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1、植物微生物联合修复一、植物微生物联合修复技术1.1作用原理 植物-微生物联合修复技术是生物修复研究的新领域，由于其具有利用太阳能作驱动力；能量消耗和费用少；对环境的破坏小；可使用于大面积的污染治理等优点而受到广泛的关注。 植物-微生物联合修复技术是利用土壤-植物-微生物组成的复合体系来共同降解污染物，清除环境污染物的一种环境污染治理技术。 植物生长时，通过根系提供了微生物旺盛的生活场所;反过来，微生物的旺盛生长，增强了对污染物的降解，促使植物有更加优越的生长空间，这样的植物微生物联合体系就促进了污染物的快速降解、矿化。1.2高效植株的筛选及应用 有强大的须根系，最大可能地提供微生物活动的根表面
2、面积; 能够适应多种有机污染物，生长旺盛，有较大的生物量; 根系要深，能够穿透较深的土层1.3 植物微生物联合修复技术的主要机制 植物加强微生物修复有机污染物土壤主要包括3种机制： 植物直接吸收有机污染物并在植物组织中累积或代谢 植物释放的各种分泌物或酶类促进了有机污染物的生物降解 植物增强根际区的微生物的矿化作用植物对有机污染物的直接吸收植物对有机污染物的直接吸收 植物根对有机污染物的吸收与有机物的相对亲脂性有关。 植物可从土壤中直接吸收有机物，然后将无毒的代谢中间体贮存在植物组织中，这是植物去除环境中亲水性中等的有机污染物的一个重要机制。植物分泌物或酶类去除有机污染物植物分泌物或酶类去除有
3、机污染物 植物根能释放出多种有利于有机污染物降解的化学物质，包括单体有机化合物（氨基酸、脂肪酸、酮酸、单糖类）和高分子化合物（多糖、聚乳酸以及粘液等）。这些物质增加了根际土壤中有机质的含量，可以改变根际土壤对有机污染物的吸附能力，促进与腐殖酸的共聚作用，使根际环境成为微生物作用的活跃区域，这样就间接促进了有机污染物的根际微生物降解。植物增强根际区的矿化作用植物增强根际区的矿化作用 植物修复有机污染物除了取决于植物本身的吸收能力外，植物根际微生物对有机污染物的降解也起了重要的作用。植物根际区的菌根真菌与植物形成共生作用，有其独特的酶途径，用以降解不能被细菌单独转化的有机物。 植物根际区分泌物刺激
4、了细菌的转化作用，在根际区形成了有机碳，这些有机碳的增加可阻止有机化合物向地下水转移，也可增加微生物对污染物的矿化作用。二、多环芳烃污染土壤的植物-微生物修复 多环芳烃（PAHs）是2个或2个以上的芳香环稠合在一起的一类惰性较强、性质稳定的持久性有机污染物。修复PAHs污染土壤尤其是高环PAHs污染土壤已成为目前国内外土壤与环境学界共同关注的热点之一。 对于PAHs重度污染土壤，土壤中微生物群落受到其毒害影响，相应微生物的数量较少，植物修复的修复效率相对较低，可在利用植物进行污染土壤修复的同时，向土壤中接种细菌或真菌，增加微生物的数量提高植物修复有机污染物效果。1 材料与方法1.1供试材料 供
5、试土壤 供试植物 供试丛枝菌根真菌 供试PAHs专性降解菌 化学品供试土壤 采自江苏无锡某由于多年化工废水PAHs污染的农田。多点采集表层土壤（020cm），捡出植物根系、石砾等残留物，过2mm不锈钢筛，充分混匀，供盆栽试验用。同时测定土壤基本理化性质，土壤的pH，有机质，全N，全P，全K，速效P，速效K，PAHs本底值。供试植物：紫花苜蓿化学品 菲、苯并a芘、蒽、芴、二苯并噻吩、二氯甲烷、正己烷、环己烷、乙腈均为HPLC级，其他试剂为分析纯。1.2选用菌种1、专性降解菌： 对PAHs具有高效广谱降解能力，同时具有环境友好等优点而备受青睐2、真菌：（1）在改善植物营养、提高抗病抗逆能力方面具有
6、显著作用。（2）真菌能产生独特的酶，降解不能被细菌单独降解的PAHs，在土壤修复中具有特有的优势。1.3实验设计与实施试验处理：只种植紫花苜蓿（CK）；种植紫花苜蓿，接种菌根真菌（AM）；种植紫花苜蓿，接种PAHs专性降解菌（DB）；种植紫花苜蓿，接种PAHs专性降解菌和菌根真菌（DB+AM）。 试验共4个处理，每个处理5次重复。每盆播种20粒紫花苜蓿种子，出苗10天后间苗，每盆留10株。盆栽试验在温室中进行。在培养过程中的第30、60、90天时分别取样。 每盆用小型不锈钢土钻随机采取3点，组成混合土样。将所采集的土壤样品分成两份，一份土样于4保存，以供脱氢酶活性和PAHs降解菌数量的测定分析
