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1、FISH技术的临床应用技术的临床应用 基本原理：应用荧光染料标记探针基本原理：应用荧光染料标记探针DNADNA，变性成，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNADNA杂交，杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。在荧光显微镜下观察并记录结果。生命科学中的生命科学中的“钓鱼钓鱼”技术技术 操作流程简图操作流程简图制片制片预处理预处理FISHFISH结果分析结果分析 破坏细胞膜利于探针破坏细胞膜利于探针 杂交。杂交。蛋白酶消化、蛋白酶消化、HCl处理处理 变性变性 杂交杂交 洗涤洗涤 复染复染 制备的质量制备的质量 新鲜程度新鲜程度操作流程简图操作流程简图标本为新鲜
2、细胞制片：标本为新鲜细胞制片：阈值建立阈值建立采集采集2020例正常人细胞。例正常人细胞。阈值测定：每例分析至少阈值测定：每例分析至少100100个细胞，统计出现个细胞，统计出现2 2个以上阳性信号细胞个以上阳性信号细胞数目的百分比。数目的百分比。阈值阈值=平均数（平均数（M M）+3X+3X标准差（标准差（SDSD）结果判断结果判断每例样本随机计数细胞（至少每例样本随机计数细胞（至少100100个）个）如果检测值如果检测值 阈值，判定为阳性结果；阈值，判定为阳性结果；如果检测值如果检测值 阈值，判定为阴性结果；阈值，判定为阴性结果；如果检测值如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。阈值，加大
3、观测样本细胞数目。结结 果果 判判 断断 FISHFISH在血液及淋巴肿瘤中的应用在血液及淋巴肿瘤中的应用 FISHFISH技术在产前诊断中的应用技术在产前诊断中的应用 FISHFISH在泌尿系肿瘤中的应用在泌尿系肿瘤中的应用 FISHFISH技术在宫颈癌检测中的应用技术在宫颈癌检测中的应用 其它其它FISH技术的临床应用技术的临床应用FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用在血液及淋巴肿瘤中的应用赵荣赵荣 骨髓象骨髓象(CML)赵荣赵荣 血象血象 （CML）覃长江血象覃长江血象(MD/MPD)覃长江骨髓象覃长江骨髓象 (MD/MPD)BCR/ABL阴性阴性(图片来自覃长江)MD/MPDBCR/ABL
4、阳性阳性(图片来自赵荣)CML陆晓逸骨髓象（陆晓逸骨髓象（CLL）D13S25/P53基因阴性基因阴性 （来自陆晓逸）CSP12基因阴性基因阴性（来自陆晓逸）PML/RARa阳性阳性(图片来自卜丽敏)PML/RARa阴性阴性(图片来自彭志新)卜丽敏骨髓象卜丽敏骨髓象FISHFISH技术在产前诊断中的应用技术在产前诊断中的应用染色体异常的发生机率 出生婴儿 0.6%先天性智力障碍（MR）患者 23%先天性心脏病 13%SAB 夫妇 5%死胎和 围产期死亡胎儿 6.0%自然流产(前三个月)60%唐氏综合症唐氏综合症21号染色体三体号染色体三体,95-97%多余的染色体来自母亲多余的染色体来自母亲,
5、唐氏综合症与母亲唐氏综合症与母亲的年龄有关系的年龄有关系,确切的病因不是很了解确切的病因不是很了解.活产新生儿发病率为活产新生儿发病率为1/800 to 1/1,100,唐氏综合症与文化、种族、唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。小。肌张力低。Turner 综合症 1个x染色体的全
6、部或者部分丢失，只发生在女性。是最常见的染色体异常导致的疾病(活产女性新生儿发病率大约为 1/2500)身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、蹼颈、肾脏和甲状腺有问题,骨骼畸形等 生长激素治疗,雌激素替代治疗等21+13+GLP13/GLP21阴性阴性FISH在泌尿系肿瘤中的应用在泌尿系肿瘤中的应用 常用诊断及监测膀胱癌 膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受 细胞形态学检测：敏感性低 尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。概 述 FISH检测：9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。3号、7号及17号染色体的非整倍性。膀胱癌的灵敏度大约 80%,特异性大约 96
7、%非创伤性及非痛苦性概 述疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌GLP P16/CSP17 红/绿P16：9p21CSP17:17p11.1-q11.1 P16：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2ACSP17:17号染色体着丝粒 P16缺失；17号染色体非整倍性 临床意义 随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与膀胱癌的早期发生密切相关。P16为抑癌基因，通过CDK4对细胞增殖分裂起负调控作用，CDK4与cyclin D形成复合物促进细胞从G1-S转换，促进细胞有丝分裂，P16基因异常在膀胱癌发生
8、早期出现.膀胱癌膀胱癌FISH 探针组探针组(一一)疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌CSP 7/CSP3 红/绿CSP7:7p11.1-q11.1 CSP 3:3p11.1-q11.13、7号染色体着丝粒3、7号染色体非整倍性 临床意义膀胱癌的发展与染色体不稳定性紧密相连，特别是与3号、7号及17号染色体的非整倍性密切相关。3、7、17 染色体的不稳定性与肿瘤的浸润行为有关，3，7，17改变在病程发展中出现。膀胱癌膀胱癌FISH 探针组探针组(二二)CSP 7/CSP3阴性阴性 CSP7/CSP3阳性阳性FISHFISH技术在宫颈癌检测中的应用技术在宫颈癌检测中
9、的应用 传统巴氏细胞学涂片&液基薄层细胞检测(TCT）HPV病毒检测 荧光原位杂交（FISH）检测临床检测方法临床检测方法方方 法法特异性（）特异性（）敏感性（）敏感性（）形态学检测形态学检测909055-8055-80HPVHPV检测检测6464959584-10084-100FISHFISH90909090三种检测方法比较三种检测方法比较 TERCTERC（人类染色体末端酶（人类染色体末端酶 ）基因定位在）基因定位在3q26.3 3q26.3，该基因，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生 宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎宫颈细胞由非典
10、型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有都伴有3 3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是因可能是TERCTERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异性均在性均在90%90%以上；同时，这一扩增也能预测以上；同时，这一扩增也能预测52%52%96%96%的癌的癌前病变有恶变的可能前病变有恶变的可能 hTERChTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断 检测这一基因扩增的标准方法即为检测这一基因扩增的标准方法即为技术技术 宫颈癌宫颈癌&TERC基因基因GLPTERC/CSP3阴性阴性 GLPTERC/CSP3阳性阳性
