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1、西瑞香素的提纯、含量测定及其药理活性研究进展曹井龙I刘健I李艳楠I薛慧L罗英花2,金成浩产I黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆2黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆【摘要】中草药了哥王是瑞香科茏花属植物，常用于治疗痈肿、瘁腮、关节炎以及支气管炎等病症，西瑞香素是了哥王的主要活性成分，属于香豆素类化合物，具有抗炎、抗抑郁、抗肿瘤等多种药理活性。现将西瑞香素的提取纯化工艺、含量测定方法以及药理活性研究进行综述，为西瑞香素提纯工艺的优化、含量测定技术的完善以及进一步临床应用提供理论参考。【关键词】西瑞香素；提纯工艺；含量测定；药理活性【基金项目】中央支持地方高校改革发展基金人才培养项目
2、(2020GSP16)【收稿日期】2023年2月1日【出刊日期】2023年2月14日【DOI】10.12208/j.imrf.Researchprogressinpurification,contentdeterminationandpharmacologicalactivityofdaphnoretinJinglOngCao1,JianLiu1,YannanLi1,HuiXuei,YinghuaLuo2,ChenghaoJinlilCollegeofLifeScience&Technology,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversity,Daqing,Hei
3、longjiang2CollegeofAnimalScience&veterinarymedicine,HeilongjiangBayiAgriculturalUniversityDaqingHeilongjiang(AbstractChineseherbalmedicineWikstroemiaindicaisaplantofthefamilyIhymelaeaceae,whichisoftenusedtotreatcarbuncleswelling,mumps,arthritis,bronchitisandotherdiseases.Daphnoretinisthemainactivein
4、gredientofWikstroemiaindica,whichisacoumarin-likecompoundandhasavarietyofpharmacologicalactivities,suchasanti-inflammatory,antidepressantandanti-tumoractivities.Inthispaper,theextractionandpurificationprocess,contentdeterminationmethodsandpharmacologicalactivitiesofdaphnoretinwerereviewed,soastoprov
5、idetheoreticalreferencefortheoptimizationofpurificationprocess,theimprovementofcontentdeterminationtechnologyandfurtherclinicalapplicationofdaphnoretin.Keywordsdaphnoretin;purificationtechnology;contentdetermination;pharmacologicalactivity第一作者简介：曹井龙(1996-)男，汉族，硕士研究生，主要从事中草药活性物侦制备工艺研究。“通讯作者：金成浩(1977-
