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1、有机肥料项目验收方案第一节有机肥料检验方案1一、各个指标的标准1二、各个指标检测方法2第二节项目验收人员21第三节项目验收流程及方式22一、验收准备22二、核对凭证22三、实物检验23四、验收方式24第一节有机肥料检验方案一、各个指标的标准(一)各个技术指标项目指标要求有效活菌数工0.2亿/g有机质(以千计)45%水分30%PH5.5-8.5粪大肠菌群数1OO个/g蛔虫卵死亡率工95%总养分质量分数（N+P502+K20,以烘干计）5%（二）重金属指标项目指标要求总ASW15mgkg总CdW3mgkg总PbW50mgkg总CrW150mgkg总Hg2mgkg二、各个指标检测方法（一）有效活菌数
2、的测定1 .稀释称取固体样品IOg,加入带玻璃珠的100nIl的无菌水中，静置20分钟，在旋转式摇床上200rmin充分震荡30分钟，即成母液菌悬液。用5ml无菌转液管分别吸取5ml上述母液菌悬液加入45ml无菌水中，按1比10进行系列稀释，分别得到10T,10-2,10-3稀释倍数的菌悬液。2 .加样及培养每个样品取3个连续适宜稀释度，用0.5ml无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液O.1ml,加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂布于琼脂表而。每一稀释度重复3次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。3 .菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个
3、稀释度取不同类型代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应该重做。4 .菌落计数以出现20-30个菌落数的稀释度的平板为计数标准,(丝状真菌为10-150个菌落数)，分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其有效菌平均菌落数在20-300个之间时，则以该菌落数计算。若有两个稀释度，其有效菌落数在20-300个之间时，应该两者菌落总数之比值决定，若其比值小于等于2应该计算两者的平均数；若大于2,则以稀释度小的菌落数平均数计算。有效活菌数按下列公式计算，同时计算杂菌数。Ni=(xXkXvim0Xv2)X100ooooooN2二(xXk
4、XvlvOXv2)X100000000式中：Nl质量有效活菌数，单位为亿每克；N2体积有效活菌数，单位为亿每毫升；X有效菌落平均数；K稀释倍数；Vl基础液体积，单位为毫升；V2菌悬液加入量，单位为毫升；VO样品量，单位为毫升；MO样品量，单位为克。X乘以（二）有机质的测定1 .方法原理用定量的重格酸钾-硫酸溶液，在加热条件下，使有机肥料中的有机碳氧化，多余的重铭酸钾用硫酸亚铁标准溶液滴定，同时以二氧化硅为添加物作空白试验。根据氧化前后氧化剂好量，计算有机碳含量，乘以系数1.724,为有机质含量。2 .试剂及制备重铭酸钾标准溶液0.Imol/L：称取经过130摄氏度烘3-4小时的重格酸钾4.90
5、31g,先用少量水溶解，然后转移入IL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀别用。重铭酸钾溶液0.8molL:称取重格酸钾39.23g,先用少量水溶解，然后转入IL的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。硫酸亚铁0.2molL:称取七水硫酸亚铁55.6g,溶于900ml水中，加硫酸20ml溶解，稀释定容至1L,摇匀备用，此溶液的准确浓度以0.lmolL重铭酸钾标准液标定，现用现标定。O.2molL的硫酸亚铁标准溶液的标定：吸取重铭酸钾标准溶液20ml,加入150ml三角瓶中，加硫酸3-5ml和2-3滴邻啡啰琳指示剂，用硫酸亚铁标准液滴定，根据硫酸亚铁标准液滴定时的消耗量按下式计算其准确浓度。C=clXvlV
