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1、临床免疫定性检测临床免疫定性检测的性能验证的性能验证高速列车性能验证高速列车性能验证n空气动力学空气动力学n速度速度n车体转向架运行车体转向架运行n固定、悬挂的零部件强度固定、悬挂的零部件强度n稳定性稳定性n舒适感舒适感n故障率故障率n第第3页页测定系统测定系统方法学方法学操作程序操作程序校准品校准品仪器仪器试剂试剂测定系统的关键要素测定系统的关键要素医学检验为什么需要医学检验为什么需要“性能验证性能验证”？n评价检测系统是否满足临床检测和认评价检测系统是否满足临床检测和认可组织的要求（可组织的要求（ISO15189）；）；n验证厂家提供的试剂参数能否在本实验证厂家提供的试剂参数能否在本实验室
2、得到重现。验室得到重现。什么时候进行性能验证什么时候进行性能验证n使用新的检测试剂或系统时；使用新的检测试剂或系统时；n更换检测试剂或系统时。更换检测试剂或系统时。更换新的试剂或系统意义：更换新的试剂或系统意义：n更易于操作更易于操作n更高的检测性能更高的检测性能n更经济更经济n更能满足实验室测定要求更能满足实验室测定要求 一一.定性临床应用与分类定性临床应用与分类1 1、定性测定的临床应用、定性测定的临床应用免疫学测定免疫学测定：感染性疾病、肿瘤标志物：感染性疾病、肿瘤标志物核酸和基因检测核酸和基因检测微生物检验微生物检验细胞学检验细胞学检验寄生虫检验寄生虫检验2 2、定性实验的临床分类、定
3、性实验的临床分类筛查实验：如便潜血、筛查实验：如便潜血、TPTP诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定诊断实验：如微生物学培养与细菌鉴定确认实验：对以上已做出的检验结果进行验确认实验：对以上已做出的检验结果进行验证和确认证和确认3.3.几个重要概念几个重要概念n筛查试验筛查试验：临床上筛查方法通常用于检测整个人临床上筛查方法通常用于检测整个人群（或者人群中的特定群（或者人群中的特定部分部分）中）中特定指标特定指标的情况。的情况。例如对例如对需输血患者需输血患者样本做样本做HIV血清学试验血清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有高敏感性以高敏感性以
4、确保真阳性确保真阳性结果的结果的检出检出。如果筛查试。如果筛查试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认常严重，这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。试验加以弥补。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;Approved Guideline3.3.几个重要概念几个重要概念n诊断试验诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或通常用于临床怀疑某种特定疾病或状况是否存在的诊断状况是否存在的诊断性性定性
5、试验。例如各种微定性试验。例如各种微生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。临床上临床上对治疗的要求，对治疗的要求，诊断试验诊断试验应应具有很具有很好的敏感性和特异性好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还进行。如果诊断试验后还进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可以稍确认试验，那么诊断试验的特异性要求可以稍微降低。微降低。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;Approved Guideline3.3.几个重要概念几个重要概念n确认试验确认试验：
6、确认试验用于验证筛查试验或者诊确认试验用于验证筛查试验或者诊断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过设计使其具有设计使其具有较高的特异性较高的特异性（有时甚至以牺牲（有时甚至以牺牲敏感性为代价）以及敏感性为代价）以及高阳性预测值高阳性预测值。免疫印迹免疫印迹试验就是一种用于试验就是一种用于HIV血清学试验等筛查试验血清学试验等筛查试验之后的确认试验。之后的确认试验。3.3.几个重要概念几个重要概念n敏感性敏感性或阳性测定能力指数（或阳性测定能力指数（DI（）：（）：可定义为一
7、实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力。DI（）=真阳性/（真阳性+假阴性）100%n特异性特异性或阴性测定能力指数（或阴性测定能力指数（DI（）：（）：则为对阴性样本测定给出阴性结果的能力 DI（）=真阴性/（真阴性+假阳性）100%3.3.几个重要概念几个重要概念n阳性预示值：阳性预示值：即测定为阳性的标本实际上为阳即测定为阳性的标本实际上为阳性的可能性。性的可能性。=真阳性真阳性/（真阳性（真阳性+假阳性）假阳性）100%n阴性预示值阴性预示值:则为一份给出阴性结果的样本实则为一份给出阴性结果的样本实际上为阴性的可靠性。际上为阴性的可靠性。=真阴性真阴性/（真阴性（真阴性+假阴性）假阴性
