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1、黑穗醋栗组织培养育苗技术规程1范围本标准规定了黑穗醋栗（RibeSnigrUmL）组织培养育苗技术的培养基的制备、消毒灭菌、材料的选择与处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽及生产档案。本标准适用于黑穗醋栗组织培养育苗技术。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T1276农药安全使用规范总则1.Y/T1882-2010林木组织培养育苗技术规程3培养基的制备培养基配制按LY/T1882-2010中规定执行3
2、.1 初代培养基MS+1.0mgL16-B+0.1mgL,IBA+0.5mgLG3+30gL,蔗糖,pH5.8。3.2 继代培养基MS+2.0mgL6-B+0.2mgLdlB+30gLT蔗糖，pH5.8。3.3 生根培养基1/2MS+0.1mgL1IBA+20gL,蔗糖，PH5.8。3.4 培养基保存灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，24C条件下14d内使用。培养基应保存于洁净环境中，注意避光和防尘。4消毒灭菌4.1 材料消毒灭菌将采取的植条用饱和洗衣粉水漂洗10min,流水冲洗2h后置超净工作台上用75%的酒精消毒，无菌水荡洗3次，每次3min,再用0.1%升汞消毒，无菌水荡洗
3、5次，每次3min,最后用无菌滤纸吸干植物材料表面的水分。4.2 培养基灭菌瓶装培养基需在12h内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力LlMPa、温度121C条件下灭菌20mi11o4.3 器具的消毒灭菌剪子、镒子、烧杯等接种器具用高压灭菌锅在压力LlMPa,温度121以下灭菌20min。5材料的选择与处理5.1 材料的选择从生长健壮、无病虫害的母株上选取半木质化枝条、茎尖作为材料。5.2 接种取下培养瓶的封口膜，将培养瓶口和镣子在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒并冷却后，把茎段、茎尖切割成0.5CnI0.8Cm后接种到培养基中，每个培养瓶放3个5个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。6初代培养
4、6.1 培养条件培养室的温度控制在25C土3,空气相对湿度70%80%,光照强度100oLX,光照周期6h/d。6.2培养方法外植体生长约30d左右，高5cm后，剪成LOCm1.2Cln的小段接种到初代培养基中。7继代培养7.1 培养条件培养室的温度控制在253,空气相对湿度70%80%,光照强度2000LX3000Lx,光照周期6hd,7.2 培养方法在无菌操净工作台上，将初代培养30d左右生长健壮的小苗的顶芽或腋芽萌发形成的丛生芽，分割成带单芽的茎段，接种于继代培养基中。每隔25d30d将继代苗转接至相同培养基上继续培养。8生根培养8.1 培养条件培养条件按本标准6.1规定执行8.2 培养
5、方法待继代培养苗长至高度2Cm3Cm时，接种于生根培养基中。9炼苗和移栽9.1 炼苗生根20d左右、根系1.0Cm1.5Cm时，及时移栽。移栽前2d3d先松开瓶口1d后再打开瓶口，置于温度253、通风、清洁的地方，不应阳光直射。9.2 移栽9.3 2.1移植准备选择温度、光照适宜，保温、保湿的温室或塑料棚内进行。选用50孔或70孔穴盘，基质为壤土、草炭土和沙子混合，比例2：1：1。也可选用直径5cm、高5cm的蔬菜育苗钵或塑料营养钵，用500倍800倍敌克松溶液消毒，移栽前浇透水。9.4 .2移栽将组培苗从瓶中取出，放入20左右的水中，将附在根上的培养基洗去，勿伤根系，根系过长的要适当修剪。将
6、清洗后的组培苗用镣子将其栽入准备好的穴盘或营养钵中，栽后及时浇透水。9.3移栽后的管理9.3.1 水份栽后2d3d淋一次水，定植后10d20d内湿度控制在80%-100%,当第一片新叶展开后，此后湿度一直控制在70%左右。9.3.2 温度温度保持在1530oCo9.3.3 光照移栽15d内，光照强度控制在2000LX5000Lx09.3.4病虫害防治主要病虫害防治方法如下：a）白粉病：可采用咤酰菌胺+醛菌脂防治；b）蛛虫：可采用咤虫月米防治。农药使用按GB/T8321和NY/T1276规定执行。10生产档案应建立生产档案。包括：培养基的制备、消毒灭菌、材料的选择与处理、初代培养、继代培养、生根培养、炼苗和移栽、病虫害防治等。
