人类免疫缺陷病毒抗体检测(胶体金法).docx

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1、人类免疫缺陷病毒抗体检测(胶体金法)试剂一:英科新创(厦门)科技有限公司1. 检测原理:采用胶体金免疫技术和层析原理,定性检测人全血,血清或血浆样本中的HIVl/2型抗体。检测阳性样本时,样本中HIV抗体与胶体金标记抗原(大肠杆菌中表达)结合形成复合物,由于层析作用复合物没纸条向前移动,经过检测线时与预包被的重组HIV-Ag(大肠杆菌表达)结合形成金标记重组Au-HIV(1+2)-Ag-HIV-Ab-HIV(1+2)-Agw夹心物而凝聚显色,游离的胶体金标记重组AuTIV(1+2)-Ag则在对照线处与鼠抗HlV单克隆抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色,30分钟内观察结果即可。2检测

2、方法:2. 1血清血浆样本:将待测标本从储存条件下取出,平衡至室温并编号。将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温,打开铝箔包装袋,平置于台面上。用微量加样器取60Ul血清腻味血浆样本,滴加至试剂的加样处。加样后,阳性标本可在130分钟内检出,经过试验确证,反应时间(从加样后计算起)超过30分钟将对实验结果的观察造成影响,因此,建议30分钟内最终观察并记录实验结果。3. 2全血样本:4. 2.1将待测标本从储存条件下取出,平衡至室温并编号。2.2.2将所需数量的测试试剂从包装盒中取出平衡至室温,打开铝箔包装袋,平置于台面上。2.2.3用微量加样器取60U1全血样本,或用试剂盒内所配塑料滴管

3、吸取样本,垂直滴加两滴于试剂的加样处,随即加一滴金标全血样本稀释液。2.2.4加样后,阳性标本可在130分钟内检出。经过试验确证,反应时间(从加样后算起)超过30分钟将对实验结果的观察造成影响,因此,建议30分钟内最终观察并记录实验结果。3.检验结果的解释3.1阳性:测试条/卡在检测区和对照区位置各出现一条紫红色条带。如果检测区的紫红色条带隐约可见,建议对该样本重复试验,并使用其他方法确认。3.2阴性:测试条/卡在对照区位置出现一条紫红色条带。3.3失效:对照区未出现紫红色条带,表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏或者是样本中抗体的含量过高。在此情况下,应再次仔细阅读说明书,并将待测样本稀释

4、后用新的测试条/卡重新测试。如果问题仍然存在,应立即停止使用止批号产品,并与当地供供应商联系。试剂二:广州万孚生物技术股份有限公司1 .检验原理本品利用胶体金免疫层析技术,采用双抗原夹心法检测HlvI/2抗体。当待测样本中含有HIV1/2抗体且抗体浓度等于或高于最低检出限时,HIV1/2抗体先和金标抗原(Ag-AU)形成反应复合物(Ab-Ag-Au),由于层析作用反应复合物沿着硝酸纤维前移动,当遇到检测区(T)包被HIV1/2重组抗原时,形成Ag-Ab-Ag-AU复合物,在检测区上最终形成一条红色反应线,此时结果为阳性;相反,当样本不含HIV1/2抗体或者抗体浓度低于最低检出限时,则检测区无红

5、色反应线出现,此时结果为阴性。质控区(C)包被抗鼠IgG多克隆抗体,与胶体金标记的鼠IgG反应形成红色反应线作为质控。2 .样本要求2.1. 全血、血清、血浆标本均可用于测试。2.2.全血收集:采用抗凝管采血,或在采血管里先加入抗凝剂(抗凝剂种类可为肝素、EDTA、柠檬酸钠成草酸钾),将采集血样加入并摇匀备用。指尖、耳垂末梢或静脉样本采集后应尽量于1小时内进行检测,如不能立即检测,应置于2-8C冷藏,7天以上的全血样本不适用于该试剂。2.3.血清、血浆收集:取血后应尽快分离血清、血浆,以免溶血。分高后的血清、血浆样本应尽快进行测试,如不能及时测试可将样本置4。C冰箱贮存;超过3天应置一20冷冻

6、保存,测试前注意恢复至室温。3.操作步骤3.1.沿铝箱袋切口部位塘开,取出满试卡平放于台面上,并做好标记。3. 2.用吸管吸取血清、血浆样本然后垂直加入3-4滴(约80U)于加样孔中,若样本黏稠不易爬出,可滴加1滴稀释液:若为全血样本,则用吸管吸取全血垂直加入2滴于加样孔中,同时滴加1-2滴稀释液。4. 3.1015分钟观察显示结果;30分钟后显示的结果无临床意义。4. 4.检验结果的解释5. 1.阳性:两条红色反应线,即在检测区(T)及质控区(C)各出现一条红色反应线。4. 2.阴性:一条红色反应线,即仅在质控区(C)出现条红色反应线。5. 3.无效:质控区(C)无红色反应线出现,检测无效,

7、建议此时用新测试卡重就测试。5.注意事项5.1. 本品为一次性体外诊断试剂,过期产品请勿使用。5. 2.应避免实验环境温度过高,低温保存的测试卡需要恢复至室温后再打开,以免吸潮。5. 3.建议使用新鲜血液,勿使用溶血样本。5. 4.WOndfOHlV1/2试剂在检测TP、HBWHCV阳性样本过程中,暂未发现有交叉反应。5. 5.高浓度的黄疸样本(肉眼观察样本溶液外观为黄色)、溶血程度达25%以上的样本或肉眼可见多絮状沉积的乳糜血样本,将对检测结果的判读造成干扰,因此在使用样本前应注意样本的外观。5. 6.如确诊为阳性样本,请与慢病科联系。5. 7.操作时应注意做好安全措施,如穿防护服,戴上手套等。6. 8.用过的测试卡、吸管等在废弃之前去除污染,建议高压蒸汽消毒。

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