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1、第一章消毒灭菌效果及环境卫生学监测第一节物体表面卫生学监测一、监测范围1类环境：层流洁净手术室、层流洁净病房。II类环境：普通手术室、重症监护室、器官移植病房、产房、母婴室、新生儿室、血液透析室、供应室无菌间。皿类环境：治疗室、换药室、注射室、儿科病房、妇产科检查室、内镜室、导管室、输血科配血室、急诊室、化验室、各类普通病室和房间。IV类环境：传染科及病房。二、采样时间1.监测频率：普通病房每季度监测1次；重症监护病房、产房、新生儿室、供应室无菌问、手术室、血液透析室、输血科配血室等每月监测1次。2.具体采样时间：常规监测：消毒处理后进行采样：暴发流行时：对未处理的现场进行采样。三、采样方法（
2、一）采样面积被采样物体表面ClOOcmL应取全部物体表面。被采样物体表面2100Cm2,则取100CmJ（二）采样方法1.平面的物体，将5cmX5cm的标准灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（吐温-801g、蛋白陈10g、氯化钠8.5g、蒸做水1OOOml配制而成,pH值7.27.4,121C压力蒸汽灭菌20分钟）的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂抹各5次，并随之转动棉拭子。连续采样14个规格板面积，然后剪去手接触部位，将棉拭子投入IOml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。2.门把手等小型或不规则物体则用棉拭子直接涂抹采样。四、检测方法将采样管在混匀器上振
3、荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.Oml待检样本接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入己融化的4548C的营养琼脂1518ml,边倾注边摇匀，待琼脂凝固后，置于37温箱培养48小时后，计数菌落数。物体表面细菌总数(cfu/cn?)=平皿上菌落数X采样液稀释倍数采样面积(cm9五、结果判断1类环境：细菌总数W5cfu/cm-并未检出致病菌为消毒合格。II类环境：细菌总数W5cfu/cm2,并未检出致病菌为消毒合格。Ill类环境：细菌总数WIOCfU/cn并未检出致病菌为消毒合格。W类环境：细菌总数W15cfu/cn并未检出致病菌为消毒合格。母婴室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科
4、病房的物体表面不得检出沙门菌。六、注意事项1.采取的标本要有代表性。2.采样时棉拭子要处于湿润状态，禁止使用干棉拭子采样。3.用于接种的培养基应置于37C培养24小时证实无菌生长后方可使用。第二节手卫生监测一、采样时间1.监测频率：普通病房医务人员的手每季度监测1次；重症监护病房、产房、新生儿室、供应室无菌间、手术室、血液透析室、输血科配血室等病房医务人员的手，每月监测1次。2.具体采样时间。常规监测：洗手后，从事诊疗操作前。特殊监测：当发生医院感染流行，高度怀疑或确定与医务人员手的污染有关时，应及时进行监测。二、采样方法被检者五指并拢,用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从
5、指跟到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2,涂擦过程中同时转动棉拭子，将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入IOml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。三、检测方法将采样管在混匀器上振荡20秒或用力振打80次，用无菌吸管吸取LOmI待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，平皿内加入己溶化的4548C的营养琼脂1518ml,边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36CIC温箱培养48小时，计数菌落数。细菌菌落总数（CfU/cn?）=平皿上菌落数X稀释倍数采样面积（Cm2）四、结果判断1、H类区域工作人员：细菌总数5cfu/cn?,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌为消毒合格。I
6、n类区域工作人员:细菌总数WlOCfU/cm2,并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。W类区域工作人员：细菌总数W15cfu/cm一并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。母婴室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。五、注意事项1.用于接种的培养基应置于37C培养24小时证实无菌生长后方可使用。2.层流洁净手术室每次抽检人数不少于3人。3.所采样本应及时检测，室温下存放不得超过2小时；4C冰箱存放不得超过4小时。第三节空气卫生学监测一、非洁净区域空气消毒效果监测（一）采样时间在消毒处理后、操作前进行采样。（二）采
7、样布点方法室内面积30n,设内、中、外封角线3点，距墙壁Im处各取1点；室内面积30rn2,设4角及中央5点，4角的布点部位距墙Im处。（三）采样方法平板暴露法：将普通营养琼脂平皿（直径为9cm）放在室内各采样点处，采样高度距地面1.5m,采样时将平皿盖打开，扣放于平板旁，暴露5分钟后盖好立即送检。将送检的平板置37C温箱培养48小时，计算菌落数，并分离致病菌。（四）结果计算,C,3、50OOOX平均菌落数仝I细困国浴息数（cfum）=平板面积（Cm2）暴露时间（五）结果判断I类环境：细菌总数WIOCfU/n（或0.2cfu/平皿），并未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。II类环境：
