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1、动物的选择动物的选择n 短期植入短期植入（12周以内）周以内）试验首选动物为大鼠、兔。试验首选动物为大鼠、兔。n 长期植入长期植入（12周以上）周以上）可选择兔、狗、羊、山羊、可选择兔、狗、羊、山羊、猪等寿命相对长的动物。猪等寿命相对长的动物。n 我们目前选择的动物为新西兰白兔，体重我们目前选择的动物为新西兰白兔，体重2kgn 对于短期植入，动物选择与植入周期如下：植入周期植入周期植入周期植入周期n对于长期植入，动物选择与植入周期如下：试验目的试验目的n 采用植入后局部反应试验，评估受试物采用植入后局部反应试验，评估受试物植入家兔肌肉组织后的刺激和毒性反应。植入家兔肌肉组织后的刺激和毒性反应。
2、植入样品的制备植入样品的制备1.固体材料（不包括粉剂）固体材料（不包括粉剂）植入物应该经过与最终产品相同的制造、植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程，确保植入物未被损坏处理、清洁和灭菌过程，确保植入物未被损坏并且是无菌的。并且是无菌的。规格要求：长规格要求：长10mm，宽，宽13mm，边缘，边缘光滑。光滑。植入样品的制备植入样品的制备2.非固体材料（包括粉剂、液体、半固体等）非固体材料（包括粉剂、液体、半固体等）植入物应该经过与最终产品相同的制植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程。造、处理、清洁和灭菌过程。无菌条件下将样品填充至两端开口的无菌条件下将样品
3、填充至两端开口的PP、PE、或者、或者PTFE空心小管内，填充物空心小管内，填充物与管口齐平，并防止中间有空气。与管口齐平，并防止中间有空气。对照样品的制备对照样品的制备 对照样品的尺寸、形状、表面条件应尽可对照样品的尺寸、形状、表面条件应尽可能与试验样品一致。能与试验样品一致。对照样品的处理、清洗及灭菌方式应尽可对照样品的处理、清洗及灭菌方式应尽可能与试验样品一致。能与试验样品一致。动物的麻醉动物的麻醉n 10%水合氯醛耳缘静脉注射，水合氯醛耳缘静脉注射，2ml/kgn 氯胺酮肌肉注射，氯胺酮肌肉注射，50mg/kg n 戊巴比妥钠耳缘静脉注射，戊巴比妥钠耳缘静脉注射，30mg/kg n 实
4、际麻醉过程中，由于动物体质状况等的实际麻醉过程中，由于动物体质状况等的差异，需适量调整剂量。差异，需适量调整剂量。n 固定兔，去除背部肌肉上方约固定兔，去除背部肌肉上方约1020cm面积的面积的兔毛。用碘伏和兔毛。用碘伏和75%乙醇清洁暴露皮肤。水合氯醛麻乙醇清洁暴露皮肤。水合氯醛麻醉。醉。n 将载有对照样品的穿刺针与表面皮肤呈将载有对照样品的穿刺针与表面皮肤呈45角插入角插入肌肉，当回抽穿刺针时肌肉，当回抽穿刺针时,用细探针将样品留于肌肉中。用细探针将样品留于肌肉中。每只家兔左侧肌肉植入四个对照样品；右侧直接用样每只家兔左侧肌肉植入四个对照样品；右侧直接用样品肌肉注射四个点，每点品肌肉注射四
5、个点，每点0.2ml。n 较大的不能用穿刺针植入的样品，用外科手术方较大的不能用穿刺针植入的样品，用外科手术方法植入。法植入。n 植入过程中需注意无菌。植入过程中需注意无菌。n 植入完成后注射适量青链霉素防止感染。植入完成后注射适量青链霉素防止感染。植入过程植入过程植入后临床观察植入后临床观察n 植入后每天观察动物的一般状况，如植入后每天观察动物的一般状况，如 精神精神状态、被毛光泽、眼神、反应等。状态、被毛光泽、眼神、反应等。n 植入后每天观察植入点皮肤反应，有无出植入后每天观察植入点皮肤反应，有无出血、红肿、坏死和试验样品排出等异常现象。血、红肿、坏死和试验样品排出等异常现象。n 于四周后
6、，将家兔无痛处死，解剖并观于四周后，将家兔无痛处死，解剖并观察植入部位有无皮下和肌肉异常病变，在低察植入部位有无皮下和肌肉异常病变，在低倍放大镜下观察组织反应（包括出血肿、水倍放大镜下观察组织反应（包括出血肿、水肿、囊肿和增生），并记录。肿、囊肿和增生），并记录。解剖观察解剖观察 取出脊柱两侧肌肉，切取包裹试样周围取出脊柱两侧肌肉，切取包裹试样周围0.51.0cm的肌肉组织，然后放置于的肌肉组织，然后放置于10福福尔马林溶液中固定。尔马林溶液中固定。组织保存组织保存 组织学观察组织学观察n 固定之后，肌肉组织标本经修整、包埋、切固定之后，肌肉组织标本经修整、包埋、切片等步骤，再进行常规片等步骤
7、，再进行常规HE染色。染色。n 于光学显微镜下观察，比较供试品与对照品于光学显微镜下观察，比较供试品与对照品周围的组织反应，纤维囊腔厚度，炎症细胞和其周围的组织反应，纤维囊腔厚度，炎症细胞和其他细胞存在情况及试样他细胞存在情况及试样/组织界面处的其他异常情组织界面处的其他异常情况等。况等。组织学评价体系组织学评价体系评分01234嗜中性粒细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积淋巴细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积浆细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积巨噬细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积巨细胞0极少,1-
8、5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积坏死0轻微轻度重度严重新生血管0局灶性毛细血管增生1-3个小芽4-7支毛细血管增生并有成纤维细胞支持大量毛细血管增生并有成纤维细胞支持毛细血管广泛增生并有成纤维细胞支持纤维化0窄束中等厚度较厚广泛纤维化脂肪浸润0极少脂肪浸润和纤维化少量脂肪浸润和纤维化植入部位大量堆积脂肪细胞脂肪细胞完全包裹植入物phf=每高倍视野（400）评分标准评分标准无刺激0.0 2.9轻度刺激3.0 8.9重度刺激9.0-15.0重度刺激15 样品组得分减去阴性对照组得分即为试验样样品组得分减去阴性对照组得分即为试验样品的最终得分。品的最终得分。参考文献参考文献n医疗器械的生物学评价医疗器械的生物学评价 第第 6 部分部分:植入后局部植入后局部反应试验反应试验ISO 10993-6:2007n医疗器械的生物学评价医疗器械的生物学评价 第第12部分部分:样品制备和样品制备和参照样品参照样品ISO 10993-12:2007n医疗器械的生物学评价医疗器械的生物学评价 第第 2 部分部分:动物保护要动物保护要求求ISO 10993-2:2006谢谢 谢谢
