StepOnePlus型PCR仪操作规程和PCR仪简易设置指南设计.docx

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1、StepOnePIus型PCR仪操作规程1 .StepOnePIus上机可由两种方式来进行:由StepOneSoftwareQuickStart进行上机或由StepOnePIus机器面板直接触控上机。2 .由StepOneSoftwareQuickStart进行上机:开启StepOneSoftwarev2.0进入主画面后点选QuickStart窗口进行快速上机设定。进入ExperimentProperties后输入:ExperimentName及档案储存位置;选择ExperimentType选择使用荧光系统;选择RampSpeed选择实验样品种类;点选RunMethod确定PCR反应条件是否需

2、要修改后,按下STARTRUN0如欲使用StepOnePIus机器上VeriFIexBlock的功能,请由左方Setup功能列上点PlateStePUP窗口,在AssignTargetsandSamples,窗口下,勾选EnabIeVeriFIexBlock选项,此时Block即被分成六个区块。接着点选RunMethod,runprogram上点一下欲调整的温度步骤,选择“Setdifferenttemperaturesforoneormorezones,并设定每个区块的温度,请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度,第一和第六区块最多可差异25度。按下StartRUnNoW进行data收集,反

3、应结束后,则会回到“MainMenu”画面,触控CollectResult将data存出。3 .由StepOnePIus机器面板直接触控上机:开启电源后,进入主画面,由触控式屏幕来进行StePonePlUS的设定。按下TaqManCDNA(Standard)iPCRThermalCycleProgram,可利用下面工具列再重新编辑反应条件,如果条件相同则直接按下Save0如欲使用St叩OnePIUS机型上VeriFIexBlock的功能,请点选OPtionS下的VeriFIexstep并设定每个区块温度,请注意两相邻区块温度差异不可以超过5度以上,第一和第六区块最多可差异25度。触控需要更改之

4、处则会跳出触控式键盘,重新给予实验名称、选择档案储存的Folder、并更改实际反应样品体积,按下Save&Exit;然后在BrowseLastAccessedExperiments下选择刚设定好的实验,按下StartRuno此时跳出警告标示,提醒之前的档案是否存出,如果已经将前一个档案存出的话,则可直接触控Overwrite进行Data收集;如未储存的话则触控Collect将Data存出。确定反应体积及实验名称无误后,触控StartRunNow,则会进入PCRProgram实时显示画面。反应结束后,则会回到“MainMenU”画面,触控CollectResults将data存出后,再回到Ste

5、POneSoftWare进行实验盘建立及分析。清洁与维护保养:1 .外壳要用柔软的布配合温和的清洁液清洗,不要用酒精或其他洗涤用品;加热孔可以用酒精棉球擦洗,但在清洗前应注意加热板的温度需降至室温。2 .注意保持热盖和Block的清洁,特别注意不能将带有荧光染料的试剂溅洒在热盖或者Block里,否则需用蘸有70%酒精(纯酒精稀释在蒸储水里)的干净棉球擦洗,直到不影响实验结果。注意事项:1 .为避免触电事故,仪器的输入电源线必须可靠接地。2 .操作人员不得擅自打开仪器,元件的更换或机内调节须由持证的专业人员进行。3 .在连接交流电源前,需保证电源电压与仪器要求电压一致220V(允许偏差土10%)

6、,并确保电源插座的额定负载不小于仪器要求。StepOne定量PCR仪简易设置指南启动电脑,打开定量PCR仪电源开关:双击桌面“StepOneSoftware”图标,出现LOgin登录界面,点击“0K”,打开软件。LoginTologintothesoftware,either:ClickLoginasGuesttologinanonymously,orSelectanexistinguserfromthedrop-downlistorenteranewusernameinthefield,thenclickm0KmUserName:GUESTLogin as Guest起始界面如图所示,点击红

