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1、ICS65.100G25(3B中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品中嘴菌环胺残留量的测定气相色谱一质谱法Nationalfoodsafetystandards一DeterminationofCyprodinilresidueinfoods一Gaschromatography-massspectrometry2016-12-18 发布2017-06-18实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会中华人民共和国农业部发布国家食品药品监督管理总局本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草。本标准代替SN/T2235-2008进出口食品中暗菌环胺残留量检测方法气相色谱一质谱法。与SN/T22
2、352008相比，主要变化如下：标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式；标准名称和范围中“进出口食品”改为“食品”；标准范围中增加”其他食品可参照执行”。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T22352008o食品安全国家标准食品中嗜菌环胺残留量的测定气相色谱一质谱法1蹿本标准规定了食品中喀菌环胺残留量的气相色谱一质谱检测及确证方法。本标准适于大米、大豆、小法菜、甜豌豆、梨、柑橘、花生、茶叶、牛肉、鸡肉、虾肉、蜂蜜中嗓菌环胺残留量的检测和确证。其他食品可参照执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引
3、用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中残留的喀菌环胺经正己烷一丙酮(1+1,体积比)提取，用凝胶渗透色谱柱和丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化，气相色谱一质谱检测和确证，外标法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1 试剂4.1.1 正己烷(CeH4):色谱纯。4.1.2 丙酮(C3116):色谱纯。4.1.3 环己烷(CJl)：色谱纯。4.1 .4乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。4.1.5 甲醇(C%OH):色谱
4、纯。4.1.6 氨水(NH3MO):分析纯。4.1.7 盐酸(HC1):分析纯。4.1.8 氯化钠(NaC1):分析纯。4.1.9 无水硫酸钠（NazSOJ：分析纯，650灼烧4h,在干燥器内冷却至室温，储于密封瓶中备用。4.2 溶液配制0.ImoL/L盐酸溶液：量取9mL盐酸，加适量水稀释至IooOmL。4.3 标准品嗑菌环胺（CyProdiniD标准物质：纯度99%,分子式：C4H5N3,相对分子质量：225.3,CAS号:121552-61-2o4.4 标准溶液配制嗜菌环胺标准溶液：准确称取适量的喘菌环胺标准物质，用丙酮配成浓度为100UgmL的标准储备液。根据需要用丙酮稀释至适当浓度的
5、标准工作液。标准储备液在0C4C冰箱中保存，有效期为12个月，标准工作液在0C4C冰箱中保存，有效期为6个月。4.5 材料丙横酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱：3mL500mg,或相当者。5仪器和设备5.1 气相色谱一质谱仪：配有电子轰击源(EI)。5.2 分析天平：感量0.0Ig和0.0001g。5.3离心机：转速5000rmin.5.4 氮吹仪。5.5 旋转蒸发器。5.6 均质器。5 .7固相萃取装置。5.8多功能食品搅拌机。5.9粉碎机5.1()凝胶渗透色谱仪5.11涡旋振荡器。6 试样制备与保存6.1 取样部位田EnC的规定执存、在取样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生喘菌样品取样部位
6、按FGB2763环胺残留量的。6.2 试样制备6.21 茶叶、粮谷类取代表性样约500g,经粉碎机粉碎并通过2.Omm圆孔筛，混匀，装入适净容内密封，标明标记。6.2.2 蔬菜、水果及望果类取代表性样品约5008,切碎，经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入活净容器内密封，标明标记。6.2.3 畜、食、水产品类取代表性样品约50Og,切碎后，用多功能食品搅拌机充分捣碎均匀，装入洁净容器内密封，标明标记。6.2.4 蜻产品类取代表性样品约500g,未结晶的样品将其用力搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖塞紧后，置于不超过60的水浴中温热，等样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。在融化时必须注意防止
7、水分挥发。装入洁净容器内密封，并标明标记。6.3试样保存茶叶、粮谷、蜂产品、坚果类等试样于4C以下保存；蔬菜、水果、畜、禽、水产品类等试样于一18C以下保存。7分析步骤7.1 提取7.1.1 虾肉称取20g（精确至0.0Ig）试样，加入10矶水混匀，加入30mL正己烷一丙酮（1+1,体积比）混合溶液，以IoooOrmin均质0.5min,加入5g氯化钠，摇匀，并于4000rmin离心3min。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入30InL正己烷一丙酮（1+1,体积比）混合溶液，重更提取一次，合并上层有机相，在45水浴中减压浓缩至近千。准确加入10.OmL环己烷一乙酸乙酯（1+1,体积比）溶解残
