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1、文件修改记录版本修订次数日期修订内容0102011-6-27Page3of22中6.L4中的a井水取样检测频率改1次/12小时A12012-7-76.10水质异常纠偏措施：增加井水余氯大于0.3mgl,水质异常纠偏措施A22013-7-25修订6.2.1水样微生物检验分发号：（仅适用于控制文件）（仅盖有红色印章的文件才有效）1.0目的规定了生产用水检测的方法和标准。2.0适用范围适用水处理工序设备运行过程水质监控及水处理系统清洗消毒结果验证30术语3.1菌落总数：水样在营养琼脂上有氧条件下37培养48h后，所得Iml水样所含菌落的总数。3.2总大肠菌群：指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产
2、气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。3.3耐热大肠菌群：用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。3.4总碱度：是指水中能够接受H离子即与强酸发生中和反应的物质总量。3 .5总硬度：水中钙、镁离子和其它金属离子的总含量。因其它金属离子的含量很少，一般情况下，总硬度表示钙、镁离子的含量。4 .0职责4.1 质检部负责水质检测和生产部门作业监控4.2 生产部负责设备设施及相应工序的操作5.O工作流程图（无）6.O内容及要求6.1标准6.L1原水、工艺水水质感官：无色、无味、无肉眼可见杂质；6.1.2原水水质必须达到以下
3、要求：项目PH碱度mg/1硬度mg/1井水浊度NTU自来水浊度NTU菌落总数cfu/ml大肠菌群MPN/100m1余氯mg/1标准6.5-8.515045031100不得检出0.05-0.3注：其中硬度、碱度均以CaeO3计6.1.3工艺水水质必须达到以下要求:项目PH碱度mg/1硬度mg/1浊度NTU电导率s/cm余氯mg/1菌落总数cfu/ml大肠菌群MPN100ml标准6.5-8.5757512000.1100不得检出注：其中硬度、碱度均以CaCQ,计6.1.4取样时间与频率：a.生产过程中，原水（井水或自来水）理化指标检测取样检测频率1次/12小时b.生产过程中，工艺水理化指标检测取样
4、检测频率1次/2小时c.井水、工艺水微生物检测取样检测频率1次/1周6.2水质测定6.2.1水样微生物检验6.2.1.1取样前的准备工作将带塞子的三角瓶（具体视取样点个数）放于高压灭菌锅内121C灭菌30分钟后备用，再取一定数量的棉球（具体视取样点个数）放于塑料烧杯中，加入75%乙醇液至棉球全部浸没，浸泡30分钟以上（即酒精棉球）待用，同时将取样用的镜子（取样端）也放入上述75%乙醇液中浸泡消毒备用。6.2.1.2取样打开取样阀（开启度根据取样适合为宜）排水35分钟,取样前先用消毒后的镜子取一酒精棉球将取样口仔细擦试，再换取一酒精棉球将取样口重新擦试，然后用灭菌后的三角瓶取水样200ml左右，
5、迅速盖上塞子，注意操作过程中手不要接触到瓶口内侧和塞子下端，以免造成操作上的污染，同时清理用过的酒精棉球,将样品带回微生物室待检。6.2.1.3样品的处理6.2. 取回的水样必须在2小时内进行菌落总数和大肠菌群的检验，以免过长时间的放置造成检验结果的不准。6.3. 1.4菌落总数（平皿计数法）I培养基与试剂：营养琼脂成分（gL）：蛋白豚IOg氯化钠5g牛肉膏粉3g琼脂15g配制：称取本品33克，加入100Oml蒸储水中，加热煮沸溶解，分装，121C高压灭菌15分钟备用；II仪器高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、培养箱361、电炉、天平、冰箱、放大镜、PH计或精密PH试纸、灭菌试管、平皿（直径9cm）
6、、刻度吸管、采样瓶等。III检验步骤以无菌操作方法用灭菌刻度吸管吸取ImI充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于361C培养箱内培养48h,进行菌落计数，即为水样ImI中的菌落总数。IV菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落
7、生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。i不同稀释度的选择及报告方法首先选择平均菌落数在30-300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则讲该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）o若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30-300之间则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）。若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表1中实例3）。若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表1中实
8、例4）。若所有稀释度的平均菌落数均大于300,则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告（见表1中实例5）。若所有稀释度的平均菌落数均小于30,则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例6）O 若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例7）O 若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。如果所有平板上都有菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的平板上，任意数其中2个拼版ICm2中的菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2,在乘其稀释倍数坐报告。菌落计数的
