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1、实验五 血清总胆固醇测定【实验目的】学习血清总胆固醇测定的实验原理。掌握总胆固醇的测定方法和操作技术。【实验原理】n 血清脂类包括甘油三酯、胆固醇、胆固醇酯、磷脂、糖脂、游离脂肪酸。它们在血液中以脂蛋白（脂和载脂蛋白的复合体）的形式存在。用超速离心技术可把血浆脂蛋白分成四大族：CM、VLDL、LDL、HDL，用电泳技术可把血浆脂蛋白分成-脂蛋白、前-脂蛋白、-脂蛋白、CM。血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇FC和胆固醇酯（CE）两部分。胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA），胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成4-胆甾烯酮和过氧化氢，H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时
2、，经过氧化物过氧化物酶酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。【试剂与器材】1.总胆固醇测定试剂盒 2.酶标板、板条、微量进样器、微量移液器 3.生化培养箱、酶标仪 4.血清【操作步骤】1.配制工作试剂：R1取4.5ml，R2取0.5ml，置于10ml玻璃试管中2.取酶标板1块，板条1条，按下表操作：3.置于37生化培养箱10min，492nm波长处在酶标仪上读取各管的吸光度A。结果与计算 血清总胆固醇=测定管吸光度平均值标准管吸光度平均值标准物浓度【参考值 】：胆固醇胆固醇:血清参考值：3520mmo1/L；危险阈值：520620mmol/L；高胆固
3、醇血症：620mmo1/L。【临床意义】-了解 TC增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性apoB缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。TC降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。【注意事项】胆固醇胆固醇:标本采集：空腹12h采血，避免溶血。可用下列抗凝剂，直至所列浓度对结果没有明显影响，EDTA 25mg/ml；枸橼酸钠50mg/ml；草酸盐50mg/ml；肝素2mg/ml；氟化物10mg/ml。标本保存：血清胆固醇在室温（25）或2-8冷藏可稳定7天，在-20密集冷冻可稳定数月，血浆中胆固醇稳定性同血清。【思考题】一、简述双缩脲法测定蛋白质含量的原理 二、简述血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理 三、简述酶法测定血糖的原理 四、Km的意义？五、简述酶法测定血清总胆固醇的基本原理。