8、渣，供凝胶色谱净化。7.1.2 蜂蜜称取20g（精确至0.0Ig）试样，加入20mL水混匀，加入30mL正己烷一丙酮（1+1,体积比）涡旋混匀Imin,加入5g氯化钠，摇匀，并于4000rmin离心3min。吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入30mL正己烷一丙酮（1+1,体积比）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在45水浴中减压浓缩至近干。准确加入10.OmL环己烷一乙酸乙酯（1+1,体积比）溶解残渣，供凝胶色谱净化。7.1.3 秫、牲、研J娜O、梨、脚、棉、蛔称取5g（茶叶称取2g）（精确至0.0Ig）试样，加入5mL水混匀（茶叶、大米和花生需放置0.5h）,加入15mL正己烷一丙酮
9、（1+1,体积比）混合溶液,以100oor/min均质0.5min,加入5g氯化钠,摇匀，并于4000rmin离心3min0吸取上层有机相于浓缩瓶中，残渣中加入15InL正己烷一丙酮（1+1,体积比）混合溶液，重复提取一次，合并上层有机相，在45水浴中减压浓缩至近干。准确加入10.OmL环己烷一乙酸乙酯（1+1,体积比）溶解残渣，供凝胶色谱净化。7.2 净化7.21 凝胶色谱净化7.21.1凝胶色谱净化条件a）凝胶净化柱：40OmmX25mm（内径）；填料：Bio-Beads,S-X3,38Um75pm,或相当者（在使用前需先做淋洗曲线）；b）流动相：环己烷一乙酸乙酯（1+1,体积比）；c）流
10、速：5.OmL/min;d）样品定量环：5mL;e）收集时间：20min25min。7.21.2凝胶色谱净化步骤将提取液转移到离心管中，4000rmin离心3min,将上清液转移到凝胶渗透色谱仪的样品瓶中，按7.2.1.1条件净化，将收集液在45以下水浴减压浓缩至近干，加入5疝甲醇溶解后，加入5mL水混匀。7.2.2丙项酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱净化将丙磺酰基甲硅烷基硅胶阳离子交换柱安装在固相萃取装置上，加入5mL甲醉，弃去流出液，再加入5mL0.ImoL/L盐酸溶液，弃去流出液。加入7.2.1所得溶液，加入IOmL甲醉一水（1+1,体积比），弃去流出液，抽真空至尽干，再加入IOnlL氨水一
11、甲醇（5+95,体积比），收集IOnIL流出液。在45水浴中减压浓缩至近千。准确加入0.5mL丙酮溶解残渣并定容，供GJMS检测。7.3雕7.3.1 气相色谱一质谱参考条件a）色谱柱：DB-5ms石英毛细管柱，30m0.25nm（内径），膜厚0.25m,或相当者；b）色谱柱温度：50C（保持Imin）组&皿300（保持10min）:c）进样口温度：250;d）接口温度：280;e）载气：氮气，纯度299.999%;流速：LonILmin;f）进样量：2L;g）进样方式：脉冲不分流进样，脉冲压力25psi,延时0.75min,0.75min后开阀;h）离子源：电子轰击源（EI）;i）电离能量：7
12、0eV;j）溶剂延迟时间：8min;k）检测方式：选择离子监测方式；D选择离子及相对丰度：见表1。1选择离子和相对丰度选择离子，m/z224（定量）225226210相对丰度，%10061.79.011.37.3.2定测定根据样液中喀菌环胺含量的情况，选定峰面积相近的标准十作溶液。标准工作溶液和样液中嗑菌环胺响应值应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积穿插进样检测。在7.3.1规定的条件下，嚅菌环胺的保留时间约为10.5hin,标准品的总离子流色谱图参见图A.1。7.3.3定性测定对标准溶液液均按7.3.1规定的条件进行检察，如果样液与标准溶液在的保留时间有峰出现，则对其进行谱确证
13、，在扣除背数后的样品诸图中，所选择离子全部出现，同时择的离子的离子丰度比与标海关离子的相对丰度一致，波动范围符合表2的最大容许偏差区内表2）,可判定样品中存在略菌环胶，被确证的样品可到定为嗑菌环胺阳性检出、喀菌环胺标难品的质谱图参见图A.2o表2质谱相对离子丰度最大容许偏差单位为百分率相对丰度（基峰）502050（含）1020（含）10允许的相对偏差202530士507.4空白试验除不加试样外，均按7.11.4的规定执行,8结果计算用色谱数据处理软件或按式（1）计算试样中喀菌环胺的残留含量。式中：X试样中嚎菌环胺残留量，单位为亳克每千克(mgkg);A一一样液中嗑菌环胺的峰面积；c一一标准工作
14、液中喀菌环胺的浓度，单位为微克每亳升(HgmL);V-最终样液定容体积，单位为毫升(InL);A,标准工作液中啼菌环胺峰面积；m最终样液所代表的试样量，单位为克(g)。计算结果须扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。99.精密度1在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值(百分率)，应符合附录B的要求。9 .2在再现性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合附录C的要求。10 定量限和回收率定量限本方法的定量限：蜂蜜和虾肉为0.0004mgkg,其他样品为0.（Hmg/kg。回收率附录1样品的添加浓度,回收率和精附录A（资料性附录）色谱图和质谱图A.1噫菌环胺标准物质的总离子流色谱图见图A.1。9876543210987654321喘菌环胺9.0010.0011.12,0013.0014.15.16.17. Lmin图A. 1唯菌环胺标准物质的总离子流色谱图A. 2噫菌环胺标准物质的质读图见图A. 2。响应值70 60 500 0 4(X) (XX) 3000 20 Iooo80 70 600() 50 400 O 300 0 2OOO l000 022477210斐 里 L. 2塔Ia Mr. .g. S9一一度,一一 一50 60 70 80 90 l IIO 120 130 14
