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1、牛结核病防控进展牛结核病防控进展牛结核病牛结核病结核性肉芽肿（结结核性肉芽肿（结节）干酪样坏死或节）干酪样坏死或钙化钙化慢性消耗性人畜共慢性消耗性人畜共患病患病由牛结核分枝杆菌由牛结核分枝杆菌引起引起人型菌人型菌牛型菌牛型菌人人 犬犬 猫猫 牛牛 马马 羊羊 猪猪 鸡鸡病原病原-致病性结核分枝杆菌属致病性结核分枝杆菌属 人型菌人型菌&牛型菌牛型菌 基因水平上基因水平上99.95%同源同源 感染谱相互交叉感染谱相互交叉 10%结核病人感染牛型菌结核病人感染牛型菌 人型菌可感染牛人型菌可感染牛(Chen,2009)结核病防治的新挑战？人结核病防治的新挑战？人-牛牛人型与牛型结核菌结核菌在人与牛之间
2、的传播除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的。世界卫生组织第七次专家委员会报告牛结核是可以控制的 美国1917年开始根除计划，用约50年宣布根除牛的牛结核，但野生动物依然存在感染 英国每年约花费7000多万英镑控制牛结核 澳大利亚1970至1997年历时27年根除牛结核 控制牛结核需要科学的方法加长期的规划 根除牛结核则需国家大量的投入1.流行病学流行病学传染原：传染原：开放性开放性结核病牛结核病牛是主要的是主要的传染传染源源 引起牛结核病原引起牛结核病原牛分枝杆菌、结核分枝杆菌。牛分枝杆菌、结核分枝杆菌。引起（人）结核病原引起（人）结核病原 结核分枝杆菌、牛型结核杆菌结核分枝杆菌
3、、牛型结核杆菌 其他动物结核病原其他动物结核病原 灵长类与人相似灵长类与人相似 其他哺乳动物与牛相似、禽类以禽型结核杆菌为其他哺乳动物与牛相似、禽类以禽型结核杆菌为主主伯杰细菌学鉴定手册伯杰细菌学鉴定手册 分枝杆菌属为分枝杆菌属为2 大类大类:缓慢生长分枝杆菌缓慢生长分枝杆菌快速生长分枝杆菌（通常不致病）快速生长分枝杆菌（通常不致病）快速生长分枝杆菌（快速生长分枝杆菌（NTM）目前发现目前发现NTM有有150多种，仅多种，仅20余种致病。余种致病。代表性菌种为代表性菌种为 日内瓦分枝杆菌日内瓦分枝杆菌 致致HIVAIDS发生播散型发生播散型NTM病，并迅速致死。病，并迅速致死。I群一光产色群一
4、光产色分枝杆菌分枝杆菌 代表性菌种有：堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿猴分枝杆菌。代表性菌种有：堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、猿猴分枝杆菌。群一暗产色分枝杆菌群一暗产色分枝杆菌 代表性菌种有：瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、代表性菌种有：瘰疬分枝杆菌、戈登分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、苏加分枝杆菌。苏加分枝杆菌。群一不产色分枝杆菌群一不产色分枝杆菌 代表性菌种有鸟一胞内复合体分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌、溃代表性菌种有鸟一胞内复合体分枝杆菌、玛尔摩分枝杆菌、溃疡分枝杆菌、土地分枝杆菌、嗜血分枝杆菌。疡分枝杆菌、土地分枝杆菌、嗜血分枝杆菌。群群快速生长分枝杆菌快速生长分枝杆菌 代表性菌种有：偶然分枝
5、杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌。代表性菌种有：偶然分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌。缓慢生长分枝杆菌缓慢生长分枝杆菌结核分枝杆菌复合物结核分枝杆菌复合物(或群或群)结核分枝杆菌结核分枝杆菌 牛分枝杆菌牛分枝杆菌 非洲分枝杆菌非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌田鼠分枝杆菌麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌 禽结核分枝杆菌禽结核分枝杆菌副结核分枝杆菌副结核分枝杆菌宿主宿主 牛分枝杆菌牛分枝杆菌 主要引起牛结核病。主要引起牛结核病。也引起人类结核病。有也引起人类结核病。有5%10%以上的人结以上的人结核是由牛分枝杆菌引起。核是由牛分枝杆菌引起。还可感染牛、猪、人、鹿和大象等还可感染牛、猪、人、鹿和大象等50 种温血