8、细菌总数200cfu/m3（或4cfuf平皿），并未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。In类环境：细菌总数5OOcfu/m3,并未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格（六）注意事欢1.采样前，关好门窗，在无人走动的情况下，静止IO分钟进行采样。2.采样后立即送检，培养皿禁止存放于冰箱中。二、洁净区域空气消毒效果监测（一）等级标准洁净手术部用房分为四级，并以空气洁净度级别作为必要保障条件。在空态或静态条件下，细菌浓度（沉降菌法浓度或浮游菌法浓度）和空气洁净度级别都必须符合表UT、表11-2的要求。表11/洁净手术室分级等级手术室名称手术切口类别适用手术类型1特别洁净手术室I关节置
9、换手术、器官移植手术及脑外科、心脏外科和眼科等手术中的无菌手术II标准洁净手术室I胸外科、整形外科、泌尿外科、肝胆胰外科、骨外科和普通外科中的1类切口无菌手术III一般洁净手术室H普通外科（除去1类切口手术）、妇产科等手术IV准洁净手术室III肛肠外科及污染类等手术表11-2主要洁净辅助用房分级等级用房名称I需要无菌操作的特殊实验室II体外循环灌注准备室刷手间、消毒准备室、预麻室、一次性物品和无菌敖料及器械与精密仪器的存放室、护士站、洁净走廊、重症护理单元（ICU）、恢复（麻醉苏醒）室。更衣室IV清洁走廊.（二）监测内容与要求1.洁净手术室投入运行前，应当经有资质的工程质检部门进行综合性能全面
10、评定，并作为手术室基础材料存档。2.洁净手术室日常实行动态监测，必测项目为细菌浓度和空气的气压差。3.每日可通过净化自控系统进行机组监控并记录，发现问题及时解决。4.每月对非洁净区域局部净化送、同风口设备进行清洁状况的检查，发现问题及时解决。5.每月对各级别洁净手术室至少进行1间静态空气净化效果的监测并记录。6.每半年对洁净手术室进行1次尘埃粒子、高效过滤器的使用状况、测漏、零部件的工作状况等在内的综合性能全面评定，监控并记录。7.每半年对洁净手术室的正负压力进行监测并记录。（三）监测方法分为静态（空态）监测和动态监测。1.静态监测（I）测点位置：见表11-3。测点布置在距地面0.8m高的平面
11、上，在手术区检测时应无手术台。当手术台己固定时，测点高度在台面之上O25m。当送风13集中布置时，应对手术区和周边区分别检测，测点数和位置应符合表IlT的规定；当附近有显著障碍物时，可适当避开当送风口分散布置时，按全室统一布点检测，测点可均布，但不应布置在送风口正下方。表11-3测点位置表区域最少测点数布点位置1级洁净手术室、手术区和洁净辅助用房，局部100级区5点双对角线布点1级周边区JI点将边内2点nIII级洁净手术室手术区3点单对角线布点II级周边区6点长边内2点，短边内1点III级周边区4点每边内1点洁净手术室及分散布置送风口的洁净室IV级面积30m24点避开送风口正下方面积、30m2
12、2点（2）监测方法：将9cm直径普通营养琼脂平皿放在室内各采样点，将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露30分钟后盖好立即送检。将送检的平皿置37C温箱培养24小时，计算菌落数.（3）监测要求.1）1级洁净手术室和洁净辅助用房检测前，系统应己运行15分钟，其他洁净房间应己运行40分钟。2）每次采样的最小采样量：100级区域为5.66L,其他各级区域为2.83L。3）在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他级别区域检测时，采样口均向上.4）当检测含尘浓度时，检测人员不得多于2人，都应穿洁净工作服，处于测点下凤向的位置，尽量少动作（4）结果判断根据中华人民共和国国家标准医院洁净手术部建筑技术规
13、范（GB5O333-2OO2）,洁净手术室等级标准以及主要洁净辅助用房等级标准分别见表I卜4、表If（5）注意事项。1）检测细菌密度时，必须有2次空白对照。第1次对用于检测的培养皿做对比试验，每批1个对照皿；第2次检测时，每室或每区1个对照皿，对操作过程做对照试验，模拟操作过程，但培养皿打开后应立即封盖.2次对照结果必须为阴性，整个操作过程应符合无菌操作要求.2）采用沉降法测定沉降菌密度时，细菌密度测点数应满足表11-6规定的最少培养皿数的要求（不含对照皿），如沉降时间适当延长，最少要求培养皿数可按比例减少，但不能少于表1卜3的最少测点数。表11-4洁净手术室的等级标准（空态或静态）等级手术室
14、沉降法（浮游法）细菌最大平均密度表面最大空气洁净度级别名称手术区周边区（个/cm?）手术区周边区T特别洁净0.2个/30分钟0.4个/30分钟1OoO级手术室1p90皿（5个）$90皿（10个佃3）II标准洁净手术室0.75个/30分钟（p90fm（25个m）1.5个30分钟9O11l（5O个/m51000级IOooo级IH一般洁净手术室2个/30分钟p90皿（75个/ri?）4个/30分钟90皿（150个/ri?）5IOoOO级IOoOoO级IV准洁净手术室5个30分钟90皿（175个）53OOO级注浮游法的细菌最大平均密度采用括号内数值。细菌密度是直接所测的结果，不是沉降法和浮游法互相换算的结果.I级眼科专用手术室周边区按10OOO级要求.90HIL是采样直径为90mm的培养皿表11-5辅助用房的等级标准（空态或静态）沉降法（浮游法）表面最大染菌密度细茜最大平均密度,1空气洁净度级别（个cn）局部：0.2个/30分钟、9011ll（5个/nN）其他区域：0.4个/30分钟、90皿（10个/m111.5个/30分钟、p9011Il（50个/a?）IlI4个/30分钟、p90皿（150个/mlIV5个/30分钟、p90皿（175个An。局部100级5其他区域1OOO级5100OO级5IooooO