6、2Cl重铭酸钾标准溶液的浓度，单位为摩尔每升;Vl吸取标准重铭酸钾的体积，单位为毫升；V2滴定时消耗硫酸亚铁标准溶液的体积，单位为毫升。X乘以邻啡啰咻指示剂：称取硫酸亚铁（分析纯）0.695g和邻啡啰琳L485g溶液100ml水中，摇匀备用，指示剂易变质，应该密闭保存于棕色瓶中。3 .测定步骤称取试样0.2-0.5g,置于50OnII的试剂瓶中,准确加入0.8InOl/L重铭酸钾溶液50mL再加入50ml浓硫酸，加一弯颈小漏斗，置于沸水中，待水浴沸腾后保持三十分钟。取出冷却至室温，用水冲洗小漏斗，洗液承接于三角瓶中。取下三角瓶，将反应物无损转入250ml容量瓶中，冷却至室温，定容，吸取50ml
7、溶液于250ml三角瓶内，加水至约100mL加2-3滴邻啡啰琳指示剂，用02.mol/1硫酸亚铁标准溶液滴定近终点时，溶液由绿色变成暗绿色，再逐滴加入硫酸亚铁标准溶液直至生成砖红色为止。同时称取02.g二氧化硅代替试样，按照相同分析步骤，使用同样的试剂，进行空白试验。如果滴定试样所用硫酸亚铁标准溶液用量不到空白试样所用硫酸亚铁标准液用量的三分之一时，则应减少称取量,重新测定。4 .分析结果有机质的含量以肥料的质量分数表示W(%)=C(v-v)XO.003X100X1.5X1.724XD(m(l-)式中：C指定标准溶液的摩尔浓度，单位为摩尔每升；VO空白试验时，消耗标定标准溶液的体积,单位为毫升
8、；V样品测定时，消耗指定标准溶液的体积，单位为毫升；0.003四分之一碳原子的摩尔质量；1. 724有机碳换算成有机质的系数；1.5氧化校正系数；m风干样质量，单位为g；x风干样含水量；D分取倍数，定容体积/分取体积，250/50。X乘以(三)水分含量测定将空铝合置于干燥箱中105摄氏度烘干0.5小时，冷却后称量记录空铝合的质量,然后称取2份平行样品，每份20g,分别加入铝合中并记录质量，将装好样品的铝合置于干燥箱中105摄氏度下烘干4-6小时,取出置于干燥器中冷去20min,后进行称量，水分含量按照下式计算，结果为两次测量的平均值。W(%)=(ml-m2)/(ml-m)X100式中：W样品水
9、分含量，单位为百分率；MO空铝合的质量，单位为gMl样品盒铝合的质量，单位为g;M2烘干后样品盒铝合的质量，单位为g;X乘以。(四)H的测定1.打开酸度计电源预热30min,用标准溶液校准。2. PH的测定，每个样品重复3次，计算三次的平均值。3,测定步骤：称取样品15g,放入50ml的烧杯中，按1:2的比例将无离子水加到烧杯中，搅拌均匀。然后静置30min,测样品悬液的PH,仪器读数稳定后记录。(五)粪大肠菌群数的测定1 ,样品稀释在无菌操作下称取样品IOg或吸取样品IOml,加入到带玻璃珠的90ml无菌水中，置于摇床上200rmin充分震荡30min,即成10-1稀释液。2 .乳糖发酵试验
10、选取三个连续适宜稀释液，分别吸取不同稀释液ImI加入到乳糖胆盐发酵管内，每一稀释度接种3支发酵管,置44.5摄氏度恒温水浴或隔水式培养箱内，培养24小时。如果所有乳糖胆盐发酵管都不产气不产酸，则为粪大肠菌群阴性,如果有产酸产气或只有产酸的发酵管，则按分离培养步骤进行。3 .分离培养从产酸产气或只产酸的发酵管中分别挑取发酵液在伊红美蓝琼脂平板上划线，置于36摄氏度条件下培养18-24小时。4 .证实试验从3中分离平板上挑取可疑菌落，进行革兰氏染色，染色反应阳性为粪大肠菌群阴性；如果为革兰氏阴性无芽泡杆菌则挑取同样菌落接种在乳糖发酵管中，置44.5摄氏度条件下培养24小时。观察产气情况，不产气为粪
11、大肠菌群阴性，产气为粪大肠菌群阳性。5 .结果证实试验为粪大肠菌群阳性的，根据粪大肠菌群阳性发酵管数，查MPN检索表，得出每克肥料样品中的粪大肠菌群数。6 .蛔虫卵死亡率的测定(1)测定方法原理将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离蛔虫卵，然后用密度较蛔虫卵密度大的溶液为漂浮液，使蛔虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验。(2)试验方法1)蛔虫卵分离称取5.010.Og样品(颗粒较大的样品应先进行研磨),放于容量为50L离心管中，注入NM)H溶液2530L,另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30min后，以200300r/min频率振荡10-15mi11o振荡完毕，取下离心管上