6、脊种温血脊椎动物。椎动物。20 多种禽类。多种禽类。结核分枝杆菌结核分枝杆菌 主要引起人类结核病主要引起人类结核病,参考菌株为参考菌株为H37Rv;田鼠分枝杆菌田鼠分枝杆菌 引起鼠类结核病引起鼠类结核病;非洲分枝杆菌非洲分枝杆菌 引起人类结核病。引起人类结核病。主要感染途径为主要感染途径为呼吸道和消化道。呼吸道和消化道。相对来说，成年牛易经呼吸道感染，而青年牛相对来说，成年牛易经呼吸道感染，而青年牛易经消化道感染。易经消化道感染。呼吸道感染主要由带菌尘埃或气溶胶所造成。呼吸道感染主要由带菌尘埃或气溶胶所造成。消化道感染则常因饲草、饲料被污染。消化道感染则常因饲草、饲料被污染。犊牛感染主要是吮吸
7、带菌的犊牛感染主要是吮吸带菌的乳汁乳汁造成的。造成的。此外，也可通过此外，也可通过交配交配感染。感染。传染途径传染途径易感动物易感动物 牛牛 人、猪、鹿和大象等人、猪、鹿和大象等50 种温血脊种温血脊椎动物。椎动物。20 多种禽类。多种禽类。影响因素影响因素 饲养管理不良，使役过度，与牛结核病的饲养管理不良，使役过度，与牛结核病的传染有密切关系。传染有密切关系。特别是牛舍过于拥挤，通风不良，潮湿，特别是牛舍过于拥挤，通风不良，潮湿，光线不好，是造成本病扩散的重要因素。光线不好，是造成本病扩散的重要因素。饲料配比不当、饲料中缺乏维生素和矿物饲料配比不当、饲料中缺乏维生素和矿物质等，均可促进本病的
8、发生。质等，均可促进本病的发生。牛结核的分布牛结核的分布广泛流行于世界各地广泛流行于世界各地 尤以奶牛业发达国家为严重。尤以奶牛业发达国家为严重。地区流行或散发流行地区流行或散发流行2012年全球牛结核分布诊断诊断 1.流行病学流行病学 2.症状症状 3.病理变化病理变化 4.检测检测 病原病原 免疫学试验免疫学试验结核病检测结核病检测胶体金胶体金-干扰素干扰素ELISAELISAPPDPPD皮试皮试免疫学诊断免疫学诊断分子生物学分子生物学体液免疫体液免疫细菌学诊断细菌学诊断细胞免疫细胞免疫2.症状症状咳嗽咳嗽虚弱虚弱消瘦消瘦呼吸困难呼吸困难咳嗽加重咳嗽加重鼻孔干酪样鼻汁鼻孔干酪样鼻汁胸部干性
9、或湿性啰音、偶尔摩擦音胸部干性或湿性啰音、偶尔摩擦音体表淋巴结肿大体表淋巴结肿大临床症状只能提示但不能确定该病。临床症状只能提示但不能确定该病。牛型结核分枝杆菌感染初期或轻度感染时，牛型结核分枝杆菌感染初期或轻度感染时，可能不出现可能不出现临床症状临床症状。通常呈慢性经过，病初症状不明显，患病较久，由于患通常呈慢性经过，病初症状不明显，患病较久，由于患病器官不同，症状亦不一致。病器官不同，症状亦不一致。症状症状潜伏期潜伏期活动期活动期16-45d16-45d长者达数月，甚至数年、终生长者达数月，甚至数年、终生无明显症状无明显症状不发病不发病肺结核肺结核肺外结核肺外结核 咳嗽咳嗽 病牛常发肺结核
10、，易疲劳，常有短而干的咳嗽，病牛常发肺结核，易疲劳，常有短而干的咳嗽，尤其当起立、运动、吸入冷空气或尘埃时尤其当起立、运动、吸入冷空气或尘埃时 随后咳嗽加重，频繁且表现痛苦。呼吸次数增随后咳嗽加重，频繁且表现痛苦。呼吸次数增多或发生气喘。多或发生气喘。消瘦消瘦 消瘦，贫血，有的牛肩前、股前、腹股沟、颌消瘦，贫血，有的牛肩前、股前、腹股沟、颌下、咽及颈淋巴结等体表淋巴结肿大。当纵膈下、咽及颈淋巴结等体表淋巴结肿大。当纵膈淋巴结受侵害肿大，压迫食道，则有慢性胀气淋巴结受侵害肿大，压迫食道，则有慢性胀气症状。病势恶化，可能发生全身性结核，即粟症状。病势恶化，可能发生全身性结核，即粟粒性结核。胸膜、腹
11、膜发生结核病灶时呈现所粒性结核。胸膜、腹膜发生结核病灶时呈现所谓的谓的“珍珠病珍珠病”，胸部听诊可听到摩擦音。，胸部听诊可听到摩擦音。乳房感染乳房感染多数病牛乳房常被感染侵害，可见多数病牛乳房常被感染侵害，可见乳房上淋巴结肿大无热无痛，泌乳乳房上淋巴结肿大无热无痛，泌乳量减少，乳汁初期无变化，病重时量减少，乳汁初期无变化，病重时呈水样稀薄。呈水样稀薄。顽固性下痢顽固性下痢肠道结核多见于犊牛，可表现为消肠道结核多见于犊牛，可表现为消化不良，食欲不振，顽固性下痢，化不良，食欲不振，顽固性下痢，迅速消瘦。迅速消瘦。性机能紊乱性机能紊乱生殖器官结核可出现性机能紊乱，发情生殖器官结核可出现性机能紊乱，发
