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1、异养硝化-好氧反硝化菌协同竞争对脱氮特性的影响与自养硝化菌和厌氧反硝化菌相比，异养硝化-好氧反硝化菌具有世代周期短、生长迅速、可耐受低溶解氧和高有机负荷、对环境的适应能力强的特点，使其在污水处理方面很有前景.不同的异养硝化-好氧反硝化菌对氮素的去除能力不同，有些去除NH4+-N能力强，有些去除N02N和N03N能力强，因此，可以利用菌群之间共生、协同等作用提高水体中氮素的去除率.司文攻等对筛选的多株异养硝化菌开展简单混合，初步研究了复合菌株在异养硝化过程中对NH4+-N的去除率，但并没有进一步研究菌株之间的协同与竞争，也未对复合菌株的反硝化脱氮特性开展研究.该研究以筛选出的高效异养硝化-好氧反
2、硝化菌为对象，考察单菌株和复合菌株的脱氮特性，探讨混合异养硝化-好氧反硝化菌群之间的协同竞争，以期丰富生物脱氮理论并且为提高污水脱氮效率提供一定的技术参考.1材料与方法1. 1菌源试验污泥取自*市大坦沙污水处理厂A2/0工艺，分别用异养硝化和好氧反硝化培养基通过平板划线的方式得到三株异养硝化-好氧反硝化菌XHo2、XH03和FX03.L2培养基异养硝化培养基(g/L)：(NH4)2S040.50g,柠檬酸三钠3.46g,维氏盐溶液50mL,CN=8,加水溶解,补充蒸储水至1L,pH=7.5.好氧反硝化培养基(g/L)：KN030.77g,柠檬酸三钠3.46g,维氏盐溶液50mL,CN=8,加水
3、溶解，补充蒸储水至1L,pH=7.5.维氏盐溶液(g/L)：K2HP045.0g,MgS047H202.5g,NaC12.5g,MnS044H200.05g,FeS04-7H200.05g.LB培养基(g/L):蛋白豚10.0g,NaCl10.0g,牛肉膏3.0g,加水溶解，补充蒸偏水至1L,pH=75,用于菌株活化.以上所有培养基均在0.llMPa、121下灭菌30min,冷却后备用.L3试验方法L3.1菌株的系统发育分析菌株XH02.XH03和FX03基因组DNA的提取以及16SrDNA的PCR扩增和测序均由*生工生物工程技术服务公司完成.将其基因序列提交至GenBank开展Blast检索
4、，然后用MEGA6.0软件，以Neighbor-Joining法构建系统发育图.1. 3.2异养硝化和好氧反硝化特性的测定试验种子培养液：挑取XHO2、XH03和FX03单菌落分别接种于装有IOOmLLB培养基的25OmL锥形瓶中，30、150rmin下摇床振荡培养8h,取出IOmL菌悬液以4000rmin离心5min,弃去上清液，取5mL无菌水将细菌混匀洗涤一遍，再离心，弃去上清液，取2mL无菌水，将留在离心管底部菌体悬浮混匀后全部转移到装有50mL无菌水的IOOmL锥形瓶中，混匀，作为菌株的种子培养液.菌株组合方案：在无菌条件下分别取各菌株的种子培养液，按表1所示方案中对应的接种量分别接种
5、于异养硝化和好氧反硝化培养基中，于30。(2、150rmin下培养72h,每隔12h检测培养液中菌体生长量(A600)、P(TN).P(NH4+-N)、P(NH2OH)、P(NO3N)和P(N02N)的变化，测定P(NH4+-N)、P(No3N)、P(NO2N)和P(NH20H)时，均用经离心后细菌培养液的上清液，测定P(TN)时则用细菌悬浊液.2. 2单菌株的脱氮特性2. 2.1单菌株的异养硝化特性菌株XH02的异养硝化过程见图2(a).由图2(a)可见，XH02菌在24h内的生长速率最快，A600在第36小时到达最大值(L27),之后长时间处于稳定期，随着菌体的增殖过程,反应体系中P(NH
