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1、药物制剂微生物检验药物制剂微生物检验目录目录l1、微生物检验分类l2、药品微生物限度检测的基本条件l3、非灭菌制剂的微生物限度检查l4、灭菌制剂的无菌检查法一、微生物检验分类一、微生物检验分类内容内容无菌检查无菌检查微生物限度检查微生物限度检查微生物总数检查微生物总数检查控制菌检查控制菌检查细菌数检查细菌数检查霉菌和酵母菌检查霉菌和酵母菌检查大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群沙门菌沙门菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌梭菌梭菌白色念珠菌白色念珠菌非全检，检查种类与非全检，检查种类与剂型、给药途径、原剂型、给药途径、原料来源等有关。料来源等有关。 无菌检查无菌检查l凡直接进
2、入人体血液循环系统、肌肉、皮下组织或接触创伤、溃疡部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、灭菌器具都要进行无菌检查。注射用制剂：注射剂、输液、注射粉针等；眼用制剂：滴眼剂、眼用膜剂、凝胶剂、软膏剂等；植入型制剂：植入片等；创面用制剂：溃疡、烧伤及外伤用溶剂、软膏剂及气雾剂等手术用制剂、止血海绵、骨蜡等二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件检查环境和人员要求环境要求:无菌室内进行。背景洁净度C级下的局部A级(洁净操作台），单向流空气。 操作人员：卫生、着装符合要求。 操作要求：严格遵守无菌操作，严防污染。 二
3、、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件方方法法 由于某些供试品具有抗菌活性，在建由于某些供试品具有抗菌活性，在建立测定方法或原测定法的检验条件发生改立测定方法或原测定法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。进行验证。二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件取取样样量量1 1. .检测用量检测用量所有剂型所有剂型2 2个个最小包装最小包装大蜜丸大蜜丸4 4丸丸膜剂膜剂4 4片片2 2. .检测量检测量半半/ /固体制剂
4、：固体制剂：10g10g液体制剂：液体制剂：10ml10ml膜剂：膜剂：100cm100cm二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件检查菌培养基培养温度培养时间细菌数营养琼脂30353 days真菌数玫瑰红钠琼脂23285 days酵母菌数酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂23285 days控制菌细菌：3035真菌：2328培培养养条条件件二、药品微生物限度检测的基本条件二、药品微生物限度检测的基本条件供试品供试品检出控制菌或其它致病菌时检出控制菌或其它致病菌时，按一次检，按一次检出结果为准，出结果为准，不再复试。不再复试。 供试品的细菌数、霉菌和酵母菌数其中任何一供试品的细菌数
5、、霉菌和酵母菌数其中任何一项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品项不符合该品种项下的规定，应从同一批样品中随机抽样，独立复试两次，以中随机抽样，独立复试两次，以3 3次结果的平均次结果的平均值报告菌数。值报告菌数。 供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项供试品的细菌数、霉菌和酵母数及控制菌三项检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品检验结果均符合该品种项下的规定，判供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。的规定，判供试品不符合规定。 结结果果判判断断第三节第三节 药品微生物限度检测方法药品微生物限度检测方法微生物检验
6、基本流程微生物检验基本流程l1、领取并配制培养基l2、擦拭工作台及墙壁l3、开启紫外灯灭菌1hl4、进行微生物实验l5、实验完成后再次擦拭工作台二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查l1、平皿法数据数据处理处理混合平板混合平板的制备的制备细 菌 、 真细 菌 、 真菌的培养菌的培养检查结果、检查结果、观察与计数观察与计数供试液供试液的制备的制备书写检验书写检验记录单记录单二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查1.1.平皿法平皿法1010-2-21010-2-21010-2-21010-2-21010-3-31010-3-31010-3-31010-3
7、-3倒置培养倒置培养3d3d营养琼脂营养琼脂培养基培养基30353035玫 瑰 红 钠玫 瑰 红 钠琼 脂 培 养琼 脂 培 养基基倒置培养倒置培养5d5d23282328 对照对照对照对照对照对照对照对照1.0ml1.0ml9.0ml9.0ml 稀释液稀释液10g/10g/ml ml 供试品供试品 9.0ml9.0ml1010-2-21010-1-11.0ml1.0ml 9.0ml9.0ml1010-3-31.0ml1.0ml1010-1-11010-1-11010-1-11010-1-11010倍递增稀释法倍递增稀释法二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查10g10g
8、或或10ml10ml 供试品供试品 10101 1供试液供试液取相当于取相当于1g1g或或1ml1ml供试液用滤膜过滤、供试液用滤膜过滤、冲洗冲洗取下滤膜，菌面朝取下滤膜，菌面朝上放培养基上培养上放培养基上培养结果观察结果观察 与计数与计数数据数据处理处理书 写 检 验书 写 检 验记录单记录单2.2.薄膜过滤法薄膜过滤法封闭式薄膜过滤器封闭式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器传统开放式薄膜过滤器二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项1.1.尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成尽量使菌细胞分散开，使每个菌细胞生成一个菌落，否则将会导致重大的技术
9、误差。一个菌落，否则将会导致重大的技术误差。 2.2.为防止细菌增殖及产生菌苔，制为防止细菌增殖及产生菌苔，制成供试液后，应尽快稀释，注皿。成供试液后，应尽快稀释，注皿。一般稀释后应在一般稀释后应在1 1小时内操作完毕。小时内操作完毕。 二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项3.3.使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不使用吸量管时，应小心沿管壁加入，不用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附用触及管内溶液，以防吸管尖端外侧黏附的溶液混入其中。的溶液混入其中。 4.4.注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往注意抑菌现象。由于防腐剂未被中和，往往使平板
