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第六章第六章基因工程的主要操作原理基因工程的主要操作原理第一节 DNA提取(一)总(一)总DNADNA的提取的提取在在DNADNA提取过程中应做到提取过程中应做到1.大肠杆菌总DNA提取操作步骤2.植物细胞总DNA提取总原则:总原则:(1)CTAB法(2)SDS法3.动物细胞总DNA提取操作步骤(二)质粒(二)质粒DNADNA提取提取1.碱法提取质粒的原理提取的主要步骤细菌的培养细菌的培养细菌的收集和裂解细菌的收集和裂解质粒质粒DNA的分离和纯化的分离和纯化(三)噬菌体(三)噬菌体DNADNA提取提取第二节 RNA的提取(一)动植物总(一)动植物总RNARNA提取提取TrizolTrizol法法 室温放置5分钟,n 室温放置10 min,离心取沉淀n 75%乙醇洗沉淀,干燥(二)(二)mRNAmRNA纯化纯化(三)植物病毒(三)植物病毒RNARNA提取提取第三节核酸电泳1.基本原理2.迁移速率的决定因素 电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围减小电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围减小3.电泳缓冲液4.琼脂糖凝胶电泳5.脉冲电场凝胶电泳abc