12、情频繁且表现性欲亢进，慕雄狂与不孕。频繁且表现性欲亢进，慕雄狂与不孕。孕畜流产，公畜副睾及睾丸肿大，阴茎孕畜流产，公畜副睾及睾丸肿大，阴茎前部可发生结节、糜烂等。前部可发生结节、糜烂等。神经症状神经症状中枢神经系统主要是脑及脑膜发生结核中枢神经系统主要是脑及脑膜发生结核病变，常引起神经症状，如癫痫样发作、病变，常引起神经症状，如癫痫样发作、运动障碍等。运动障碍等。禽型结核分枝杆菌感染禽型结核分枝杆菌感染可能无临床症状，但亦可能出现昏可能无临床症状，但亦可能出现昏睡和消瘦。在应激条件下，可能发睡和消瘦。在应激条件下，可能发生突然死亡，这往往与严重的肝脏生突然死亡，这往往与严重的肝脏病变有关，象这
13、样的病变在死后解病变有关，象这样的病变在死后解剖时容易观察到。剖时容易观察到。禽型结核分枝杆菌能引起人的一种禽型结核分枝杆菌能引起人的一种渐进性的难以治疗的疾病。因此所渐进性的难以治疗的疾病。因此所有操作均须在有充分生物防护装置有操作均须在有充分生物防护装置的条件下进行。的条件下进行。人型结核分枝杆菌感染人型结核分枝杆菌感染除灵长类动物会出现咳嗽等症状除灵长类动物会出现咳嗽等症状外，其他动物一般无明显临床症外，其他动物一般无明显临床症状。状。3.病理变化病理变化 牛型结核分枝杆菌感染牛型结核分枝杆菌感染病变可发生在所有内脏器管病变可发生在所有内脏器管最常见的是肺、胸膜、肠系膜淋巴结。最常见的是
14、肺、胸膜、肠系膜淋巴结。感染早期，可在肺门部位及肺门淋巴结感染早期，可在肺门部位及肺门淋巴结见到干酪样坏死或钙化的病灶。见到干酪样坏死或钙化的病灶。感染中后期，可在胸膜、胸腔见到感染中后期，可在胸膜、胸腔见到“珍珍珠状珠状”增生，形成所谓的增生，形成所谓的“珍珠胸珍珠胸”。在肠系膜可见到串珠状淋巴结肿大。在肠系膜可见到串珠状淋巴结肿大。分枝杆菌培养鉴定 实验流程1、染色镜检 确定是否是抗酸菌的培养阳性菌株2、确定该菌株属于结核分枝杆菌复合群还是NTM 首先经对硝基苯甲酸(PNB)生长试验、28生长试验、耐热触酶试验、观察记录细菌的生长速度、菌落形态和菌落颜色确定该菌株属于结核分枝杆菌复合群还是
15、NTM。3、确定该菌株属于结核分枝杆菌复合群什么型 进行TCH生长试验、硝酸还原试验和烟酸试验进行菌种鉴定。结核菌素反应与病变 牛结核菌素阳性反应，但剖检时找不到病变。当牛结核病在牛群中严重流行时，遇到这种情况不多。但对于牛结核病清净的牛群，这种情况就比较常见了。无病变的牛结核菌素阳性反应是不是完全属于非特异性反应？这种情况很难作出明确诊断，因为有些牛虽然感染牛型结核分枝杆菌，但病变很少或不明显，解剖时不易发现，有的感染牛没有任何病变。病原分离及鉴定 病料 淋巴结 痰 乳 精液 子宫分泌物 尿和粪便病原检测 染色镜检 培养特性 动物试验 生化试验 分子生物学诊断 染色镜检 涂片 先在玻片上涂布
16、一层薄甘油蛋白，甘油蛋白的配制：鸡蛋白20mL，甘油20mL，水杨酸钠0.4g，混匀。如检验标本为乳汁等含脂肪较多的材料，在涂片制成后，用二甲苯或乙醚脱脂12分钟后倾去，再滴加95酒精以除去二甲苯，待酒精挥发后即可染色。然后吸取标本滴加其上，涂布均匀。萋尼氏抗酸染色 涂片后，经火焰固定 加石炭酸复红染色液 用100mL 95酒精加3g碱性复红配制成碱性复红饱和酒精溶液，取碱性复红饱和酒精溶液10mL，与5苯酚溶液90mL混合后用滤纸滤过 将玻片在火焰上加热至出现蒸汽（不能产生气泡），如此热染5分钟（如染色液干涸，须加适量补充）。水洗后滴加3盐酸酒精脱色3060秒（至无色素脱下为止）浓盐酸3mL，95酒精97mL，混匀。水洗后，以骆氏美兰染色液复染1分钟。甲液：美兰0.3g，95酒精30mL。乙液：0.01氢氧化钾溶液100mL。混合即成 水洗，吸干，镜检。抗酸菌应不被盐酸酒精脱色而染成红色，其他细菌与动物细胞可被盐酸酒精脱色而均被染成兰色。菌体形态 牛结核分枝杆菌呈细长平直或微弯曲的杆菌，长1.5-5微米，宽0.2-0.5微米.在陈旧培养基上或干酪性淋巴结内的菌体，偶而可见长达10微米
