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1、血片制作染色与疟原虫计数血片制作染色与疟原虫计数血膜的制作血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称呈薄膜状，称薄薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。发热病人血片发热病人血片标本片标本片 血膜的制作（取血时间）血膜的制作（取血时间）n取血时机取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。疟
2、原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断的有期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断的有利时机；利时机；3648小时，可检出裂殖体；发作小时，可检出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。一、二次后，配子体出现较多。n恶性疟较理想的取血时间是在发作后至恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小小时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。时内取血，初发患者退热后常查不到原虫。血膜的制作（取血操作）血膜的制作（取血操
3、作）n取血方法取血方法 采血部位一般人为耳垂，指头，采血部位一般人为耳垂，指头，通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针通常在耳垂取血（现场取血建议用大头针采血，一人一针，避免血传疾病）。先用采血，一人一针，避免血传疾病）。先用75%酒精棉球消毒取血部位（冬季用手酒精棉球消毒取血部位（冬季用手捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精捻动耳垂使其充血后再行消毒），待酒精干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，干后，用左手拇指和食指紧捏耳垂上方，右手持消毒针迅速刺入耳垂下端右手持消毒针迅速刺入耳垂下端12毫米，毫米，不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向不宜过深或过浅。然后用右手中指轻轻向挤压出血。挤压出血。取
4、血量及涂片法（涂片操作）取血量及涂片法（涂片操作）n薄血膜薄血膜 取洁净的载玻片取洁净的载玻片2张，张，1张平置在桌上，以左张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分取约的中点从取血部分取约1微微升的血量（相当于升的血量（相当于1/4火柴火柴头大小），使血滴与平置的头大小），使血滴与平置的载 玻 片 接 触，并 形 成载 玻 片 接 触，并 形 成2530度夹角，待血液向度
5、夹角，待血液向两侧扩展约两侧扩展约2厘米长度时，厘米长度时，均匀而迅速地轻轻向左推出均匀而迅速地轻轻向左推出（约（约2.5厘米长）。厘米长）。（涂片操作）（涂片操作）厚血膜厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约用推片的一角，从取血部位刮取约4微升血微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转接触，再由里向外一个方向旋转，转24圈，涂成圈，涂成直径直径0.81厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。血膜的制作血膜
6、的制作（涂片操作）（涂片操作）n涂制厚、薄血膜的位置涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜通常是将厚、薄血膜涂在一张载片上。方法是将载片分为涂在一张载片上。方法是将载片分为6等分，等分，第第1、2格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第格备贴标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第格前缘至第6格中部。格中部。作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各作为标本的血片每张玻片涂厚、薄血膜各1个个；疟疾调查时，每张玻片疟疾调查时，每张玻片 可涂制可涂制23人血膜。人血膜。标本片标签血膜的制作血膜的制作n血膜编号血膜编号 血膜制成后，立即用特种血膜制成后，立即用特种蜡笔或水
7、笔于玻片面上写上受检者的蜡笔或水笔于玻片面上写上受检者的号码，以防差错，待薄血膜干后再用号码，以防差错，待薄血膜干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号铅笔于薄血膜中写上血片种类的代号和受检者的个人编号，依次顺序插入和受检者的个人编号，依次顺序插入标本盒内。标本盒内。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项 1.玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项n 2.刚涂制的血膜要平放在标
8、本盒内，厚血膜刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。蛋白被其固定，不能溶血或染色效果
9、不佳。制作制作血膜血膜的注意事项的注意事项n 3.血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能夏天标本尽可能2448小时内固定染色；小时内固定染色；冬天也不能超过冬天也不能超过72小时。放置时间越久，小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定不能及时染色，薄血膜宜先用甲醇固定（13分钟）然后用过滤清水对厚血膜分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。后染
10、色。血片的染色血片的染色（一）染液的种类及染色原理（一）染液的种类及染色原理染液种类染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称目前所用的血片染色液，虽然名称很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液两大类，前者包括罗氏、西氏（两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、J.S.B氏染液等，后者包括利氏氏染液等，后者包括利氏(Leishman)、瑞氏和吉氏染液等。这些染、瑞氏和吉氏染液等。这些染液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以称