7、色椭圆的三角图标,展开软件功能按钮。;NwEx(4rmert-3细n. Ii 9nd 8WnE 力 ElVnfE. R点击左侧SetUp”功能选项中的AdvancedSetup”高级设置向导。StepOiitieSofLwnrt*v2.iDM帛nstumr金曲3IMUBtfew&wcmert-3例仙.Ii立StndEgiMtiomrg_在打开的设置界面,左侧为导航树,选择不同的功能选项,右侧显现为不同的设置功能。默认条件下,显示为uExperimentProperties,实验属性。-NtwEjcceiinwrtQpvn.kJg*U1。“8rrtEpwmrttohjtnmm.Dw*olEj*r

8、rPflrt念Pnntap.右侧界面,带有红色*号位置需要输入或者通过鼠标进行选择。不带*号位置为选填,可以保持空白。在途中位置输入实验名称,该名称根据需要进行填写。FloE四 版UHKnb4 Ayb:一 ;3k H岬.MExpnmF Cpon. Q Cse J. j 8ndHmntR5ument. D*n2RbyLOrrttornInUlUnWrt 9 POrt Q1 P)t Ropon .ExpwinwntMonu 1 f)ofmont 20091210出IPtp FupMelh0R3fonM*llIitlTypeStandafd CurvoRoa90nt5IjqManflRcMqonIs

9、peafc4n一unt 选择仪器类型、实验类型、荧光标记方法以及反应速度。IGPOnCelSoftWjtro v2. INwEpfMfH*open St Li 9。“ 包 CItWrt T 5/EEDowKOWLrwMfimmmttunMrt.Export - 3 NEW左侧导航树,选择PlateSetup”设置选项。右侧“DefineTargets选项下“TargetName”处设置检测基因的名称,如FIuA,Reporter下拉菜单选择FAM”,Quencher下拉菜单选择“None”kiHsawrmecmcfil 20091210IyPOStiindiifd CmvoRoqont%1.q

10、ManH Rou1nnHunM.etoo1)efnI argots and SamPIeS Asagn Targ and Sampg 三 _UnMM Re*cnon点击“AddNewTarget”,并按照第7步所述进行设置。根据需要添加所需基因,如SWH1、SWFIuAI和RNPoStepOneeSoftwarev2.1以eEdtrshjTwn:Ani;IOUlihcpJWw5t*EEJ2t*nJS*Vd卜”33dE*l-;一 :r a ,-j 一,: ,祈 m ir W r:Cm FI,mr - ;! -、 ,rf,rr :鼠标点击AssignTargetsandSamples切换设置界面。

11、鼠标滑倒图中椭圆所处位置,变化为双向箭头,通过拖动鼠标,可以改变左右两侧窗口大小。MStcpOnceSoftwarev2.1FMt6num:AnttyveTortshp.Ntw&HrvrertJQtn.UIJCkse,iSerdEpf4MWX-ExporimontMenu rxpomcnf200920Tyi)0 SIandiICdCulVORougoiit?; .MnH Ro.hciI,Dgtlrt8 argt5 and Sampfes Kpiuimrnt rrmlftm,atHr V.omoo11Rdon SetFMtotlsList.UnMl”Totfu*undtrhImInKtMmS即U

12、Ckr- 44d V (UmeM*ZlHlcrmyh ttrgel ”如Wn,”二,smptfTotvluprw0ttfo corftol: S44odwo , i;s;n tMQvKt,*nslvct(NcsW C(rtf3O mcttorhtif90( i jrmr。M5A”Wnmple.鼠标选择样品放置的位置,如B4,鼠标勾选样品名称及所要检测的基因。根据样品孔的数量,依次进行设置。“NtwEaepenmert J n. i 6* S %EWfEfntR InauEM. OweodEwtnmrifrm *t 9 E?W k PwtRport.Urm*鼠标拖动椭圆位置,向下拖动。在“Selectthedyetouseasthepassivereference”的下拉菜单处选择“None”L*、川-: A 1-* 一二 一1 .: m.r./., ::. ( . I - -.1点击“RunMethod设置反应条件:在“ReactionVolumePerWel,处输入反应体积,如

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