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1、附件4食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸蔡乙二胺法（KJ201704）1范围本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。本方法适用于肉及肉制品（餐饮食品）中亚硝酸盐的快速测定。2原理样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸泰乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1 试剂3.1.1 对氨基苯磺酸。3.1.2 盐酸泰乙二胺。3.1.3 盐酸。3.1.4 盐酸（20%）：量取20mL盐酸，用水
2、稀释至100mL。3.1.5 对氨基苯磺酸溶液（4gL）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于IoOmL20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。3.1.6 盐酸蔡乙二胺溶液（2gL）：称取0.2g盐酸茶乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。3.2 参考物质亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1,纯度299%。表1亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量亚硝酸钠Sodiumnitrite7632-00-0NaNO269.003.3标准溶液配制亚硝酸钠标准工作液（200gmL,以亚
3、硝酸钠计）：精密称取适量经UoC-120C干燥恒重的亚硝酸钠参考物质（3.2）,加水溶解，移入25OmL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。3.4 材料亚硝酸盐快速检测试剂盒：适用基质为肉及肉制品，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。4仪器和设备4.1 移液器：200L,ImL04.2 涡旋混合器或超声仪。4.3 电子天平或手持式天平：感量为0.0Ig和0.0001g。4.4 离心机O4.5 微孔滤膜：0.45m（水系）。5分析步骤5.1 试样制备取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀.5.2 试样的提取准确称取试样Ig（精确至0.0Ig）,置于离心管中，准确加水IOmL,超声或涡旋振荡提取5mi
4、n,静置IOmin。准确吸取ImL上清液（如样品浑浊，23000rmin离心5min取上清液，或经微孔滤膜过滤后取续滤液）于检测管中，向检测管中滴加对氨基苯磺酸溶液200L,混匀静置Imin,再加入盐酸蔡乙二胺溶液100L,混匀静置5min,即得待测液。5.3 测定步骤将待测液与标准色阶卡目视比色，IOmin内判读结果。进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。5.4 质控试验每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验（或加标质控试验）。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。5.4.1 空白试验称取空白样品，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。5.4.2 质控样品试验（
5、或加标质控试验）亚硝酸盐质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质按照实际生产工艺生产的，含有一定量亚硝酸盐，并可稳定保存的样品。经参比方法确认的质控样品中亚硝酸盐含量（以亚硝酸钠计）应包括但不限于1Omg/kg加标质控样品：准确称取空白试样Ig（精确至0.0Ig）,置于离心管中，加入适量亚硝酸钠标准工作液（20（gmL）（3.3）使样品中亚硝酸钠含量为IOmg/kg。质控样品（或加标质控样品）按5.2和5.3步骤与样品同法操作。6结果判定要求观察检测管中样液颜色，与标准色阶卡比较判读样品中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量。颜色浅于检出限（ImgZkg）则为阴性样品；颜色深于IOmgkg则为阳性样
6、品。色阶卡见图1。注：1.颜色接近或深于lmgkg,但浅于或接近IOmgkg时，则考虑本底污染或带入所2.10mgkg仅作为本方法的本底控制限。质控试验要求：空白试验测定结果应为阴性，质控样品试验测定结果应在其标示量值允差范围内，加标质控试验测定结果应与加标量相符。7结论由于色阶卡目视判读存在一定误差，为尽量避免出现假阴性结果，读数时遵循就高不就低的原则。当测定结果大于IOmgZkg时，应对结果进行确证。8性能指标8.1 检测限：Img/kg。8.2 灵敏度：灵敏度应99%8.3 特异性：特异性应85%.8.4 假阴性率：假阴性率应1%8.5 假阳性率：假阳性率应15%。注：性能指标计算方法见
7、附录A。9其他本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不作限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。本方法参比方法为GB5009.33-2016食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定一第二法分光光度法。待测样品中若存在高含量的亚硫酸氢钠、抗坏血酸或酱油时，会对本法的显色结果产生一定影响，检测时应予以注意。色阶卡应确保在试剂盒保质期内不出现褪色或变色的情况。附录A快速检测方法性能指标计算表表A.1性能指标计算表样品情况a检测结果b总数阳性阴性阳性CNnN2N=Nii+N12阴性N2IN22N2.=
8、N2i+N22总数N.=Ni+N12N.2=N21+N22N=NI.+Nz或N,i+N,2显著性差异(2)2=(N2-N2-l)2(Ni2+N21),自由度(df)=1灵敏度(p+,%)p+=NHNl.特异性(P-,%)p-=N22N2.假阴性率(pf-,%)Pf-=NI2Nl.=100-灵敏度假阳性率(pf+,%)pf+=N21/N2.=100-特异性相对准确度，%d(Nh+N22)(Ni+N2.)注：a由参比方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果；b由待确认方法检验得到的结果。灵敏度的计算使用确认后的结果。用于确认方法时，结果21mgkg时，判定为阳性(仅用于计算性能指标)：C本方法规定：用于计算灵敏度和假阴性率的阳性样品，由参比方法检验得到的结果范围应在1一IOmgZkg之间。N：任何特定单元的结果数，第一个下标指行，第二个下标指列。例如：Nil表示第一行，第一列，NL表示所有的第一行，N.2表示所有的第二列；N12表示第一行，第二列。tl为方法的检测结果相对准确性的结果，与一致性分析和浓度检测趋势情况综合评价。本方法负责起草单位：陕西省食品药品监督检验研究院验证单位：四川省食品药品检验检测院、山西省食品药品检验所主要起草人：刘海静、李涛、林芳、王一欣、袁磊