6、)男，朝鲜族，教授，博导，主要从事抗癌药物制备工艺及其药理活性研究。,、4-刖百了哥王(W汰StroemiaindicaC.A.Meyer)又名南岭第花、山棉皮、小金腰带、桐皮子等，是瑞香科莞花属植物，广泛分布于我国长江以南以及东南亚地区，了哥王是苗族民间常用的中草药，其果实、根部及根皮均可入药，常用于治疗风湿痛、关节炎、毒疮以及百日咳等疾病【L西瑞香素(DaPhnorelin)是从中药了哥王中最早提取出的活性成分，属于香豆素类化合物，其化学名为7-羟基-6-甲氧基-3,为淡黄色针状晶体，其密度与沸点分别为1.5g/cn?、639.6oC,易溶于氯仿、甲醇、DMSo等有机溶剂。研究表明，西瑞香
7、素具有良好的抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。在西瑞香素的制备工艺中，其提纯工艺与含量测定技术对其产品质量至关重要。本文对西瑞香素的提纯、含量测定以及药理活性进行综述，以期为西瑞香素的基础研究及进一步开发应用提供参考。1西瑞香素的提取纯化天然药物含有多种有效成分，对其有效成分的提取纯化可提高天然药物的内在质量，使天然药物的效果得以最大限度的发挥。随着现代化工业技术的发展，中草药有效成分的现代化提纯工艺不仅使药材资源得到充分利用，还可提高产物质量与提取效率，有助于进一步的研究与应用。在西瑞香素的提取研究中，赖红芳等人通过超声提取法将了哥王根茎粉末与乙静混合后进行提取，利用大孔树脂进行分离纯化得到
8、产物，利用高效液相色谱测定其产物含量，采用静态吸附与动态吸附结合的方法优化其提取工艺，其最佳洗脱条件、洗脱速率以及树脂型号分别为90%乙醇、1.5mLmin、HPD600o该方法通过优化吸附与解吸纯化工艺，使大孔吸附树脂纯化西瑞香素的效率与质量极大提13,o杨振宇等人通过试剂萃取法将了哥王依次经石油酸、乙酸乙酯、饱和正丁醇萃取，利用硅胶柱层析分离得到产物，利用薄层色谱法与高效液相色谱法测定其产物含量，采用面积归一化法计算西瑞香素的纯度为99.75%。该方法不仅减少试剂消耗、提高回收效率，还可提高产物纯度。冯果等人通过渗漉法将了哥王粉末与乙醇混合后进行萃取，采用高效液相色谱法测定产物含量，应用单
9、因素试验与正交试验对该提取法进行优化，其最佳渗漉溶剂、料液比、渗漉速度分别为70%乙醇、1:14、5mL(minkg)o该方法优化西瑞香素渗漉法提取的工艺条件，具有提取效率高、重复性好以及产物稳定等优点。刘阳等人通过乙醇萃取法将瑞香狼毒粉末与乙醇混合后进行萃取，采用高效液相色谱法测定瑞香狼毒中西瑞香素的含量，并用乙腌与1%冰乙酸作为流动相梯度洗脱得到产物，应用响应面分析法优化西瑞香素的提取工艺，其最佳料液比、乙醇浓度及柱温分别为7.5:1、90%、30o该方法具有提取效率高、产物质量优、操作简便等优点。以上方法可使西瑞香素的提纯效率与质量大大提高，为西瑞香素提纯技术的改良与探索提供了理论参考。
10、2西瑞香素的含量测定天然药物有效成分的含量测定是药品质量把控的第一步，明确提取原料与产物中有效成分的含量,可为用药剂量与提取原料选取提供数据参考。由于各提取物间存在理化性质差异，因此含量测定方法的选择至关重要，应根据不同产物的理化性质选择合适的含量测定方法，以此保证含量测定结果的可靠与准确。在西瑞香素的含量测定方法研究中，冯果等人通过高效液相色谱法测定中药了哥王中西瑞香素的含量，将了哥王经与乙醇混合后经过超声辅助处理得到产物，采用高效液相色谱法测定产物含量，其了哥王中西瑞香素的含量为43.62mg/g。该方法具有较高重复性与准确性，适用于中药了哥王中西瑞香素含量的测定，为了哥王的提取与加工提供
11、数据参考。王瑞等人通过高效液相色谱法测定不同产地芫花根皮药材中西瑞香素的含量，将芫花根皮粉末与甲醇混合经过超声辅助萃取得到产物，采用高效液相色谱法测定产物含量，结果发现河南产地的芫花根皮中西瑞香素含量最高，其数值可达5.41%o该测定方法具有高重复性、高准确性以及高效性等优点，适用于芫花根皮中西瑞香素的含量测定。李刚等人通过高效液相色谱法测定中药罗汉参中西瑞香素的含量，将罗汉参粉末与乙醇混合经过超声水浴处理得到产物，采用Ci8反向色谱柱分离并测定最终产物含量为006ggo该测定方法具有较高的精准度与灵敏度，适用于罗汉参中西瑞香素的含量测定U3。熊友香等人通过高效液相色谱法测定不同产地了哥王中西
