梅毒螺旋体抗体(酶联免疫法)标准操作规程.docx

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梅毒螺旋体抗体(酶寐免疫法)标准操作规程1.操作步骤:(1)配液:浓缩洗涤液用蒸偏水或去离子水20倍稀释。(2)编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴性对照3孔,阳性对照2孔和空白对照1孔(用双波长检测,可不设空白对照孔)(1)加样:分别在相应孔中加入待测样品,阴,阳对照100微升,轻轻振荡混匀。温育:用封版膜封版后,置37。C温育60分钟。(3)洗涤:揭掉封版膜,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量拧干。(4)加酶标抗体:空白对照孔不加酶标试剂,每孔加入酶标记抗体100微升,轻轻振荡混匀。(5)温育:用封版膜封板后,置37C温育30分钟。(6)洗涤:揭掉封版膜,用洗板机洗涤5遍,最后一次尽量拧干(7)显色:每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升),轻轻振匀,37C避光显色30分钟。(8)终止:每孔加终止液1滴(50微升),轻轻振荡混匀。(9)测定:10分钟内测定结果,设定酶标仪波长于45Onnl(建议双波长450nm/600-650nm测定)用空白孔调零点后测定各孔A值。2.结果判断(10) 临界值(CUT/OFF)计算:临界值二阴性对照孔A均值+0.18。(11) 阳性判定:样品A值三临界值(CUTOFF)者判定为TP阳性。(注意:初试阳性应重新取样双孔复试)(12) 阴性判定:样品A值临界值(CUTOFF)者判定为TP阴性。

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