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1、采样及检查方法A.1采样和检查原则A.1.1采样后应尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h；若样品保存于OC4C时，送检时间不得超过24h。A.1.2不推荐医院常规开展灭菌物品的无菌检查，当流行病学调查怀疑医院感染事件与灭菌物品有关时，进行相应物品的无菌检查。常规监督检查可不进行致病性微生物检测，涉及疑似医院感染暴发、医院感染暴发调查或工作中怀疑微生物污染时，应进行目标微生物的检测。A.1.3可使用经验证的现场快速检测仪器进行环境、物体表面等微生物污染情况和医疗器材清洁度的监督筛查；也可用于医院清洗效果检查和清洗程序的评价和验证。A.2空气微生物污染检查方法A.2.1采样时间I类环
2、境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；11、III、IV类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。A.2.2检测方法A.221I类环境可选择平板暴露法和空气采样器法，参照GB50333医院洁净手术部建筑技术规范要求进行检测。空气采样器法可选择六级撞击式空气采样器或其他经验证的空气采样器。检测时将采样器置于室内中央08m1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间大于IOm2者，每增加Iom2增设一个采样点。A.2.2.2II、III、W类环境采用平板暴露法。室内面积30m2,设内、中、外对角线3点，内、外点应距墙壁Im处；室内面积30n设4角及中央5点
3、,4角的布点部位应距墙壁Im处。将普通营养琼脂平皿（直径90mm）放置各采样点,采样高度为距地面08m1.5m;采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间（II类环境暴露15min,III、W类环境暴露5min）后盖上平皿盖及时送检。A.223将送检平皿置36C1C恒温箱培养48h,计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A.2.3结果计算A.2.3.1平板暴露法按平均每皿的菌落数报告：CFU/（皿暴露时间）。A.2.3.2式(1)为空气采样器法计算公式:A.3物体表面微生物污染检查方法A.3.1采样时间潜在污染区、污染区消毒后采样。清洁区根据现场情况确定。A.3.2采样面积被采表面100Cm
4、2,取全部表面；被采表面NloOCm2,取IOoCm?。A.3.3采样方法用5cm5Cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无菌0.03mol/L磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子I支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样14个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有IOmL采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体采样。若采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。A.3.4检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.0mL接种平皿，将冷至40C45C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL,36C1C恒温箱培养48h,计数菌落数
5、，必要时分离致病性微生物。A.3.5结果计算如式(A.2)A.4医务人员手卫生检查方法A.4.1采样时间采取手卫生后，在接触病人或从事医疗活动前采样。A.4.2采样方法将浸有无菌0.03molL磷酸盐缓冲液或生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指跟到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积约30cm2),并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10mL采样液的试管内送检。采样面积按平方厘米(Cm2)计算。若采样时手上有消毒剂残留，采样液应含相应中和剂。A.4.3检测方法把采样管充分振荡后，取不同稀释倍数的洗脱液1.OmL接种平皿，将冷至4045C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL
