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1、 page 0 2010 RocheHPV-DNA检测现状检测现状及及2012最新国际宫颈癌筛查指南最新国际宫颈癌筛查指南内容：内容：1.HPV介绍介绍2.HPV-DNA检测产品及各自特点检测产品及各自特点3.2012最新国际宫颈癌筛查指南最新国际宫颈癌筛查指南HPV介绍介绍根据感染组织类型分为：根据感染组织类型分为：皮肤组织皮肤组织 粘膜组织粘膜组织HPV介绍介绍E：早期基因区编码早：早期基因区编码早期期6个蛋白个蛋白L：晚期基因区编码晚：晚期基因区编码晚期期2个蛋白个蛋白感染后的存在状态：感染后的存在状态：状态一：非整合状态状态一：非整合状态状态二：整合到宿主细胞状态二：整合到宿主细胞ht
2、tp:/ HPV介绍介绍HPV-DNA检测（进口并取得检测（进口并取得FDA注册证）注册证）Logo公司公司SFDAFDAQIAGENYYHologicYYROCHEYYGen-probeNYHPVDNA检测（国产）检测（国产）Logo公司公司SFDAFDA凯普YN亚能YN港龙YN金菩嘉YN透景YN之江YN达安YNHPV-DNA检测（按不同原理分类）检测（按不同原理分类）原理原理代表公司代表公司杂交捕获QIAGEN酶切信号放大HologicPCR荧光法ROCHE、港龙、达安、凯普、之江PCR-反向点杂交（PCR-膜杂交）亚能、凯普TMAGen-probe流式荧光杂交法透景HPVDNA检测检测Q
3、IAGEN HC2原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂交检测方法原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂交检测方法（杂交捕获）（杂交捕获）流程：裂解杂交捕获反应冲洗信号收集判读流程：裂解杂交捕获反应冲洗信号收集判读时间：手工操作时间：手工操作3.5小时，仪器操作小时，仪器操作4.5小时小时结果：结果：检测检测13种种HPV高危型，不分型高危型，不分型主要问题：与个别主要问题：与个别HPV亚型会发生交叉反应，无内对照，约亚型会发生交叉反应，无内对照，约5%假阳性率假阳性率DML2000HPVDNA检测检测Hologic Cervista HRHPV原理：基于专利原理：
4、基于专利Invader 酶切信号放大技术酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测时间：时间：4小时自动化孵育小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）小时人工操作（半自动）结果：结果：14种高危型种高危型16、31、33、52、58、18、39、45、66、68、51、56、66，不分型，不分型主要问题：可能与其它主要问题：可能与其它HPV如如HPV67和和70发生交叉反应，从而产生假阳发生交叉反应，从而产生假阳性结果性结果荧光测读仪温度循环仪HPVDNA检测检测Hologic Cervista(r)HPV 16/18原理：基于专利原理
5、：基于专利Invader 酶切信号放大技术酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测流程：磁珠分离核酸提取酶切信号放大荧光检测时间：时间：4小时自动化孵育小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）小时人工操作（半自动）结果：结果：仅对仅对16、18分型分型主要问题：可与高水平的高危型主要问题：可与高水平的高危型HPV31发生交叉反应。非常低的发生交叉反应。非常低的HPV感感染或样本可能导致假阴性染或样本可能导致假阴性荧光测读仪温度循环仪HPVDNA检测检测ROCHE PCR多色荧光探针法多色荧光探针法原理：基于原理：基于PCR反应结合不同荧光染料的探针检测高危型反应结合不同荧光染
6、料的探针检测高危型HPV并对并对16、18分型分型流程：核酸提取流程：核酸提取PCR扩增检测扩增检测时间：时间：5小时（手工操作时间小时（手工操作时间15分钟）分钟）结果：结果：Cutoff值，值，14种高危型，并对种高危型，并对16、18分型分型最新产品，文献见美国最新产品，文献见美国ATHENA实验（实验（Lancet Oncol）cobas 4800 HPV检测系统检测系统HR1618Contr.Ch1Ch2Ch3Ch431,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,681618333139355145525658596668HPVDNA检测检测凯普凯普21种人乳头状瘤
7、病毒（种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒）分型检测试剂盒原理：原理：PCR+基因芯片导流杂交技术基因芯片导流杂交技术流程：流程：核酸提取核酸提取PCR扩增扩增导流杂交显色导流杂交显色时间：时间：3.5-4 3.5-4个小时（手动）个小时（手动）结果：结果：21格某格显色即为某格某格显色即为某HPV亚型阳性（亚型阳性（13+5+3），），对对21种种HPV分型分型（含其它（含其它HPV亚型）亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验HPVDNA检测方法检测方法亚能人乳头瘤病毒基因分型亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型型)检测试剂盒检
