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1、天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验原理:(IFCC法)L-天冬氨酸和-酮戊二酸在AST的作用下生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸在苹果酸脱氢酶作用下生成L-革果酸,同时还原型辅酶【(NADH)被氧化为氧化型辅酶I(NAZr),在340nm处测得吸光度呈下降趋势与AST活性成正比。根据NADH吸光度下降程度计算AST的活力单位。试剂内不含磷酸弼哆醛。1.-天冬氨酸+-酮戊二酸谷氨酸+草酰乙酸草酰乙酸+NADH+/T迎L-苹果酸+O2.试剂主要组成成分组成成分浓度Rl3羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH6.1)1OOmmo1/LL-天冬氨酸250mmolL乳酸脱氢酶700UL苹果酸脱氢酶700U
2、L烟酰胺腺喋吟二核甘酸0.18mmolLR23羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH9.7)1OOmmo1/L-酮戊二酸12mmolL3.样本要求:新鲜无溶血血清。在2225保存8小时,28C保48小时,-20C保存7天,样本不可反复冻融!4.检验方法;仪器法(详见DF-603/DI-600标准操作规程)5.参考范围:样本参考范围(U/L)血清8-406.检验结果的解释:6.1 样本含量超出线性范围时,建议用0.9%(WV)的氯化钠溶液稀释样本。6. 2.单位换算:ukatL=UL*16.671037.检验方法的局限性7.1 结果的准确性依赖于仪器的校正和测定温度、时间的控制。7. 2若试剂浑浊,或以水空
3、白在34Onm处吸光度小于LoOO时不能使用。7. 3检验结果仅供参考,不作为临床诊断唯一依据。8.试剂性能指标8.1 试剂外观:无色透明液体,无悬浮物及沉淀。8.2装量:不低于标识值。8. 3试剂空白8.3. 1试剂空白吸光度:在34Onm处,光径ICm时,空白吸光度A2L0008 .3.2试剂空白吸光度变化率:在34Onm处,光径ICm时,Amin0.0049 .4线性区间:试剂的线性区间为10-500UL,在此线性区间内:a)线性相关系数r应不小于0.9900;b)10-50UL区间内,线性绝对偏差不超过5UL;(50-500)U/L区间内,线性相对偏差不超过10机8. 5准确度:相对偏
4、差应不大于15%。8. 6分析灵敏度:在340nm处,光径Icm时,测量W/L的天门冬氨酸氨基转移酶时,吸光度变化4AULmin22Xl(48. 7精密度8.7. 1批内精密度:CV5%8. 7.2批间精密度:R10%9. 临床意义:天门冬氨酸氨基转移酶(AST)亦称谷草转氨酶(GOT)属于转氨酶类,它能够通过氨基转移催化氨基与酮酸之间的相互转换。在人体的很多组织中均能发现AST。但发现此酶在心肌中的活性最大,在脑、肝、胃肌、脂肪组织、骨骼肌以及肾等组织中亦有显著活性。AST存在于细胞的胞浆和线粒体中,在中度组织损伤时,AST占优势的形式是来自细胞质,少量来自线粒体。严重的组织损伤时线粒体酶释放较多。转氨酶增高指示心肌梗死、肝脏疾病、肌营养障碍和组织损伤。