11、多色性染剂。氧化所成的天青，所以称多色性染剂。血片的染色血片的染色（一）染液的种类及染色原理（一）染液的种类及染色原理染色原理：染色原理：伊红是伊红是酸性酸性水溶性钠盐，美兰是水溶性钠盐，美兰是碱性碱性水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离水溶性盐酸盐，当它们各自溶化水中时，就离解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸解为带阳电和阴电的离子。伊红主要离解为酸性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、性的阳离子，在遇到碱性的蛋白质如血红蛋白、嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的嗜伊红白血球颗粒等即可结合成不易溶于水的沈淀物染成红色。美兰主要离解为碱性的美兰沈淀物染成红色。美兰主要离解为碱性
12、的美兰离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的离子，美兰就与疟原虫、淋巴和大单核细胞的胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合胞浆、嗜碱性白细胞的颗粒等酸性蛋白质结合染成兰色。染成兰色。血片的染色血片的染色（一）染液的种类及染色原理（一）染液的种类及染色原理染色原理染色原理：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞：美兰与伊红都不能使原虫和白细胞的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才的核着色，必须由天青作为媒介（染媒）才能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又能使其着色。天青虽然也是碱性染剂，但又具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来具有染媒作用，使原虫核和白细胞核等原来只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸
13、性染只能染上极淡兰色的结构染上显著的酸性染剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显剂伊红，这样，就使白细胞粗大的核染成显著的既兰又红的紫兰色，而较小的原虫核和著的既兰又红的紫兰色，而较小的原虫核和淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。淋巴细胞原浆中的颗粒染成紫红色。血片的染色血片的染色（一）染液的种类及染色原理（一）染液的种类及染色原理注意注意：蛋白质是：蛋白质是二性二性电解质，当其处于较电解质，当其处于较等电点等电点为酸的溶液中时，为酸的溶液中时，便呈硷的作用，即与酸或阴离子结合，这就说明为何在染液偏便呈硷的作用，即与酸或阴离子结合，这就说明为何在染液偏酸时，伊红的着色力强，使红细胞着色鲜艳而淋巴细
14、胞和原虫酸时，伊红的着色力强，使红细胞着色鲜艳而淋巴细胞和原虫的胞浆着色不著；反之，蛋白质在偏硷的溶液中呈酸的作用而的胞浆着色不著；反之，蛋白质在偏硷的溶液中呈酸的作用而中和硷基，也就说明为何染液偏硷时，红细胞和嗜伊红白细胞中和硷基，也就说明为何染液偏硷时，红细胞和嗜伊红白细胞的颗粒等被染成紫兰色。的颗粒等被染成紫兰色。伊红在水溶液内遇到美兰或天青，即可互相化合而产生沈伊红在水溶液内遇到美兰或天青，即可互相化合而产生沈淀从而失去染色力，因此，吉氏母液绝对不能进水。淀从而失去染色力，因此，吉氏母液绝对不能进水。血片的染色血片的染色（二）吉氏染液母液配置方法（二）吉氏染液母液配置方法 取吉氏粉取吉
15、氏粉0.5克置于研钵中，克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，再加再磨，加少量甘油充分研磨，再加再磨，至至25毫升加完为止，倒入毫升加完为止，倒入60或或100毫升带有玻塞的有色玻瓶中。毫升带有玻塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量甲醇，洗去甘油在研钵中加少量甲醇，洗去甘油浓液混入瓶内，至浓液混入瓶内，至25毫升甲醇毫升甲醇洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶洗净钵中甘油染液为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于塞，充分摇匀，置于5560水浴中或温箱内水浴中或温箱内24小时或室温小时或室温内内35天，多加摇动，即成原天，多加摇动，即成原液。吉氏染液是目前较优良的血液。吉氏染液是目前较优良的血膜染剂，即使在炎热天气中，亦
16、膜染剂，即使在炎热天气中，亦可经久不变。可经久不变。材料：材料：1、吉氏粉、吉氏粉0.5克克 2、甘油、甘油25毫升毫升 3、甲醇、甲醇25毫升毫升血片的染色血片的染色（三）吉氏染液血片染色方法（三）吉氏染液血片染色方法 先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行先用甲醇或无水酒精固定薄血膜，待干后进行染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红染色。亦可在固定薄血膜后用清水对厚血膜溶脱血红蛋白，然后才进行染色。蛋白，然后才进行染色。成批血片染色成批血片染色：将已固定薄血膜的血片插入染：将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入色缸，倒入2%吉氏染液稀释液（吉氏染液稀释液（2毫升原液加中性毫升原液加中性蒸馏水蒸馏水98毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染毫升稀释均匀即成），同时对厚薄血膜染色色30分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时分钟（如染液不合标准时，得酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲间），然后用清水轻轻将染液冲去，再用清水轻轻冲洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干洗一次，干净后将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上，待干镜检。板上，待干镜检。血片
