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1、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）1、原理：采用抗TBS包被反应板，加入待测样本，经孵育后，加入抗-HBs-HRP,当样本中存在HBSAg时，该HBSAg与包被抗-HBs结合并与抗一HBsTRP结合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。2、标本采集与处理：2.1受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。2 .2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐5分钟。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。3
2、 .3采血管：一般采用血清作检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。4 .4标本处理：血清：采血后，室温下自然放置12小时，待血液凝固、血块收缩后，再于3000转每分钟离心15分钟，吸出血清待用。血浆：采血后，样本和抗凝剂轻轻颠倒混匀68次后，充分离心，将血浆与血细胞分离后，吸出血浆待用。5 .5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求（要求密封、无溶血、无杂物）、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问询采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。2. 6标本储存：一般该标本应随到随做，血清和血浆标本在2-8C保存。如需长期保存，可在-20保存，并避免反复冻融。3、试剂：3.1测
3、定试剂：3. 1.1生产厂商：珠海丽珠科技有限公司4. 1.2批准文号：国药准字S109101483. 1.3包装：48Tk96T14. 1.3试剂配置：25倍浓缩稀释液40mlXl瓶HBsAg微孔反应板 HBsAg酶结合物 HBsAg阳性对照 HBsAg阴性对照 显色液A、B液 终止液 封板纸 说明书 4、操作步骤：96孔6.2 mix 1 瓶1.0 InIOI 瓶LonllXl 瓶 各 8.0 mix 1 瓶7 ml X 1 瓶5片1份4.1配液：配制工作浓度洗涤液（以纯化水做25倍稀释）4. 2编号：将样品对应微孔按序编号（共预留阴性对照孔3孔、阳性对照1孔、建议预留空白对照1孔）4.
4、3加样：加入75微升待测样本和阴、阳性对照与反应孔中。4. 4温育：用封片纸覆盖反应板后，置37温育60分钟。4. 5加酶标抗体：取出反应板，撕去封片，在已加入待测样本和阴性、阳性对照孔中加入50微升酶结合物。微孔振荡器或手工轻轻振荡10秒钟。4. 6温育：用封片纸覆盖反应板后，置37温育30分钟。4. 7洗涤：4. 7.1手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。4. 7.2洗板机：将孔内液体甩干。选择5次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。4. 8显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴（50微升），轻轻振荡匀，用封板纸覆盖反应板后，将反应板放置37孵育3
5、0分钟。5. 9终止：每孔加终止液1滴（50微升），混匀。4. 10测定：用酶标仪读数，波长450nm0（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630相近的波长）若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。5：结果判断5.1目测：在白色背景下观察各孔显色情况,有明显黄色者为乙型肝炎表面抗原(HBSAg)阳性；无色者为乙型肝炎表面抗原(HBSAg)阴性。5. 2酶标仪检测：5.2. 1临界值(CUT/OFF)计算：COViCut-OffValUe参考值PC：阳性对照OD值NCx:阴性对照平均OD值。NCx=(NCl+NC2+NC3)3检测有效性：NCx0.kPC
6、21.0,则检测结果有效。COV=NCx+O.100S：待测样品的OD值,S/COV：待测样本和COV的比值。5. 2.2阳性判定：样品OD值SCOV1.0者判为HBsAg阳性。6. 2.3阴性判定:样品OD值SCOV1.0者判为HBsAg阴性。6：注意事项：6.1 从冷藏环境中取出时应室温平衡至室温后方可使用，未用完的微孔条用加有干燥剂的自封袋密封保存。在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。7. 2使用前试剂应摇匀。6.3显色过程必须封片。所有封片纸不能重复使用。6.4结果判断须在反应终止后10分钟内完成。6.5严格按操作步骤进行，不同批次试剂不可混用。6.6洗板机洗板时应时常检
7、查加液头，确保其畅通无阻塞，洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。洗板机的管路用纯化水冲洗，以防阻塞和腐蚀。6.7待测样品不可用NaN3防腐。6.8本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。7：临床意义:检测人血清或血浆样本中的乙型肝炎病毒表面抗原，用于血源筛查及临床乙型肝炎病毒感染的辅助判断。人类免疫缺陷病毒抗体检测(酶联免疫法)试剂一：英科新创(厦门)科技有限公司1 .检测原理本试剂盒采用抗原夹心两步法检测人血清或血浆中的HIVI/HIV2型抗体。在微孔板预包被基因重组HIV（I+2）抗原，当加入的待检测样本中存在HIV抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程H
8、IV（1+2）抗原反应，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫，复合物，加入底物后形成显色反应。2 .标本要求；2.1 采用血清或血浆样本，血浆样本可以使用常规用量的肝素，枸檬酸钠或者EDTA抗凝。2. 2样本不能用叠氮钠防腐，以免抑制酶的活性。3. 3样本保存在28C。如需长期保存，需置-152OC冻存，并避免样本反复冻融。4. 4高血脂，高胆红素及溶血样本可能会影响试验结果的准确性，建议不使用。3.检验方法：3.1 .平衡：将试剂和各组分从盒中取出，平衡至室温（18-25）,微孔板开封后，余者即时以自封袋封存。3.2 配液：浓缩洗涤液配前充分摇匀（如有晶体应充分溶解
