul：5、将待检者血清分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul；6、将A型和B型稀释标准红细胞悬液分别加入第五支和第六支微管中，每管50ul：7、即刻运用血型血清学多用离心机离心5分钟，2分钟900rpm,3分钟1500rpm,取出肉眼判定结果。8、结果判定：见表K（1）阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特
6、异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应：复合物在胶中为弱阳性反应：愈嵬近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。2）阴性结果:被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。（3）对于红细胞RhD血型阴性的样本，应进一步作红细胞RhD阴性确认试验。表1微柱凝胶凝集试验检测红细胞AB0、RhD血型结果鉴定S0PREG007.Ol标准化操作规程作业指导书S0PREG007.Ol赣州市人民医院输血科血型DA阳B性OABDA阴B性OAB抗A+-+-+抗B抗D阴性比照Al细胞B细胞-+-+-+-+-+-+九、
7、质量限制1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。2、此检测项目应参与卫生部临床检验中心组织的室间质评，且成果合格；3、每次做血型鉴定应做室内质量限制，且要求在控。4、严格执行查对制度，推断结果后应细致核对、记录，避开笔误等引起的差错。5、检测标本应在28C保存留一周，以备复查。十、生物参考区间ABO血型：A型，B型，0型，AB型；RhD血型：阳性，阴性。十一、干扰因素1、冷凝集素：在恶性肿痛或病原体感染后有时冷反应性PI身抗体可异样增高造成溶血。2、自身抗体:红细胞被自身抗体剧烈致敏后将干扰ABO定型，且自身抗体的存在会导致交叉配血不合。SOPREG007.Ol标准化操作规程作业指导书S0PRE
8、G007.01赣州市人民医院输血科3、弱凝集：当患者红细胞上抗原异样可能会导致减弱的或缺少的凝集反应，如亚型红细胞抗原性较弱、新生儿、老年人及少数恶病质患者红细胞抗原形成不足或敏感性降低。4、细菌性凝集：常见有类B凝集，型或O型病人因大肠杆菌086感染，从而使红细胞上获得类B抗原，能与抗B抗体发生凝集，表现为B或AB型。其不受温度影响，病情好转类B凝集即消逝。另外红细胞被细菌或细菌酶污染，红细胞上的T抗原被激活，与供血者中抗T抗体发生凝集。5、混合外观凝集现象：主要见于患者有近期输血史、骨髓移植、胎盘出血、白血病或其他缘由如嵌合现象、3亚型及Tn多凝集反应。6、不规则抗体：可通过测定唾液中的血
9、型物质来鉴定ABO血型。7、亚型:亚型红细胞抗原性较弱易产生弱凝集：8、假凝集：常见于某些肝病、传染病、多发性骨愉瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等病：9、血浆样本血型鉴定时应留意解除纤维蛋白原和补体的干扰；十二、留意事项1、检测标本必需正确有标识，其血液量、红细胞或血浆的质量符合试验要求和受血者当前的免疫学状态；2、输血前检查要求是输血前3天内的血样（预防受血者在输血前的3个月之内可能有妊娠或输血等免疫史而可能产生不规则抗体）。3、标本血液离体后要求尽快送检，至检测完毕最长不能超过3d,每次检测后受血者和供血者的血标本应在2C8C保存7天：S0PREG007.Ol标准化操作规程作业指导书S0PR
10、EG007.01赣州市人民医院输血科4、每批次试剂均应进行效价测定，试剂运用前应细致检查试剂的贮存条件是否符合要求、是否变质失效；5、留意离心力、温度红细胞浓度及抗原抗体的比例对试验结果的影响：6、患者运用的药物影响的处理：假如运用右旋糖酢、PvP等治疗，应留意将红细胞洗涤：假如受者运用肝素治疗，则应用硫酸鱼精蛋白对抗，使样本凝聚；7、疑存在冷凝集素的病人标本的血型鉴定时应用37C生理盐水洗涤3次再测定，并放37C免疫微柱孵育器10分钟后视察结果。8、疑存在臼身抗体的病人标本的正定型血型鉴定时应用37C45C生理盐水洗涤红细胞三次或者用放散后的红细胞（放散方法需不破坏红细胞结构）：9、疑为亚型
11、应通过亚型定型试剂来详细定型。鉴定血型时要留意正反定型的结合，加用抗Il和抗A、B型标准血清、A2红细胞等检查唾液中的血型物质，必要时作汲取放散试验以确定。若血清中存在不规则抗体可在反定型用O细胞加以鉴定，有些亚型因为抗原的某些位点缺失，也会产生相对于缺失抗原位点的抗体，这些抗体的产生有助于亚型的判定。10、疑为红细胞被细菌或细菌酶污染产生的假凝集可珞37C免疫微柱孵育器10分钟后视察结果，此种凝集在4C和37C之间随着温度的上升凝集程度渐渐减弱，在37。C时最弱或消逝。11、出现混合外观凝集的状况时一般要核对标本，必要时可重新抽取S0PREG007.01标准化操作规程作业指导书S0PREG0
12、07.01赣州市人民医院输血科血样；12、红细胞出现弱凝集、假凝集应进行红细胞形态显微镜镜检，假凝集用生理盐水稀释或洗涤红细胞可使凝集消逝。13、对于初筛为D阴性的供血者，要分别用不同批次的IgG抗D试剂间接抗人球法进行Rh阴性确认，供血者弱D型血作为D阳性血发放。14、受血者一般只做IgM抗D试验，若为阴性应输注D阴性血。15、留意血浆因抗凝不完全而出现小的纤维蛋白对凝集反应结果的判读。16、反复输血的受者应留意抽取新的样本，以避开因回忆反应而产生的抗体漏检。十三、参考文献1、胡丽华主编，临床输血检验，第1版。中国医药科技出版社，2004；2、叶应妩，等主编，全国临床检验操作规程，第3版。东南高校出版社，2006,11：3、AB0、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）说明书。S0PREG007.Ol