9、报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零也可用10的指数来表示（见表1”报告方式”栏）。表1稀释度选择及菌落总数报告方式实例不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落数之比菌落总数（cfuml）报告方式/（CfU11）IO1W2IO311365164201640016000或1.6X10422760295461.63775038000或3.8X1032890271602.22710027000或2.7X104150308215001500或L5X1035多不可计1650513513000510000gc5
10、.IXlO5627115270270或2.7X1027多不可计30512305003100O或3.1X106.2.1.5总大肠菌群（多管发酵法）I培养基与试剂i乳糖胆盐发酵培养基成分（g/1）：蛋白陈（20g）、乳糖（IOg）、猪胆盐（5g）、溟甲酚紫（0.0Ig）；配制方法：称取乳糖胆盐发酵培养基35g,加入100Onll蒸馄水中，加热煮沸溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，115高压灭菌15min,备用；ii伊红美蓝琼脂成分：豚（IOg）s牛肉浸粉（3g）、氯化钠（5g）、曙红钠（0.4g）、亚甲蓝（0.065g）、乳糖（IOg）琼脂（14g）；配制方法：称取本品42.5克，加入IOoOML
11、蒸储水中，加热煮沸溶解，分装，121C高压灭菌,20min后备用;Hi革兰氏染色液结晶紫染色液A成分：a结晶紫Igb乙醇（95%,体积分数）20mLc草酸铁水溶液（IogL）80mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸锈溶液混合。注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。革兰氏碘液A成分：a碘Igb碘化钾2gC蒸储水300M1B制法：将碘和碘化钾先进行混合，加入蒸馀水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馈水。脱色剂乙醇（95%,体积分数）。沙黄复染液A成分：a沙黄0.25gb乙醇（95肌体积分数）IOmLc蒸馄水90mLB
12、制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸播水。染色法A将培养18h-24h的培养物涂片。B将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染Imin,水洗。C滴加革兰氏碘液，作用Imin,水洗。D滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s水洗。E滴加复染剂，复染Iinin,水洗，待干，镜检。II仪器培养箱：36C.冰箱：OC-4、天平、显微镜、平皿：直径为90mm、试管、分度吸管：1矶,10疝、锥形瓶、小导管、载玻片。III检测步骤i乳糖发酵试验取IOmL水样接种到IOmL双料乳糖蛋白冻培养液中，取ImL水样接种到IOmL单料乳糖蛋白冻培养液中，另取ImL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀
13、后吸取ImL（即OJmL水样）注入到IOmL单料乳糖蛋白陈营养液中，每一种稀释度接种5管。检验水源水时，如污染较严重,应加大稀释度，可接种1,0.L0.01mL甚至0.1,0.0.1,0.001mL每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种ImL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取ImL接种，每递增稀释一次，换用一支InlL灭菌刻度吸管。将接种管置36C1C培养箱内，培养24h2h,如所有乳糖蛋白陈培养管都不产气产酸，则可报告为大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按下列步骤进行。ii分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36C1C培养箱内培养18h-24h,观察菌落形态，
14、挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。深紫黑色、具有金属光泽的菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色、中心较深的菌落。Hi证实试验经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，同时接种乳糖蛋白冻培养液，置36C1C培养箱内培养24h2h,有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。iv结果报告根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN（moslprobablenumber,最可能数）检索表，报告每IoOmL水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。5管法结果见表2,15管法结果见表3.稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠菌群未检出。表2用5份IOmL水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）5个IOmL管中阳性管数最可能数（MPN）016表3总大肠菌群MPN检索表（总接种量55.5Ml,其中5份IomL水样，5份ImL水样，5份0.1
