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1、融冻与巴氏消毒法对母乳巨细胞病毒感染性的影响周文姬I沈永珍1,周紫光?，张春一I钟志成广东省妇幼保健院新生儿科工手术室_产前诊断实验室广东广州511400第一作者：周文姬(1988年)，女，硕士，主管护师，研究方向：新生儿护理及护理管理方向，Emai1：通讯作者：钟志成(1982年)，男，硕士，主管技师，研究方向：产前诊断实验实临床检验方向，Emai1：基金项目：广东省医学科研基金(编号：A)摘要1目的比较融冻与巴氏消毒法对母乳巨细胞病毒(HCMV)的灭活效果。方法选取2021年3二6月期间在月期省妇幼保健院住院的组例早产儿母亲作为研究对象，收集其新鲜母乳。经过母乳初筛后，有4但母亲母乳HCM
2、V-DNA阳性。4勺母乳HCMV-DNA阳性母亲留取新鲜母乳后，备分为3份，每份IOmL然后各取1份新鲜母乳作为对照组,另外各取2份分别经融冻(融冻组)和巴氏水浴消(巴氏消毒组)。记录三组母乳HCMV-DNA载量情况、融冻组与巴氏消衣组母乳HCMV-DNA清除率、4例阳性母亲对应的三组早产儿(对照山、融冻组和巴氏消毒组)获得性HCMV感染情况结果_三组母乳HCMV-DNA平均载量比较差异具有统计学意义(P0.05),其中巴氏消毒组和融冻组HCMV-DNA平均载量:分别为(3.2l+0.57)ml,(3.740.68)ml,明显低于对照组的(4.120.79)ml,血巴氏消毒组的HCMV-DNA
3、平均载量又明显低于融冻组,差异均具有统计学意义(P0.05)；巴氏消毒组比LHCMV-DNA清除率为100.0%,明显高于融冻组的25.0%,差异具有统计学意义(P0.05):_三组早产儿获得性HCMV感染率比拉差异具有统计学意义(P0.05),其中巴氏消毒组早产儿HCMV感染率为0.0%,明显低于对照组的75.0%和融冻组的50.0%,而融冻组明显低于为j照组的75.0%,差异均具有统计学意义(PupWere(3.210.57)mland(3.740.68)ml,WhiChWereSignifiCanUylQWerIhanIhalOfIheConlrQlgroup(4.120.79)ml.W
4、hiIeIhemeanHCMV-DNAbadOfPaSleUriZedgroupWaSSignifiKanuybWerIhanIhaIOfIhaWedgroup(PVO.05);IheCIeanHICeHHeOfHclMV-DNAinPaSleUriZaliCngroupWaS1().()%,WhiChWaSSignifiCanuyhigherIhanIhaIinIhaWinggroup(25.0%,Pup,WhileIhalinIhethawedgroupWaSSignifiCantIyIOWerIhan75.0%inIheCOntrOlgroup,WithStatiSIiCallySign
5、ifiCanIdifferences(PVO.05).Conclusion:ThegeneralWalerbathPaSIeUriZaliCnCanCOmPIelelyeliminateIheinfeclivilyOfHCMVinhumanmilk,bulIheIhaWingruleCannOlCOmPleIelyeliminaleil.FnVeryIOWbirthWeighlPreIeminfantsOrChildrenWiIhimmunedeficiency,ifIhemolheisinfecledWiIhHelMVandIhemilkisSCfeenedPoSitiVefcHCMV、it