6、4+-N)和P(TN)从反应前的101.68和104.83mgL降至9.96和20.71mgL,NH4+-N和TN的去除率分别为90.2%和80.2%.异养硝化过程中NH20H一直存在，呈现出先升后降的趋势，第24小时到达最大值(41.06mgL),随着反应开展又逐渐降解，在第72小时NH20H基本完全降解.反应体系中不产生N03N和N02N.菌株XH03的异养硝化过程见图2(b).由图2(b)可见，在24h内，菌体大量生长繁殖，之后逐渐生长缓慢,在第36小时A600到达最大值Q23)第24小时菌株对NH4+-N的去除率为89.5%,对TN的去除率为84.3%.异养硝化过程中，没有检测到NH2
7、0H.菌株FX03的异养硝化过程见图2(C).由图2(C)可见，第24小时NH4+-N和TN的去除率分别为90.6%和71.5%在第36小时A600到达最大值(L19).反应过程中，检测到有NH20H和NO3-N产生，P(NH20H)在第24小时到达最大值(2373mgL),P(N03N)在第36小时到达最大值(25.72mgL),随着反应开展NH20H和N03N在第72小时基本完全降解.2.2.2单菌株的好氧反硝化特性菌株XH02的好氧反硝化过程见图3(a).由图3(a)可见,XHo2在1224h内生长较快,A600在第36小时到达最大值1.14.第24小时P(NO3N)和P(TN)从反应前
8、的101.07和102.27mgL降至8.26和17.28mgL,去除率分别为91.8%和83.1%.反应后期检测到有NH4+-N产生，P(NH4-N)最大值为L02mgL.图2菌株的异养硝化过程图3菌株的好氧反硝化过程菌株XH03的好氧反硝化过程见图3(b),由图3(b)可见，在第24小时N03N和TN的去除率分别为94.0%和90.2%,在2472h内P(N03N)和P(TN)基本保持不变.A600在第36小时到达最大值(1.20),在第72小时降至1.07.由图由C)可知,菌株FX03在第24小时对N03N和TN的去除率分别为63.7%和60.3%,在第36小时A600到达最大值(0.7
9、8).反应体系中P(NH4+-N)的变化范围为0.523.61mgL.菌株XH02.XH03和FX03的好氧反硝化过程中，P(N02N)分别低于4.37、2.32和L62mgL,与各自空白样对照，均无显著性差异(P005).2. 3复合菌株的脱氮特性2. 3.1复合菌株的异养硝化特性复合菌株XH02+XH03、XH02+FX03、XH03+FX03和XH02+XH03+FX03的异养硝化过程见图4.由图4(a)可见，复合菌株XH02+XH03在第24小时对NH4+-N和TN的去除率分别为97.1%和87.6%,在第36小时A600到达最大值(L34).反应过程中P(NH20H)在第36小时到达
10、最大值，无N03N和N02N的产生.复合菌株XH02+FX03的异养硝化过程见图4(b),由图4(b)可见,NH4+-N和TN的去除率在第24小时到达81.5%和66.3%,在第36小时A600到达最大值(Lo4).反应过程中P(NH20H)和P(No3N)在第36小时都到达最大值,分别为22.34和15.29mgL,在第72小时NH20H和N03N基本完全降解.由图4(C)可见，复合菌株XH03+FX03在24h内快速生长,A600在第36小时到达最大值(0.90),在第24小时对NH4+-N和TN的去除率为75.7%和54.9%.反应过程中P(NH20H)在第24小时到达最大值(12.27
11、mgL),P(N03N)在第36小时至U达最大值(1529mgL).复合菌株XH02+XH03+FX03的异养硝化过程见图4(d).由图4(d)可见，在第24小时对NH4+-N和TN的去除率分别为84.分和72.7%,在第36小时A600到达最大值(1.18).反应过程中P(NH20H)和P(N03N)在第36小时到达最大,在第72小时基本完全降解.2. 3.2复合菌株的好氧反硝化特性复合菌株XH02+XH03的好氧反硝化过程见图5(a).由图5(a)可见，24h内菌体生长快速，A600在第36小时到达最大值(1.28).P(N03N)和P(TN)在第24小时从反应前的101.07和102.2
