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1、文件修改记录版本修订次数修订日期修订内容002011-02-01A12012-05-25修订分发号：（仅适用于控制文件）（仅盖有红色印章的文件才有效）1.0目的1.1规定食品中霉菌和酵母菌计数的方法。2.0适用范围2.1适用于加多宝凉茶、浓缩汁、原辅材料中的霉菌和酵母菌的计数。3.0职责微生物检验员负责按作业指导书进行检验。4.0术语（无）5.0工作流程图见附录A中A.16.0内容及要求6.1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：6. 1.1冰箱：250Co7. 1.2恒温培养箱：281o8. 1.3显微镜：10-100o9. 1.4电子天平：感量0.1go10.
2、 1.5无菌锥形瓶:容量500疝、250mL011. 1.6无菌广口瓶：500nLo12. 1.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。13. 1.8无菌平皿：直径90mmo14. 1.9无菌试管：10mmX75mm。15. .10无菌灭菌桶。6.2培养基和试剂6.2.1马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基：见附录A中A.2。6.2.2孟加拉红培养基：见附录A中A.3。6.3 操作步骤6. 3.1样品的稀释7. 3.1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸储水的锥形瓶中，充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225mL无菌蒸储水的均质袋中，用拍击式均
3、质器拍打2min,制成1:10的样品匀液。8. 3.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25nL样品至盛有225InL无菌蒸谓水的锥形瓶（可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。9. 3.1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL无菌水的试管中，另换一支1mL无菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。10. 3.1.4按6.3.L3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1DlL无菌吸管。11. 3.1.5根据对样品污染状况的估计，选择2个3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液
4、于2个无菌平皿内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。12. 3.1.6及时将15mL20mL冷却至46C的马铃薯-葡萄糖-琼脂或孟加拉红培养基（可放置于46C1C恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。13. 3.2培养待琼脂凝固后，将平板倒置，28C1C培养5d,观察并记录。14. 3.3菌落计数肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的霉菌和酵母数。以菌落形成单位（colonyformingunits,CFU）表示。选取菌落数在10CFU150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个
5、平板的平均数。6.4 结果与报告6.4.1 计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。6. 4.1.1若所有平板上菌落数均大于150CFU,则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7. 4.1.2若所有平板上菌落数均小于IoCFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。8. 4.L3若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。6.4.2 报告6.4.2.1菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。6. 4.2.2菌落数大于或等于100时，前3位数
6、字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数来表示结果；也可用10的指数形式来表示，此时也按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字。6.4.2.3称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告，报告或分别报告霉菌和/或酵母数。7. 0相关文件无8.0质量记录表单8.1 KJWIF-QA-35原辅料及食品接触面微生物检验报告附录A（规范性附录）培养基和试剂A.1马铃薯-葡萄糖-琼脂A.1.1成分马铃薯（去皮切块）300g葡萄糖20.0g琼脂20.0g氯霉素0.1g蒸储水IOoOmLA.1.2制法将马铃薯去皮切块，加IoOOmL蒸储水，煮沸10min20min。用
7、纱布过滤，补加蒸储水至1000mLo加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装后，121C灭菌20min0倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中A. 2孟加拉红培养基A.2.1成分蛋白陈5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氢钾LOg硫酸镁（无水）0.5g琼脂20.0g孟加拉红0.033g氯霉素0.1g蒸镭水100OmLA. 2.2制法上述各成分加入蒸镭水中，加热溶化，补足蒸馄水至IOoOmL,分装后，121灭菌20min。倾注平板前，用少量乙醇溶解氯霉素加入培养基中。附录B（资料性附录）霉菌直接镜检计数法常用的为郝氏霉菌计测法，本方法适用于番茄酱罐头。B. 1设备和材料B.1.1折光仪。8. 1.2显微
8、镜。8. 1.3郝氏计测玻片：具有标准计测室的特制玻片。8. 1.4盖玻片。8. 1.5测微器：具标准刻度的玻片。B. 2操作步骤C. 2.1检样的制备：取定量检样,加蒸偏水稀释至折光指数为L3447L3460（即浓度为7. 9%8.8%）,备用。8. 2.2显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率90125倍调节标准视野，使其直径为1.382nun。9. 2.3涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。B.2.4观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉菌观测，一般每一检样观察50个视野，同一检样应由两人进行观察。B.2.5结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（1.382mm）的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测微器的一格）时即为阳性（+）,否则为阴性（一），按100个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。附录C霉菌和酵母计数的检验程序