7、用，另一份土样风干，过20目筛，供PAHs含量分析用。1.4试验方法 植物生物量测定 PAHs的提取与测定 土壤中脱氢酶活性的测定 PAHs降解菌数量的测定2结果与分析2.1不同处理紫花苜蓿的生物量4个处理紫花苜蓿的生物量顺序为：CKAMDBDB+AM 在不接种微生物的情况下植物长势良好，说明紫花苜蓿对土壤中的PAHs有一定的耐受性，但接种菌根真菌（AM）和PAHs专性降解菌（DB）能增加紫花苜蓿的生物量。PAHs专性降解菌对紫花苜蓿的促进作用强于菌根真菌。菌根真菌与PAHs专性降解菌联合作用对紫花苜蓿生长的促进效应强于两者分别单独处理，说明两者在促进紫花苜蓿生长方面存在交互作用。接种微生物促
8、进了土壤中的PAHs降解，减少了其对紫花苜蓿的毒害，促进了紫花苜蓿生长。2.2土壤中PAHs含量的动态变化和降解率同一时间内，各个处理土壤PAHs含量顺序为：CKAMDBDB+AM培养结束时，不同处理土壤PAHs降解率 只种紫花苜蓿的CK处理也能使土壤中PAHs的量下降，其降解率为21.7%，AM、DB处理的PAHs降解率分别是47.9%、49.6%，DB+AM处理的降解效率最高达60.1%。2.3土壤中PAHs分环含量和降解率环数2环3环4环5环6环占本底值PAHs总量0%5.2% 54.9%30.0%9.7%原土壤中种植紫花苜蓿90天后，不同处理土壤中PAHs的分环含量。同一环数不同处理土
9、壤PAHs含量为：CKAMDBDB+AM土壤中不同环数PAHs的降解率2.4土壤脱氢酶活性动态变化同一时间内，各个处理土壤脱氢酶活性顺序为：CKAMDBDB+AM 紫花苜蓿根际为土著微生物提供生存场所和营养，促进其生长，提高了脱氢酶活性； 接种菌根真菌可为微生物提供生态位和分泌物，增加了微生物数量提高了脱氢酶活性 接种PAHs专性降解菌显著提高了土壤脱氢酶活性 双接种处理极显著提高了土壤脱氢酶活性2.5土壤PAHs降解菌数量动态变化 土壤中酶活性的变化可以反映土壤中微生物降解有机污染物的能力。本研究得到结果，土壤中脱氢酶活性和PAHs降解菌数量越高，PAHs的降解率越高。 植物-微生物联合修复
10、与根际脱氢酶活性和PAHs降解菌数量有关，接种微生物提高紫花苜蓿生物量，增加根际微生物活性，提高根际脱氢酶活性和PAHs降解菌数量，可以增强污染土壤PAHs的修复能力。3讨论 研究表明，紫花苜蓿通过根际效应可以有效刺激土壤根际土著微生物活性和数量的增加，从而有效促进土壤PAHs降解，不过这种修复过程还是相对缓慢的。 接种菌根真菌能够促进土壤中PAHs的降解，菌根真菌能增加PAHs的生物可利用性，提高吸收率与矿化率。 PAHs专性降解菌表现出强化修复PAHs污染土壤的作用。本研究表明PAHs专性降解菌能明显促进紫花苜蓿对土壤中PAHs的降解。3.1菌根真菌提高降解率的原因 菌根真菌与紫花苜蓿共生
11、有利于增加紫花苜蓿的抗逆性 菌根真菌对PAHs的直接吸附以及创造有利PAHs降解细菌的生态位，使菌根根际维持较高的微生物种群密度和生理活性3.2PAHs专性降解菌提高降解率的原因 微生物在生长过程中以PAHs为碳源和能源或把PAHs与其他有机质共代谢而降解PAHs； PAHs专性降解菌与紫花苜蓿互利作用促进了PAHs的降解4结论 接种菌根真菌和PAHs专性降解菌可以促进紫花苜蓿生长，增加紫花苜蓿生物量。 接种菌根真菌，增加了紫花苜蓿根际土壤微生物数量和活性，促进了土壤PAHs的降解；接种PAHs专性降解菌，增加了土壤微生物数量，促进了土壤PAHs的降解；双接种菌根真菌、PAHs专性降解菌明显促进土壤PAHs降解，两种菌剂与紫花苜蓿根际协同修复作用明显。 随着PAHs苯环数的增加，其平均降解率逐渐降低。接种PAHs专性降解菌能够提高4环和5环PAHs的降解率。 接种菌根真菌和PAHs专性降解菌，提高了PAHs污染土壤中脱氢酶活性和PAHs降解菌数量，促进了PAHs的降解。三 植物-微生物联合修复未来发展趋势 植物与微生物联合修复技术在污染土壤修复过程地位重要，潜在发展前景良好，市场效能高。但在理论体系、修复机制和修复技术上还有许多不完善的地方。 植物微生物有机污染物之间复杂的耦合作用导致难以阐明污染土壤植物微生物联合修复过程降解机理。
