第06讲第二章第四节核酸类药物的生产.ppt

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1、第二章第二章 天然生物材料的提取制药天然生物材料的提取制药p 生化药物概述生化药物概述 p 氨基酸类药物的生产氨基酸类药物的生产p 多肽和蛋白质类药物的生产 p 核酸类药物的生产p 酶类药物的生产p 糖类药物的生产p 脂类药物的生产p 维生素和辅酶类药物的生产核酸类药物的生产核酸知识复习核酸知识复习核酸药物的分类核酸药物的分类核酸类药物的生产方法核酸类药物的生产方法核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例核酸类药物的检测核酸类药物的检测思考题思考题核酸知识复习核酸知识复习核酸药物的分类核酸药物的分类一、具有天然结构的核酸类物质一、具有天然结构的核酸类物质如:DNA、RNA、肌苷、ATP、辅酶A

2、、脱氧核苷酸、肌苷酸等。获得:微生物发酵或从生物资源中提取生产。药理功能:有助于改善机体的物质代谢和能量代谢平衡,加速受损组织的修复,促使机体恢复正常生理功能。著名企业:珍奥集团、GENTA公司核酸药物的分类核酸药物的分类二、天然碱基、核苷、核苷酸的类似物或聚合物二、天然碱基、核苷、核苷酸的类似物或聚合物如:三氟代胸苷、叠氮胸苷、拉米夫定(嘧啶类)、阿德福韦(嘌呤类)、恩替卡韦(第三代核苷类抗乙肝病毒药物)等。获得:由自然结构的核酸类物质通过半合成生产。药理功能:治疗病毒病如乙肝、肿瘤、爱滋病的重要药物,也是产生干扰素、免疫抑制剂的临床药物。核酸类药物的生产方法核酸类药物的生产方法核酸类药物的

3、生产方法核酸类药物的生产方法。如需进一步的纯化,常用纯化方法如柱层析、凝胶电泳和密度梯度超离心。、人工合成获取大分子核酸的另一方法是人工合成,即利用化学的方法按照设定的核苷酸顺序逐一加入形成核酸。现已有核酸合成仪,但合成长度还有一定限制,并且该仪器价格昂贵。因此这种方法一般用于研究,不适合生产。核酸类药物的生产方法核酸类药物的生产方法(三)核苷酸、核苷及碱基类似物的生产方法酶解法、半合成法、发酵法1、酶解法生产酵母,从酵母中提取RNA,RNA经青霉菌属或链霉菌属等微生物产生的酶进行酶解,制成各种核苷酸。2、半合成法微生物发酵与化学合成并用。3、直接发酵法采用营养缺陷型菌株或营养缺陷型兼结构类似

4、物抗性菌株来发酵大量生产目的核苷或核苷酸。核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例工艺路线抽提 猪脾脏 预处理 冷冻,绞碎 组织浆液 预处理 0.1M NaCl-0.5M柠檬酸混合液,离心沉淀 1.71M NaCl 上清液(DNP)沉淀(DNP)溶解液0.14M NaCl沉淀物白色纤维状DNA 10%NaCl上清液(DNA)氯仿-异戊醇95%乙醇真空干燥核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例、RNA的提取等电沉淀法酵母菌体 提取液抽提清液RNA粗品RNA精品 稀NaOH,提取中和,分离洗涤、干燥pH2.5核酸类药

5、物的生产实例核酸类药物的生产实例腺嘌呤前体 腺苷AMPATP枯草杆菌160(Smr+Try+Pur)微生物或化学转化微生物核酸类药物的生产实例核酸类药物的生产实例(四)辅酶A的生产TCA,除蛋白新鲜猪肝【绞碎】肝浆【水,提取】提取液 滤液GAM树脂GAM-CoACoA浓集液LD-601-CoACoA粉HCl-NaClCoA酸化液HCl,酸化LD-601,再吸附酸化浓缩液浓缩上清液沉淀物 丙酮沉淀脱水干燥核酸类药物的检测核酸类药物的检测1、DNA含量测定DNA是磷酸和戊糖通过磷酸二酯键形成的长链,所以磷酸或戊糖的量正比例于DNA的量,可通过测定磷酸或戊糖的量来测定DNA的量,前者称为定磷法,后者

6、称为定糖法。(1)定磷法磷酸与钼酸反应生成磷钼酸,再转变为钼蓝,吸收峰在660nm。(2)定糖法二苯胺法酸性条件下,DNA与二苯胺共热,生成蓝色化合物,吸收峰595nm。核酸类药物的检测核酸类药物的检测思考题思考题1.核酸类药物的种类和药理功能是什么?2.DNA、RNA、ATP及HS-CoA的生产方法。3.如何检测核酸类药物?核苷酸组分NNNHNNH2NNHNH2ONHNNHNONH2OHHOHHOHOHHHOCH2HOCH2OHHOHHHOHHD-核糖D-2-脱氧核糖腺嘌呤腺嘌呤鸟嘌呤胞嘧啶NHNHOO尿嘧啶NHNHOO胸腺嘧啶珍奥核酸DNA药物核苷类药物恩替卡韦 胸腺ABI3948核酸合成纯化仪核酸合成纯化仪可自动完成DNA的合成,切割,脱保护,OPC纯化和定量等过程。在三个模块中同时进行合成、切割脱保护和纯化收集,24小时内可完成48个寡核苷酸片段的合成和纯化。密度梯度离心机

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