12、的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口,静置15-30min后，振荡1015mino2)离心沉淀从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸储水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以20002500r/min速度离心35min后，弃去上清液。然后加适量蒸储水，并用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次。3)离心漂浮往离心管中加入少量饱和NaN03溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成糊状后，再徐徐添加饱和NaN03溶液，随加随搅，直加到离管口约ICnI为止，用饱和NaNO3溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以20002500r/min速度离心35Inino用金属丝圈
13、不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸储水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和NaNO3溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作34次，直到液膜涂片观察不到蛔虫卵为止。4）抽滤镜检将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤。若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜。抽滤完毕，用弯头镶子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下,置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和蛔虫卵计数。当观察有蛔虫卵时，将含有蛔虫卵的滤膜进行培养。5）培养在培养皿的底部平铺一层厚约1cm的脱脂棉，脱脂棉上铺一张直径与培养皿相适的普通滤纸。为防止霉菌和原生动物的繁殖，可加入甲醛溶液
14、或甲醛生理盐水，以浸透滤纸和脱脂棉为宜。将含蛔虫卵的滤膜平铺在滤纸上，培养皿加盖后置于恒温培养箱中，在2830C条件下培养，培养过程中经常滴加蒸储水或甲醛溶液，使滤膜保持潮湿状态。6）镜检培养1015d,自培养皿中取出滤膜置于载玻片上，滴加甘油溶液，使其透明后，在低倍镜下查找蛔虫卵，然后在高倍镜下根据形态，鉴定卵的死活，并加以计数。镜检时若感觉视野的亮度和膜的透明度不够，可在载玻片上滴一滴蒸储水，用盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣，与水混合均匀,盖上盖玻片进行镜检。7）判定凡含有幼虫的，都认为是活卵，未孵化或单细胞的都判为死卵。8）结果计算K=100（Nl-N2）/Nl式中：K一蛔虫卵死亡率（%
15、）N1一镜检总卵数N2一培养后镜检活卵数（六）总氮的测定1.方法原理有机肥中的有机氮经过硫酸-过氧化氢消煮，转化为镂态氮。碱化后蒸储出来的氨用硼酸溶液吸收，以标准酸溶液滴定，计算样品中总氮含量。2 .试剂密度L84的硫酸，30%过氧化氢，40%氢氧化钠溶液，2%硼酸溶液，定氮混合指示剂（0.5g漠甲酚绿和0.1g甲基红溶液100ml的95%的乙醇中）。硼酸-指示剂混合液：每升2%硼酸溶液加入20ml定氮混合指示剂，并用稀碱或稀酸调至红紫色（PH约4.5）o此溶液放置时间不宜过长，如在使用过程中PH有变化，需随时用稀碱或稀酸调节。硫酸(O.025molL)或盐酸(0.05InOI/L)标准溶液3 .步骤(1)试样溶液制备称取过筛的风干试样0.5-1g,置于凯氏烧瓶底部，用少量水冲洗沾附在瓶壁上的试样，加5ml硫酸和1.5ml过氧化氢，小心摇匀，瓶口放一弯劲小漏斗，放置过夜