6、isSafertofeed【hebrcaslmilkafterDaSIeurizaHon.KeywordsJBreastmilk;Cytomegalovirusinfection;Thawing;Pasteurization;prematureinfant母乳作为新生儿喂养首选的黄金食物，是最佳的营养来源，其不仅可以有效促进新生儿神经系统发育、帮助肠道菌群健康生长，还能显著降低早产儿视网膜病变、坏死性小肠结肠炎及感染的发生率2。但母乳并不是无菌的，母乳喂养是出生后母乳巨细胞病毒（HCMV）感染的主要途径。对于足月儿来说，母乳获得性IiCMV感染大多无临床症状，引发神经系统和耳聋后遗症的概率小。
7、但早产儿，尤其出生体重150Og的极/超早产儿经母乳感染旦CMV后出现危及生命病症的风险则会明显憎大，严重者甚至会导致死亡。虽然人工喂养能避免经母乳感染旦CMV,但鉴于母乳的营养价值，在早产儿母乳喂养过程中,临床建议对母乳进行处理后再进行喂养，目前常用的是冻融法、巴氏消毒法、紫外线消毒和微波炉消毒法等日，但对于最佳方法选择仍存在争议，且尚缺乏早产儿经母乳感染HCMV后的科学喂养指南。本研究通过对在我院住院的HCMV-DNA阳性母亲母乳采用新鲜母乳法、融冻法、巴氏水浴消毒法进行灭活对比研究，以探究最佳的喂养方式。相关报道如下M1资料与方法1.1 一般资料一选取2021年3月至2021年6月期间在
8、广东省妇幼保健院住院的早产儿产妇20例作为研究对象。纳入标准：（1）胎龄在27-36周的早产儿产妇；（2）采取母乳喂养的早产儿产妇。排除标准：（D具有先天畸形或异常的患儿；（2）未在规定时间内规范采集到母乳的产妇；（3）不愿谨遵医嘱，不密切配合的产妇。所有产妇年龄2938岁，平均（34.6+2.1）岁，产后1540天，其中初产妇8例。新生儿出生胎龄2736周，出生体质l2.6kg,男悭14例，女世6例。收集/有产妇新鲜母乳，经过母乳初筛后，有4例母亲母乳HCMV-DNA阳性。4例母乳HCMV-DNA阳性母亲留取新鲜母乳后，各分为3份，每份IOm1。然后各取1份新鲜母乳作为对照组，另外各取2份分
9、别经融冻(融冻组)和巴氏水浴消毒(巴氏消得组)。本研究经过伦理委员会批准,且在征得产妇本人及家属的同意下进行。1.2 方法_(I)母乳筛查:收集符合纳入排除标准早产儿母亲母乳5ml并做HCMV筛查。采用实时荧光定量PCR法检测HCMV-DNA载量。母乳中只要检测到HCMV-DNA即为阳性，则再收集阳性母亲母乳进行消毒实验。检测试剂采用达安基因股份有限公司试剂盒，扩增采用ABI7500A全自动荧光定量PCR仪.(2)母乳收集：告知母乳HCMV筛查阳性的早产儿母亲，至医院指定哺乳区域，洗手、清洁乳房皮肤后挤出乳汁至聚乙烯无菌标本瓶中(30m).研究人员收集母乳后立即予以轻轻摇匀，再分装成3份至聚乙
10、烯无菌标本瓶，每份IOmL1份放入-20.C冷冻保存，3天后放入28寸冰箱融解12h至液态；1份密封后立即行水浴巴氏消毒，使用水浴加热箱，62.5*C加热30min:1份新鲜母乳不做处理作为对照。(3)母乳病毒浓缩处理：对处理组和非处理组均采用聚乙二醇沉淀法进行浓缩和收集用于细胞感染。具体做法：所获乳汁先采用8000g/min离心IOmin分离出脂肪层、乳清层和沉淀层。取中间层无脂乳清成分，进一步使用0.22Um除菌滤膜过滤，所获液体随后加入聚乙二醇等体积，颠倒混匀，置EPPendOrf离心机22000g/min离心30min,移去所有上清，加入生理盐水0.1ml制成浓缩感染病毒原液备用。(4)HCMV感染性检测：将人胚肺成纤维细胞(humanembryolungfibroblast,HEL,华拓HTXI563)按常规方法培养、传代、胰酶消化，采用细胞计数板调整至浓度为25X105/ml转置12孔HEL细胞培养板0.5mlcell,培养24小时待细胞贴壁，移除细胞培养基，加入调整后的病毒液0.1亳升37摄氏度细胞培养箱孵育15分钟。随后加入2ml含100gml新霉素、0.29mgml谷氨酰胺和10%小牛血清