12、瑞香素的含量，将了哥王粉末与乙醇浸泡经过蒸汽回流处理得到产物，采用高效液相色谱法测定各产物含量，结果发现江西产地的了哥王中西瑞香素百分含量最高，其数值为0.6555%。该测定方法具有操作简便、重现性好以及测量准确等优点，适用于不同产地了哥王中西瑞香素的含量测定HL沈沫凡等人通过高效液相色谱法测定了哥王中不同部位的西瑞香素含量，将了哥王不同部位粉末与甲静混合进行水浴回流提纯，采用高效液相色谱对各样品进行含量测定，结果发现了哥王药材根、茎、细枝、叶中西瑞香素的平均含量分别为0.093%、0.132%、0.096%、0.414%。该测定方法具有高重复性与准确性，适用于了哥王不同部位西瑞香素的含量测定
13、U%以上测定方法可高效、准确地测定西瑞像素的含量，为西瑞香素测定技术的优化与改良提供了理论依据。3西瑞香素的药理活性研究3.1 西瑞香素的抗肿瘤活性据国家癌症中心最新的统计数据显示，我国每年因癌症死亡数占总死亡数比例的1/4,严重危害我国人民健康和生命。目前肿瘤治疗方法以手术治疗、化学药物治疗以及放射治疗为主，其中化学药物治疗在癌症晚期发挥着重要作用，但其存在药效不理想、毒副作用强、价格昂贵等诸多问题，而且长期使用会使机体产生耐受性继而导致癌症的复发，因此寻找高效、安全、价廉的药物迫在眉睫。在西瑞香素的抗肿瘤活性研究中，颜红等人研究发现，西瑞香素以浓度与时间依赖性的方式抑制人肝癌HepG2细胞
14、的增殖,且可诱导该细胞凋亡与G0/G1期阻滞，说明西瑞香素可通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期，进而抑制肝癌HepG2细胞的增殖，最终发挥抗肿瘤作用1周。姜洪芳等人研究发现，西瑞香素可抑制人肺癌A549细胞的迁移。进一步的机制研究发现，西瑞香素可抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达水平，且呈浓度和时间依赖性，说明西瑞香素可通过调控MMP-2、MMP-9蛋白表达水平，进而抑制人肺癌A549细胞的侵袭及迁移。张玉静等人研究发现，西瑞香素以浓度与时间依赖性的方式抑制人神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)的增殖。在进一步的机制研究发现，西瑞像素可使SH-SY5Y细胞的线粒体膜电位下降，进而诱导细胞
15、凋亡。在西瑞香素对SH-SY5Y细胞周期与迁移的影响研究发现，西瑞香素可诱导SH-SY5Y细胞周期中的S期阻滞，且具有良好的抑制癌细胞迁移的作用，说明西瑞香素可通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期以及抑制癌细胞迁移等方式，抑制SH-SY5Y细胞的体外增殖【叫Yu等人研窕发现，西瑞香素以浓度与时间依赖性的方式抑制人结肠癌HCTl16细胞的增殖，且可诱导该细胞发生凋亡，并增加BaxBcl-2cleaved-caspase-3/pro-caspase-3cleaved-caspase-9pro-caspase-9的蛋白表达比例，降低p-P13Kp-AKT蛋白的表达水平，此外，西瑞香素可阻滞HCTl16细胞
16、周期中的G2/M期，且具有良好的抑制癌细胞迁移的作用，说明西瑞香素可通过调控AKT信号通路，诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期以及抑制细胞迁移,进而抑制HCTl16细胞的增殖1皿。以上结果表明，西瑞香素具有良好的抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、阻滞肿瘤细胞周期、抑制肿瘤细胞迁移等作用。3.2 西瑞香素的抗炎活性炎症作为一种常见的病理过程可导致多种并发症，其诱发因素复杂，是众多慢性病的源头。癌症疾病与炎症疾病具有密切关联性，研究发现约76%的癌症是由炎症疾病所诱发，因此寻找高效、安全的抗炎药物是亟需解决的问题。在西瑞香素的抗炎活性研究中，冉延涛等人通过酶联免疫吸附剂测定法检测西瑞香素对THP-I细胞分泌的炎症因子表达水平影响，结果发现西瑞香素可降低MCP-1、IL-Ip、IL-6及TNF-蛋白的表达水平。该实验从分子水平上验证了西瑞香素在人体炎症细胞中的作用机制，为后续西瑞香素的抗炎机制研究提供了理论基础“
