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1、水曲柳腋芽增殖微繁技术规程1范围本标准规定了水曲柳（X7力USJnandshuricaRupr.）腋芽增殖微繁的外植体采集与表面消毒、培养基选择及配制、组织培养程序、组培苗移栽、苗期管理和生产档案。本标准适用于水曲柳腋芽增殖微繁。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。1.Y/T1000-1991容器育苗技术1.Y/T1671-2006水曲XX人工培育技术规程1.Y/T1882-2010林木组织培养育苗技术规程3外植体采集与表面消毒3.1 外植体采集选取水曲柳优树
2、当年生X条上带有顶芽或者腋芽的茎节作为组织培养的外植体。3.2 外植体表面消毒以优树X条的茎节顶芽及腋芽作为组织培养外植体，在接种前用洗涤剂浸泡IOnlin之后，流动水冲洗30min,然后转入超净工作XX,以75%乙醇浸泡30s,边泡边摇，灭菌的蒸储水冲洗34遍，每次5min,然后转入0.1%升汞中，边泡边摇2min,再用灭菌的蒸僧水洗4遍，每次5min,取灭菌（121灭菌20min）的刀具、镒子、培养皿，将消毒的茎段放入培养皿中，切去茎节两端变褐部分露出新鲜组织，接入初代培养基中培养。4培养基选择及配制4.1 培养基母液的配制及保存按照LY/T1882-2010中4.1培养基母液配制及保存的
3、规定进行。4.2 培养基的灭菌按照LY/T1882-2010中4.2培养基的配制、灭菌及保存的规定进行。4.3 初代培养基WPM固体培养基，附加20gI?蔗糖、7gLX脂和lmgL6-BA,PH为5.86.培4.4 继代和分化培养基继代培养基1为WPM液体培养基,附加30gI蔗糖和0.6mgLTDZ(pH=5.86.0)；继代培养基2为WPM固体培养基，附加30gl?蔗糖、0.05mgL,TDZ.0.6mgL,BA和7gLIX脂(pH=5.86.0)；芽分化增殖培养基为基M固体培养基,附加芽gI?蔗糖、LOmgLZT和7gLX脂(PH=6.06.5)O4.5 生根培养基生根培养为WPM固体培养
4、基，附加20gl?蔗糖、L4mgLTIBA、0.7哨1?NAA和7gLX脂(PH=5.86.0)o5组织培养程序5.1 植物组培条件温度252C,湿度60%70%,光周期为光16h暗8h交替培养；黑暗条件下液体诱导腋芽萌发时摇床转速为60rpmmin,;光照条件下光照强度为80UmoI疝飞。5.2 初代培养顶芽和茎节外植体经初代培养基中诱导腋芽启动萌发和生长,光照条件下培养一个继代(2030d)o5.3 继代和分化增殖培养将初代培养诱导形成新芽，接种到继代培养基1,在摇床上暗培养一个继代(2030d),摇床转速为60rpmmi;转入继代培养基2上，光照条件下培养一个继代(2030d),将长大的
5、新芽连带基部愈伤组织一起转入芽分化增殖培养基继续在光照条件下培养2535d,直至新芽分化。5.4 壮苗生根培养将增殖培养获得的新枝丛完整接种到生根培养基(WPM+1.4mgLIBA+0.7mgLNAA)中，培养2030d后待枝高35cm,基部形成不定根；切下单枝转入生根培养基再次生根，根系长约ICm左右即可移栽。6组培苗移栽6.1 移栽基质参照LY/T100oT991中4.1基质成分及配置要求、4.2基质消毒等标准。6.2 移栽环境有喷雾装置和遮荫网的温室大棚内，温度25、湿度90%的环境条件下培养。6.3 移栽程序按照草炭土：蛭石(3：1)的基质混匀后灭菌，装入无纺布育苗袋(口径68cm),
6、用不含蔗糖和X脂的生根培养基(WPM+1.4mgL,IBA+0,7mgL1NAA)浇透。将35cm,带有3个以上主根的半木质化组培苗栽植于上述育苗袋基质中，将其摆放于育苗盒中。将育苗盒置于培养条件为有喷雾装置和遮荫网的温室大棚内，控制在温度25、湿度90%的环境条件下培养，移栽7d后减少喷施水分，经常通风。6.4 生根-移栽程序的简化将生根与移栽两个环节合并，采用生根-移栽一步法。将健壮半木质化组培新枝在无菌条件下从枝丛上切下，转入装有移栽基质的育苗装置中，置于25C,湿度90除光照强度80molm_2.s光16h暗8h的温室中培养，每隔3d浇一次不含蔗糖和X脂的(WPM+1.4mgL1IBA+O.7mgL1NAA)生根培养基，7d后半打开育苗装置，Md后完全打开，保持通风通气，培养30d左右新根、新叶长出。7苗期管理参照LY/T1671-2006中4.4苗期管理标准。经常检查新叶情况，预防病虫害。8生产档案应建立生产档案，内容包括：外植体采集与表面消毒、培养基选择及配制、组织培养程序、组培苗移栽和苗期管理。