6、20mL,36C1C恒温箱培养48h,计数菌落数，必要时分离致病性微生物。A.4.4结果计算如式(A.3)A.5医疗器材检查方法A.5.1采样时间在消毒或灭菌处理后，存放有效期内采样。A.5.2灭菌医疗器材的检查方法A.5.2.1可用破坏性方法取样的，如一次性输液(血)器、注射器和注射针等按照中华人民共和国药典中“无菌检查法进行。对不能用破坏性方法取样的医疗器材,应在环境洁净度100Oo级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹，采样取全部表面或不少于IoOCm2；然后将除去手接触部分的棉拭子进行无菌检查。A.5.2.2牙科手机：
7、应在环境洁净度10(X)O级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中，将每支手机分别置于含20mL25mL采样液的无菌大试管(内径25mm)中，液面高度应大于4.0cm,于旋涡混合器上洗涤震荡30s以上，取洗脱液进行无菌检查。A.5.3消毒医疗器材的检查方法A.5.3.1可整件放入无菌试管的，用洗脱液浸没后震荡30s以上，取洗脱液1.OmL接种平皿，将冷至40C45C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL,36C1恒温箱培养48h,计数菌落数(CFU/件)，必要时分离致病性微生物。A.5.3.2可用破坏性方法取样的，在100级超净工作台称取IgIOg样品,放入装有IOmL采样
8、液的试管内进行洗脱，取洗脱液1.OmL接种平皿，计数菌落数(CFUg),必要时分离致病性微生物。对不能用破坏性方法取样的医疗器材，在100级超净工作台，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样，被采表面100Crn2,取全部表面，被采表面NloOCm2,取100Cm2,然后将除去手接触部分的棉拭子进行洗脱，取洗脱液LOmL接种平皿，将冷至40C45C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL,36C1C恒温箱培养48h,计数菌落数(CFU/cm2),必要时分离致病性微生物。A.5.3.3消毒后内镜：取清洗消毒后内镜，采用无菌注射器抽取50mL含相应中和剂的洗脱液，从活检口注入冲
9、洗内镜管路，并全量收集（可使用蠕动泵）送检。将洗脱液充分混匀，取洗脱液LomL接种平皿，将冷至40C45C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL,36C1恒温箱培养48h,计数菌落数（CFU/件）。将剩余洗脱液在无菌条件下采用滤膜（0.45m）过滤浓缩，将滤膜接种于凝固的营养琼脂平板上（注意不要产生气泡），置36C1。C温箱培养48h,计数菌落数。当滤膜法不可计数时：菌落总数（CFU/件）=m（CFU平板）x50（A.4）式中：m-两平行平板的平均菌落数。当滤膜法可计数时：菌落总数（CFU/件）=m（CFU平板）+mf（CFU/滤膜）（A.5）式中：m-两平行平板的平均菌落数；mf-滤膜
10、上菌落数。A.6消毒剂检查方法A.6.1消毒剂采样采样分库存消毒剂和使用中消毒液。A.6.2消毒剂有效成分含量检查方法库存消毒剂的有效成分含量应依照消毒技术规范或产品企业标准进行检测；使用中消毒液的有效浓度测定可用前述方法，也可使用经国家卫生行政部门批准的消毒剂浓度试纸（卡）进行监测。A.6.3使用中消毒液染菌量检查方法A.6.3.1用无菌吸管按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9mL中和剂中混匀。醇类与酚类消毒剂用普通营养肉汤中和，含氯消毒剂、含碘消毒剂和过氧化物消毒剂用含0.1%硫代硫酸钠中和剂，洗必泰、季校盐类消毒剂用含0.3%吐温80和0.3%卵磷脂中和剂，醛类消毒剂用含0.3
11、%甘氨酸中和剂，含有表面活性剂的各种复方消毒剂可在中和剂中加入吐温80至3%;也可使用该消毒剂消毒效果检测的中和剂鉴定试验确定的中和剂。A.6.3.2用无菌吸管吸取一定稀释比例的中和后混合液1.0mL接种平皿，将冷至4045C的熔化营养琼脂培养基每皿倾注15mL20mL,36C1C恒温箱培养72h,计数菌落数；必要时分离致病性微生物。消毒液染菌量(CFU/mL)=平均每皿菌落数XlOX稀释倍数(A.6)A.7治疗用水检查方法血液透析相关治疗用水按YY0572进行检测。其他治疗用水按照相关标准执行。A.8紫外线灯检查方法A.8.1紫外线灯采样采样分库存紫外线灯和使用中紫外线灯。A.8.2库存(新启用)紫外线灯辐射照度值检查方法按照GB19258进行。A.8.3使用中紫外线灯辐射照度值检查方法A.8.3.1仪器法。开启紫外线灯5min后，将测定波长为253.7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下垂直距离Im的中央处，待仪表稳定后，所示数据即为该紫外线灯的辐射照度值。A.8.3.2指示卡法。开启紫外线灯5min后，将指示卡置紫外灯下垂直距离Im处，有图案一面朝上，照射Imin,观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较。A.8.4注意事项紫外线辐照计应在计量部门检定的有效期内使用；紫外线监测指示卡应取得国家卫生行政部门的许可批件，并在产品有效期内使用。