8、测试剂盒原理：使用自行设计的原理：使用自行设计的HPV基因组中的特异性引物，对待测样品中可能基因组中的特异性引物，对待测样品中可能存在的存在的HPV 基因型进行基因型进行PCR扩增并进行生物素标记，再将扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物扩增产物与固定在芯片上的与固定在芯片上的23个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学显色方式判读结果显色方式判读结果(PCR-反向点杂交法反向点杂交法)流程：流程：核酸提取核酸提取PCR扩增扩增导流杂交显色导流杂交显色结果：膜条显色直接提示感染的结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，亚型，23种亚型（种亚型
9、（18+5）（含其它）（含其它HPV亚型）亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验HPVDNA检测检测透景透景luminex原理：流式荧光技术，原理：流式荧光技术，PCR产物和微球上交联的探针根产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后在流式荧光检测仪上检测荧光信号。在流式荧光检测仪上检测荧光信号。流程：核酸提取流程：核酸提取PCR扩增微球杂交荧光标记反应扩增微球杂交荧光标记反应荧光分析荧光分析结果：结果：26种亚型（种亚型（19+7），含其它），含其它H
10、PV亚型亚型主要问题：没有经过临床实验主要问题：没有经过临床实验SFDA认证认证 FDA认证认证HPV高危型高危型HPV16/18分型分型有临床研究确有临床研究确认认cut-off值值仪器可扩展性仪器可扩展性罗氏罗氏cobas 480014肿瘤靶向治疗基因突变肿瘤靶向治疗基因突变检测检测凯杰凯杰Hc213英硕力英硕力Cervista 14/国产：亚能国产：亚能14无自主仪器无自主仪器国产：凯普国产：凯普14无自主仪器无自主仪器国产：港龙国产：港龙13无自主仪器无自主仪器国产：透景国产：透景14不详不详HPV-DNA检测主要产品对比表检测主要产品对比表2012最新国际宫颈癌筛查指南最新国际宫颈癌
11、筛查指南2012年刊登在美国癌症学会杂志年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴和美国阴道镜及宫颈病理学会杂志（道镜及宫颈病理学会杂志（ASCCP）-宫颈癌预防及早期诊断指南宫颈癌预防及早期诊断指南2012年，年，ACS/ASCCP/ASCP 最新指南最新指南HPV联合细胞学筛查：联合细胞学筛查：30-65岁的妇女岁的妇女Pap&HPVASC-US&HPV+or LSILNILM&HPV+Repeat co-testHPV16 or HPV16/18 genotypingColposcopy1 year1 yearNILM&HPV-ASC-US&HPV-Colposcopy5 years+-
12、+5 years-Saslow D,et al.Am J Clin Pathol 2012;137:516-42Cytology alone is noted as an acceptable(but not preferred)option for women 30-65 yrs old every 3 yearsimmediately旧指南与新指南的区别旧指南与新指南的区别191.ASC-US triage(21 years)2.Adjunct screening(30 years)ASC-USHPVDNAColposcopyRe-screen(LBC;1 year)Negative Cy
13、tology(NILM)+HPVDNA+HPV16/18ColposcopyRe-screen(LBC&HPV;1 year)+Screen(3 year)Re-screen(LBC&HPV;1 year)Re-screen(LBC;3 years*acceptable OR LBC and HPV;5 years*preferred)Re-screen(5 years)co-testing(30-65 years)For women(30 65 yrs),cytology alone every 3 years is noted as an acceptable(but not preferred)option only联合检测将是未来的筛查方向！联合检测将是未来的筛查方向！细胞学HPV DNAHPV DNA检测检测联合检测212012年起，国际年起，国际ACS，ASCCP，ASCP指南一同建议指南一同建议 细胞学阴性、细胞学阴性、HPV16/18(+)的女性应立即进行阴道镜检查的女性应立即进行阴道镜检查 2012 ACS,ASCCP，ASCP Guidelines（美国癌症学会、美国阴道镜和宫颈病理学会，美国临床病理学会指南）（美国癌症学会、美国阴道镜和宫颈病理学会，美国临床病理学会指南）谢 谢！
