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1、ICS65.020.30CCSB43B21辽宁省地方标准DB21TXXXX-XXXX驴冻精制作技术规程TechnicalcodeforproducingfrozenDonkeysemen（征求意见稿）（本草案完成时间：2023年8月）在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。XXXX -XX-XX 发布XXXX-XX-XX实施辽宁省市场监督管理局发布目次前言21范围12规范性引用文件13术语和定义14制作程序15冻精包装、保存、标识26冻精取用37冻精运输3参考文献4一，/.1刖百本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草
2、。请注意，本文件的某些内容可能涉及到专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件起草单位：辽宁省现代农业生产基地建设工程中心、辽宁省辽宁绒山羊原种场有限公司、建平县芮林牧业有限公司、阜新市绿鲜原驴肉食品有限公司。本文件主要起草人：韩迪、豆兴堂、刘兴伟、刘海英、高月、门德财、刘欣、王泽英、陈宁、王家明、郑旭、邹丽娜、王红光、绍梦跃、聂磊。本文件发布实施后,任何单位和个人如有问题和意见建议,均可以通过来电和来函等方式进行反馈,我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：
3、024-23447862。本文件起草单位通讯地址：辽宁省现代农业生产基地建设工程中心（沈阳市皇姑区陵园街7-1号），联系电话：024-67998986。驴冻精制作技术规程1范围本文件规定了驴冷冻精液的技术要求，包括制作程序及方法、冻精包装、保存、标识、取用及运输等内容。本文件适用于驴细管冻精制作，马属动物细管冻精制作可参照本规程。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版木（包括所有的修改单）适用于木文件。GB4143-2008牛冷冻精液GB5458液氮生物容器NY/T37
4、96-2020马和驴冷冻精液3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1精子活力semenvitality在37C环境下直线前进运动精子数占总精子数的百分率。3.2精液稀释液semendiIuent保护精子延长其存活时间及增加精液容量的液体。4制作程序4.1采精用假阴道法采集种公驴的精液。采精前分别用温水和灭菌生理盐水清洗公羊阴茎和包皮。安装好假阴道，用75%酒精擦拭内壁进行消毒，待酒精挥发后用稀释液冲洗；注入适量的温水，水温控制在38C40C,在内壁边缘涂抹适量的凡士林润滑剂，润滑剂忌涂深。由助手牵公驴靠近，当公驴阴茎勃起时，先用0.1%高锌酸钾对阴茎进行消毒，再用软毛巾蘸温开水擦洗干净。
5、当公驴爬跨母驴身上时，迅速将公驴阴茎导入假阴道内，切忌用手使劲握、拉阴茎，此时假阴道角度为35度为宜，待公畜抽动数次射精后将假阴道前端（集精杯方向）放低。4.2液态精液检查使用600X光学显微镜将采集的精液稀释后于37下肉眼观测活力和密度，当精子活力达70%以上密度达中上标准后用于制作冻精。4.3精液离心与稀释4.3.1离心稀释液的配制蔗糖分析纯试剂IlOg,加蒸播水1000ml煮沸至蔗糖全部溶解。4.3.2冷冻稀释液配制准确称量各配方中的基础试剂,煮沸溶解制成溶液，常温冷却后加入抗菌素和卵黄，搅拌均匀。4.3.3冻精稀释液准备可直接使用商品驴冻精稀释液或自配冻精稀释液，推荐自配冻精稀释液配方
6、：葡萄糖1.2g、柠檬酸1.3g、三羟甲基氨基甲烷2.4g、甘油5ml、卵黄20ml,双蒸储水100ml、青链霉素各LoXlO5IUo称量各配方中的基础试剂煮沸溶解制成溶液，常温冷却后加入抗菌素和卵黄，搅拌均匀。4.3.4精液离心与稀释原精经纱布(68层)过滤后，按1：1体积比例加入离心液，缓慢均匀混合后，装入离心管，在(304)范围内以2000rpm/min离心10min；弃去上清液后在干净的容器内按1：1-1：2比例加入冷冻稀释液，等温缓慢混匀。4.3.5降温平衡稀释封装后的精液放入缓冲容器内，经812h,降温至OC2。4.4精液冷冻将平衡后的细管精液移至一9551405的低温环境中，冷冻
7、5min,然后浸入液氮中。4.5细管冻精解冻将液氮中的细管冻精取出，立即浸没于3840的温水中,轻轻摆动约20s取出，用干净纱布擦干。4.6细管冻精解冻后检测使用600X光学显微镜将采集的精液稀释后于37C下肉眼观测活力，解冻后的活力不低于35%o5冻精包装、保存、标识经镜检合格后的冻精，0.5InI细管冻精采用指形管包装,每个指形管中装有合格细管冻精12齐J,冻精包装应在一80以下的温度下中操作，包装后的冻精细管棉塞端在指形管的底部，不得倒置。每8个指形管包装于一个布袋内，再贮存于装有液氮的生物容器内，定期添加液氮，使细管冻精始终浸没于液氮中。在冻精细管上,打印品种、驴号、生产日期（如：LX
8、L-5609-2020.12.05即辽西驴5609号公驴、2020年12月5日制作），在每个包装袋上标注驴号、解冻后活力和数量（如：1103、40乐86剂）。6冻精取用将冻精袋提升到液氮罐颈口下约IOcm处,再用长镶子迅速将细管冻精取出进行解冻，在颈口处操作时间应不超过10s,细管冻精在液氮罐外的停留时间应不超过3So如需继续取出细管冻精,则将冻精包装袋浸入液氮中,再重复以上操作。7冻精运输必须使用装有超低温液体的合格生物运输容器进行运输,运输过程中要保持细管冻精始终浸在超低温液体中并保持生物容器不损坏。参考文献1杨秋凤，刘兴伟，张晓鹰，等，不同降温平衡时间和温度对辽西驴细管冻精质量的影响试验A.第六届(2020)中国驴业发展大会暨首届张家口特色牧业(阳原驴)发展研讨会论文集C.2020：95-98.2武师良，张立斌，刘兴伟，等,辽西驴细管冷冻精液稀释液配方筛选试验J.畜牧兽医科学(电子版)，2019(21)，13-14.3张晓鹰，刘兴伟，张兴会，等,辽西驴细管冷冻精液制作的研究J.黑龙江动物繁殖，2020,28(1)：14-19.4刘新峰，丁向彬，石彦虎，等,不同稀释液配方对驴精液常温保存效果的影响J.黑龙江畜牧兽医.2018(13)：102-104.5杨秋凤，刘兴伟，张晓鹰，等,辽西驴鲜精人工授精试验效果观察J.现代畜牧兽医.2020(6)：27-29.
