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1、第二章第二章 鸡胚接种技术鸡胚接种技术一、概况一、概况第一节第一节 鸡胚的结构与生理鸡胚的结构与生理 卵壳位于最外层的坚硬壳层；壳膜位于卵壳的下层，允许气体和液体分子交换，因此培养鸡胚需一定的湿度和气体。位于绒毛尿囊腔和羊膜之间，胚胎排泄器官含520ml尿囊液，含大量的尿酸盐，为减少沉淀，盐水稀释再4保存。第二节第二节 鸡胚的孵育和检查鸡胚的孵育和检查n受精鸡卵的供给第三节第三节 鸡胚接种途径及方法鸡胚接种途径及方法接种步骤与方法接种步骤与方法羊膜腔接种法羊膜腔接种法 解剖与收获解剖与收获n 将孵育l013日龄的鸡胚标记气室、胎位，于与胚胎略近气室端卵壳上划一等边三角形。n 消毒气室顶端及记号
2、处，用开孔器在记号处的卵壳上开一三角形裂痕，不可弄破下面的壳膜，同时在气室顶端钻一小孔。n 轻轻揭去卵壳，露出壳膜，在壳膜上滴一滴生理盐水，用针尖循卵壳膜纤维方向划破一隙，勿伤及紧贴的绒毛尿囊膜。n 用针尖刺破气室小孔处的壳膜，再用橡皮乳头紧按气室小孔向外吸气，此时盐水小滴即可自裂隙流至绒毛尿囊膜上，从而使绒毛尿囊膜下陷而形成人工气室。n 在卵壳的窗口滴0.050.1ml病毒液于绒毛尿囊膜上，然后将旋转鸡胚使接种物扩散到整个绒毛膜尿囊膜上。n 在卵壳的窗口周围涂石蜡，用消毒胶布封口。将鸡胚保持人工气室在上的位置，3335继续培养4872h。接种步骤与方法接种步骤与方法绒毛尿囊膜接种法绒毛尿囊膜
3、接种法解剖与收获解剖与收获n 取911日龄的鸡胚，标记气室与胚胎位置，并在胚胎面与气室交界之边缘上约1mm处避开血管作一标记，此即为注射点。n 将鸡胚竖放在卵杯上，钝端向上。消毒气室的蛋壳，用开孔器钻开一长约2mm小口。n 再次消毒钻孔区，接种病毒液0.10.2ml，将针头刺入孔内，经尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。n 消毒后用石蜡溶化封孔，于3335孵卵器孵育4872h，；于接种后24h内死亡者为非特异性死胚应弃去。接种步骤与方法接种步骤与方法尿囊腔接种法尿囊腔接种法解剖与收获解剖与收获n 取58日龄鸡胚，标记气室和胚胎位置，垂直放置在卵架上，钝端朝上，消毒气室端。n 用开孔器在气室中央的卵壳上
4、钻一小孔，用带有6号针头的1m1注射器将样品从小孔处沿胚的纵轴迅速刺入约3cm，注入0.20.5ml待接种的病毒于卵黄囊内，随后用胶带或溶化的石蜡封孔。n 置孵化箱内继续孵育38d，时间长短应根据病毒或立克次体的种类而定，每天翻卵2次，弃掉24h内死亡的鸡胚(但东方型和西方型马脑炎可能在接种后1524h内死亡)接种步骤与方法接种步骤与方法卵黄囊接种法卵黄囊接种法解剖与收获解剖与收获三、注意事项三、注意事项鸡胚为一活的有机体，因此 要严格无菌操作。n动作要仔细，以免造成物理死亡。接种后24小时内死亡应不计结果。n适宜的培养温度：第四节第四节 病毒的检测病毒的检测检测方法检测方法第五节第五节 鸡胚
5、接种技术的应用鸡胚接种技术的应用第一节 实验动物的种类和基本 操作方法一、实验动物的种类一、实验动物的种类（微生物控制分类）（微生物控制分类）：称一级动物，是微生物控制要求最低级别的实验动物，要求不携带动物烈性传染病和人兽共患病病原。一般仅供教学示范及作为预备试验之用。称二级动物，除不携带普通动物病原体外，要求不携带对动物危害大、对实验干扰大的病原体。：又称三级动物，除普通动物、清洁动物不得携带的病原外，还要求排除潜在感染或条件致病菌的感染。为四级动物。无菌动物要求在体内外不得检出其他的生命体。悉生动物又称已知菌动物，是将已知菌植入无菌动物体内。实验动物的遗传学控制分类实验动物的遗传学控制分类
6、：是指经过连续20代以上全同胞或亲子交配培育的动物品系。特点有:基因型相同，表现型一致；对外来刺激反应一致；实验结果重复性好，可比性强。是指一个不从外界引入新的血缘，非近亲交配方式繁殖一定代次的实验动物群体。特点是群体遗传特异性相对稳定，个体间具有杂合性，存在一定差异。是指由于遗传基因发生突变而具有某些特殊性状的动物，如肥胖症小鼠、糖尿病小鼠等。实验动物的遗传学控制分类实验动物的遗传学控制分类 又称异系杂交，是由不同的品系杂交所产生的后代。由两个近交系之间交配产生的动物称为杂交一代，其遗传和表型均一性好，生命力、适应力和抗病力较近交系动物强，实验结果重复性好，适应实验范围更大。将外源性基因插入
7、生殖细胞基因组并能正常繁衍的动物称为转基因动物。另外，还可以采用基因剔除技术构建基因缺陷动物，通过删减单一基因或相关基因组，研究基因的功能。二、常用的实验动物二、常用的实验动物u小鼠：昆明小鼠、BALB/c小鼠、裸鼠、SCID小鼠；u豚鼠：制备抗体和补体以及提供红细胞。u家兔：三、实验动物常用基本操作技术三、实验动物常用基本操作技术u实验动物的捕捉和固定：u实验动物编号和分组：u实验动物的麻醉方法：乙醚吸入法是最 常用的方法。u实验标本的采集实验标本的采集四、使用实验动物的基本原则四、使用实验动物的基本原则p研究目的明确：第二节第二节 动物实验在病毒检验中的应用动物实验在病毒检验中的应用第三节第三节 病毒学检验中动物实病毒学检验中动物实 验的基本步骤验的基本步骤p临床标本的制备和处理；p敏感动物的选择、标记并分组；p接种途径的选择；p观察病毒感染动物的异常生理变化；p动物标本的采集、处理和检查；p实验数据的统计和分析。第四节第四节 病毒学动物实验应病毒学动物实验应 注意的问题注意的问题u安全问题：u实验动物自发性病毒感染对实验结果的影响。小小 结结u鸡胚接种的优缺点；u四种常见的鸡胚接种途径及注意事项；u鸡胚接种后病毒的检测；u鸡胚接种技术的应用；u动物实验在病毒检验中的应用及注意的问题。THE END
