酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书.docx

上传人:p** 文档编号:333658 上传时间:2023-06-02 格式:DOCX 页数:2 大小:20.39KB
下载 相关 举报
酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书.docx_第1页
第1页 / 共2页
酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书.docx_第2页
第2页 / 共2页
亲,该文档总共2页,全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述

《酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《酸性磷酸酶ACP活性测定试剂盒说明书.docx(2页珍藏版)》请在第壹文秘上搜索。

1、酸性磷酸酶(ACP)活性测定试剂盒说明书微量法IOOT/48S注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。渊定意义:ACP在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP常用于前列腺癌的辅助诊断。漏定原理:在酸性环境中,ACP催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚,在405nm有特征光吸收;通过测定405nm吸光度增加速率,来计算ACP活性。自备仪器和用品:酶标仪、96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸健!水。试剂组成和配制:试剂一:液体60mLx2瓶,4保存。试剂二:液体50mLx1瓶,4保存。试剂三:液体50mLx1瓶,4保存。粗胸液提取:1

2、.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:510的比例(建议称取约0.1g组织,加入ImL试剂一)进行冰浴匀浆,4、IOooog离心Iomin,取上清液待测。2 .细菌或细胞:按照细菌或细胞数量(IO4个):试剂一体积CmD为50(MOOO:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4,离心IOmin,取上清置于冰上待测。3 .血液可直接测定,或者适当稀释后测定。测定:I.酶标仪预热30min,调节波长到405nmn2.在EP管中加入下列试剂试剂名称(UL)测定管对照管样本1010试剂一90

3、990试剂二90030避光保温30min试剂三400400混匀,吸取2(X)L加入96孔板中,405nm下测定各管吸光值。AA=A测定管-A对照管。注意:每个测定管需做个对照管。ACP活性计算:标准曲线y=73336x+0.0179:R2=0.9996;X为标准品浓度(molmL),y为吸光值AA。1 .血液中ACP活性计算活性单位定义:30C中每亳升血液每分钟催化产生1mol4-硝基苯酚定义为I个酶活单位。ACP活力(molminmL)=(A-O.OI79)7.3336V反总V样=0.4545(A-0.0179)2 .组织、细菌或细胞中ACP活性计算(1)按照蛋H浓度计算活性单位定义:30*

4、C中每克克蛋白每分钟催化产生1mol4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。ACP活力(molminmgProl)=(A-0.0179)7.3336V反总T(V样XCPr)=0.4545(A-0.0179)Cpr(2)按照样本质量计算活性单位定义:3().C中每克组织每分钟催化产生1mol4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。ACP活力(molming鲜重)=(AA-0.0179)7.3336xV反总(WxV样:V样总)=0.4545(A-0.0179)W(3)按照细菌或细胞数量计算活性单位定义:30C中每IO1个细菌或细胞每分钟催化产生1mol4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。ACP活力30101加足/10

5、t41)=(-0.0179户7.3336丫反总?门(细胞数量XV样+V样总)=0.4545(A-0.0179)细胞数量V反总:反应体系总体积(mL),1mL;W:样品质量,g:V样:加入反应体系中样本体积(mL),0.01mL;V样总:提取液体积,1mL;T:反应时间(min),30min;500:细胞或细菌总数,500万。注意项:ACP不稳定,尤其在37C和PH大于7的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备;血清样品中,每毫升血清中加入IOmg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠,使PH降至6.5以下,或5ml血清加入30%醋酸溶液23滴,置于4C可保存1周。优利科(上海)生命科学有限

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索

当前位置:首页 > 医学/心理学 > 神经内外科

copyright@ 2008-2023 1wenmi网站版权所有

经营许可证编号:宁ICP备2022001189号-1

本站为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。第壹文秘仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知第壹文秘网,我们立即给予删除!