9、），浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1：19稀释后使用。3. 3.编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号。3. 4.加样：按顺序分别在相应孔中加入50ul待测样本及阴.阳性对照。3. 5.温育：覆上封板膜，置37温育60分钟。3. 6.洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持3060秒的浸泡时间）。3. 7.加酶：分别在每孔中加酶标抗原30分钟。3. 8.温育：覆上封板膜，置37温育30分钟。3. 9.洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤后扣干（每次应保持3060秒的浸泡时间）。3. 10.显色：每孔加底物A,B和50UL轻拍混匀，37暗置30分钟。3. 11.终止：每孔加入终止液50
10、ul,混匀。5. 12测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450630nm测定各孔OD值（用单波长测定时，需用空白对照孔调零），并记录结果。6. 结果判定；6.1. 样本OD值S/C0工1者为HIV抗体反应初筛阳性样本OD值。者，为HIV抗体反应阴性。4.2.阴性对照OD均值0.1或阳性对照OD均值0.6时，实验无效，应重新试验。初筛阳性者应重新取样进行双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送HIV确认实验室进行相关确认试验。参考值：临界值（C.0.）的计算：临界值二阴性对照OD均值+0.10阴性对照OD均值小于0.05时以0.05计算试剂二：北京万泰生物药业有限公司1 .检测
11、原理本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被高纯度重组HIV（1+2型）抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其他其他试剂，检测人血清或血浆中的HIVT（或）HlV-2型抗体。2 .检验方法：2.1. 配液：将浓缩洗涤液用蒸馀水或去离子水20倍稀释。2.2.编号：将样品对应微孔板按序号编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照1型，2型各1孔，空白对照1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。2.3.加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴性，阳性对照100UL2.4.温育：用封板膜封板后，置371C温育602分钟。2.5.洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干o2
12、.6.加酶：每孔加入酶标试剂100UL空白孔除外。2.7.温育：用封板膜封板后，置371C温育301分钟。2.8.洗板：操作步骤5.2. 9.显色：每孔加入显色剂A,B液各50ul,轻轻振荡混匀，371C避光显色301分钟。3. 10.测定：每孔加终止液50ul,轻轻振荡混匀，10分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450nm600-650nm）,用空白孔凋零后测定各孔A值。4. 检验结果的解释：阴性对照孔A值0.10,阳性对照孔A值20.80,否则实验无效。若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃；若两孔或两孔以上阴性对照A值大于O.L实验无效。阴性判定：样品A值V临界值（
13、CUTOFF）者为HlV抗体阴性。阳性判定：样品A值2临界值（CUTFF）者为HIV抗体阳性（注意：初试阳性应重新取样双孔复试。复试阳性者按全国艾滋病检测技术规范送Hlv确证实验室进行确证实验。）试剂三：珠海丽珠试剂股份有限公司1 .检验原理：本产品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病“1”型和“2”型（HIV-1/HIV-2）抗原包被的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其他试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中的HIV-1/HIV-2抗体。2 .检验方法：2.L加样：将预包被板条固定于板架。每次检验设阴性对照3孔，抗-HIVT阳性对照2孔，抗-HIV-2阳性对照2孔，分别加入阴
14、性，阳性对照各50ul；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品50ul.2.2.温育：置371温育60分钟。2.3.洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置3060秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍手。2.4.加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50UL2.5.温育：置371温育30分钟。2. 6.洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置3060秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍手。3. 7.显色：每孔加入底物缓冲液50ul,振荡混匀，置371C温育30分钟。4. 8.终止：每孔加入终止液50ul,轻拍混匀。2. 9.读值用酶标仪读值，在单波长450nm（须以空白
15、对照孔校零）或双波长450nm620nm-700nm下读取各孔A值。3参考值：2.1. 试剂空白标准：试剂空白A值应0.08（空白校零前）3. 2.阴性对照标准：阴性对照A值应W0.123. 3.阳性对照标准：抗-HIVT阳性对照A值应20.8抗-HIV-2阳性对照A值应20.8临界值(C.O.)计算：临界值(C.O.)二阴性对照平均A值+0.15备注：阴性对照平均A值小于0.08按0.08计算,大于0.08按实际值计算。4结果解释：样品A值2临界值(C.0.)为HIV抗体阳性样品A值W临界值(C.0.)为HlV抗体阴性备注：初次检验阳性者应重新取样进行双孔复试，如果复试中任何一孔为阳性样品视为HlV抗体阳性，对复试结果为阳性的样本请按全国艾滋病检测技术规范处理。