12、7mgL降至4.26和9.27mgL,去除率分别为96.7%和90.6%.反应过程中P(NH4+-N)低于0.88mgL.由图5(b)可知，复合菌株XH02+FX03对N03N和TN去除率在第24小时分别为54.7%和45.1%.第36小时A600到达最大值(092).反应过程中，P(NH4+-N)的变化范围为0.640.88mgL.复合菌株XH03+FX03的好氧反硝化过程见图5(c).由图5(C)可见，在第24小时对N03N和TN的去除率为52.3%和42.1%.A600在第36小时到达最大值(0.85).反应过程中P(NH4+-N)低于1.89mgL.由图5(d)可见，复合菌株XH02+
13、XH03+FX03在第36小时的A600到达最大值(L02),在第24小时N03N和TN的去除率为75.5%和65.3%.反应过程中P(NH4+-N)较低.复合菌株XH02+XH03.XH02+FX03、XH03+FX03和XH02+XH03+FX03在好氧反硝化过程中P(N02N)分别低于L87、L87、2.04和3.17mgL,与各自的空白样对照，均无显著性差异(P0.05).2. 4菌株间脱氮特性的比照2. 4.1菌株间异养硝化特性的比照以NH4+-N为底物时，单菌株和所有复合菌株在第24小时对NH4+-N和TN的去除率均到达最大值，在第36小时A600到达最大值，因此，选择第24小时对
14、NH4+-N和TN的去除率及第36小时的A600比较菌株间的异养硝化特性.由图6可见，菌株XHo2、XH03和FX03对NH4+-N的去除率无显著性差异(P005).复合菌株XH02+XH03、XH02+FX03、XH03FX03和XH02XH03+FX03对NH4+-N的去除率均有显著性差异(P0.05).复合菌株XH02+XH03+FX03对TN的去除率高于XH02+FX03和XH03+FX03.菌株XH02和XH03的A600无显著性差异(P0.05),FX03与XHo2、XH03有显著性差异.3讨论3. 1单菌株的脱氮过程以及高效脱氮特性Ridson等研究说明，NH4+-N可以通过两种
15、途径转化为气态氮：NH4+-NfNH20HfNo2NfN0-3-N,然后再复原为气态氮；NH4+-NfNH20H-N0fN20-N2,直接产生气态氮，通过生物脱氮作用不会产生N03-N和N02N.菌株XH02的硝化过程产生NH20H,不产生N03N,并且NH4+-N和TN大大降低，因此，菌株XHO2去除NH4+-N应由途径完成，这与菌株YTo和WXZ-4的脱氮途径一样.菌株XH03在硝化过程中对NH4+-N和TN的去除率较高，无N03N的产生，它的脱氮应由途径完成.菌株FX03的硝化过程中，有N03N的产生，其脱氮应由途径完成的.菌株XHo2、XH03和FX03在异养硝化和好氧反硝化的过程中都
16、不产生N02N,这与好氧反硝化菌DL-23脱氮过程积累大量N02N不同.由于N02-N具有致癌性，所以菌株脱氮过程中不产生N02-N对生物脱氮具有重要意义.3个菌株在好氧反硝化过程后期都检测到少量NH4+-N的产生，这与HE等的研究中反硝化过程产生少量NH4+-N的结果相一致.当碳源为柠檬酸三钠、氮源为（NH4）2S04或KN03并且其初始质量浓度为100mgL左右时，菌株XH02在第24小时对NH4-N和N03N的去除率均到达90%以上.李紫惠等研究发现，在氮源初始质量浓度为250mgL左右时，菌株XH02对NH4+-N和N03N的去除率在第24小时只能到达80%左右，因此，氮的初始浓度会影响