10、计数结果受影响，如低稀释时菌落往使平板计数结果受影响，如低稀释时菌落少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情少。而高释释度时菌落数反而增大。遇此情况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操况应重复检验，以确定是防腐剂影响还是操作技术误差。作技术误差。 二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查3.3.操作注意事项操作注意事项5.5.为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，为检查和控制灭菌效果，应做空白对照，以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过以检验所使用的物品是否彻底灭菌及检验过程是否无菌操作。程是否无菌操作。 6.6.为便于区别药品中的颗粒与菌落，可在为便于区别药品中的颗粒与菌落，
11、可在每每100mL 100mL 营养琼脂中加入营养琼脂中加入1mL0.51mL0.5的的TTC TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而药品的颗粒颜色无变化。而药品的颗粒颜色无变化。二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查4.4.菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法 宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在宜选取细菌、酵母菌平均菌落数在30-30030-300之间、霉菌之间、霉菌平均菌落数小于平均菌落数小于100 cfu100 cfu的稀释级，作为菌数报告（取两位的稀释级，作为菌数报告（取两位有效数字）的依据。有效数字）的依据。（1 1）
12、当仅有）当仅有1 1个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的个稀释级的菌落数符合上述规定，以该级的平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数平均菌落数乘以稀释倍数报告菌数; ;当有当有2 2个或个或2 2个以上稀释个以上稀释级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍级的菌落数符合上述规定，以最高的平均菌落数乘以稀释倍数的值报告之。数的值报告之。（2 2）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级）如各稀释级的平板均无菌落生长，或仅最低稀释级的平板有菌落生长，但平均菌落数小于的平板有菌落生长，但平均菌落数小于1 1时，以时，以1 1乘以最低乘以最低稀释倍数的值报告菌数。稀释倍数的值报告菌数。 二、
13、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查例次各稀释级（供试液1ml/皿）平均菌落数（cfu）报告方式(CFU/g,ml，10cm2）原液10-110-210-316482640242064864003不可计4206464000400.50 100500 1006000 107000 14.4.菌落计数及报告方法菌落计数及报告方法细菌总数平均菌落数细菌总数平均菌落数稀释倍数稀释倍数二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查二、细菌数、霉菌和酵母菌数检查l当有两个相邻稀释级的菌落数在当有两个相邻稀释级的菌落数在30-300之间之间比值比值2 2时，则以时，则以2 2个稀释级的平均值报告。比值个
14、稀释级的平均值报告。比值2 2时，则以低时，则以低稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。稀释级的平板菌落数乘以稀释倍数报告。 编号编号各稀释度菌落数各稀释度菌落数比值比值 菌落数菌落数报告数报告数1 101 1021 10322760295461.6377503800022890271602.22710027000高稀释级的平板菌落数高稀释级的平板菌落数*稀释倍数稀释倍数比值比值=低稀释级的平板菌落数低稀释级的平板菌落数*稀释倍数稀释倍数细菌总数检查表细菌总数检查表l培养温度：30-35l培养基名称：营养琼脂培养基（批号：14040901）菌菌 落落 数数 （cfu)稀释度10-110-2培养时
15、间（h)244872244872平皿号123平均菌落数特殊药品微生物限度检验特殊药品微生物限度检验 品品 种种检测项检测项聚维酮碘溶液聚维酮碘溶液氧氟沙星滴耳氧氟沙星滴耳液液盐酸利多卡因盐酸利多卡因胶浆胶浆脑得生袋泡茶脑得生袋泡茶细菌数20cfu/ml20cfu/ml200cfu/g200cfu/g霉菌与酵母菌数20cfu/ml2cfu/ml20cfu/g20cfu/g其它金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠球菌不得检出/ml金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠埃希菌不得检出/ml大肠菌群20 cfu /g三、控制菌检查检查项目三、控制菌检查检查项目（1 1
16、）阴性对照阴性对照试验：取稀释液试验：取稀释液10ml10ml按相应按相应供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。供试品控制菌检查法检查，应无菌生长。（2 2）阳性对照阳性对照试验：供试品试验：供试品+10100CFU +10100CFU 阳阳性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。性对照菌，应检出相应的阳性对照菌。 （3 3）供试品供试品控制菌检查：依相应的检查方控制菌检查：依相应的检查方法进行。法进行。 三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程供试品供试品增菌培养增菌培养分离培养分离培养纯培养纯培养染色镜检染色镜检生化反应试验生化反应试验报告结果报告结果三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程1.1.增菌培增菌培养目的养目的使被检药物中的使被检药物中的被检菌增殖，避被检菌增殖，避免出现漏检。免出现漏检。三、控制菌检查检查流程三、控制菌检查检查流程2.2.分离培分离培养目的养目的经增殖培养后经增殖培养后, ,被检菌大被检菌大量繁殖，同时其他一些量繁殖，同时其他一些杂菌也出现增殖。因此杂菌也出现增殖。因此分离培养能使目的菌从分离培养能使目的菌从混合菌中分离出来。混合菌中分离出来。三、控制