8、）100%临床诊断（金标准）临床诊断（金标准）总计总计阳性阳性阴性阴性验证方法验证方法阳性阳性A AB BA+BA+B阴性阴性C CD DC+DC+D总计总计A+CA+CB+DB+DN N敏感度敏感度=100%=100%A A/（A+CA+C）特异性特异性=100%=100%D D/（B+DB+D）相关样本的患病率相关样本的患病率=100%=100%（A+CA+C）/N/N阳性预测值（阳性预测值（PVPPVP）=100%=100%A A/（A+BA+B）阴性预测值阴性预测值 （PVNPVN）=100%=100%D D/（C+DC+D）方法效率（正确率）方法效率（正确率）=100%=100%（A
9、+DA+D）/N/N “预示值”对临床检验结果影响预示值对一个有预示值对一个有95%敏感性和敏感性和95%特异性的特异性的试剂检测结果的影响（试剂检测结果的影响（100,000人）人）结结 果果 10%感染率感染率 1%感染率感染率 检出检出(+)未检出未检出()检出检出(+)未检出未检出()+9,500 500 950 50 4,500 85,500 4,950 94,050敏感性敏感性(TP/TP+FN)95%95%特异性特异性(TN/TN+FP)95%95%阳性预示值阳性预示值TP/TP+FP 9500/9500+4500=67.9%950/950+4950=16%阴性预示值阴性预示值T
10、N/TN+FN85500/85500+500=99.4%94050/94050+50=99.9%二二.定性定性检测系统的性能验证检测系统的性能验证 验证的内容验证的内容:1 1.正确度（准确度）正确度（准确度）2.2.精密度精密度3.3.敏感性敏感性 4.4.特异性特异性 5.5.CUTOFFCUTOFF值验证值验证6.6.其他（需要时）其他（需要时）nEP15A2nEP17AnEP12nClinical Laboratory and Standards Institute(CLSI)涉及免疫定性检测评价方法标准涉及免疫定性检测评价方法标准医学实验室精密度和准确度的确认医学实验室精密度和准确度
11、的确认检出限与定量限的评价检出限与定量限的评价定性检测评价定性检测评价临床实验室标准化协会临床实验室标准化协会性能验证前的准备性能验证前的准备n应熟悉待验证的试剂或系统应熟悉待验证的试剂或系统n进行必要的培训，包括进行必要的培训，包括样本的处理和储存、样本的处理和储存、试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合理的解释以及系统的质量控制果合理的解释以及系统的质量控制等。等。n制定质量保证计划制定质量保证计划n确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）n确定比较的方法确定比较的方法CLSI EP12-A2 User Prot
12、ocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;Approved Guideline性能验证的合格标准从何而来？性能验证的合格标准从何而来？n试剂盒说明书试剂盒说明书n国际和或国际标准国际和或国际标准性能验证前样本的准备性能验证前样本的准备n质控品：使用商品化质控物进行，包括阴质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和阳性。性和阳性。n样本的采集和保存：采集时间、保存方式样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必须保证一致性。等必须保证一致性。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Quali
13、tative Test Performance;Approved Guideline方法比较方法比较用样本数量用样本数量n取决于评价者的目的。取决于评价者的目的。作为最低要求，检作为最低要求，检测要持续到至少用比较方法获得测要持续到至少用比较方法获得50个阳性个阳性样样本本。n并且至少用比较方法获得并且至少用比较方法获得50例阴性样例阴性样本本以以确定此种检测方法的特异性。确定此种检测方法的特异性。CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;Approved Guideline 1.准确度验
14、证准确度验证1）检测已知值的检测已知值的参考物质参考物质 n室间质评材料室间质评材料(卫生部或者卫生部或者CAP)n厂商提供的已赋值的参考材料厂商提供的已赋值的参考材料n分析用参考方法或决定方法定值的材料。分析用参考方法或决定方法定值的材料。2）方法比较试验：样本数为方法比较试验：样本数为10-20个，两种方法个，两种方法同时测定同样的样品，用同时测定同样的样品，用KAPPA检验方法分析检验方法分析两种方法检测结果一致性两种方法检测结果一致性.(比如比如HBV酶免法和发酶免法和发光法比对光法比对)选取选取4040份（份（2020份）样本份）样本,最好阴阳性各半最好阴阳性各半随机盲法重新分号随机
15、盲法重新分号检测样本检测样本将所有检测结果汇总填表将所有检测结果汇总填表计算评价性能指标计算评价性能指标2.精密度验证精密度验证1）批内精密度批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检同一份样本在同一批次内平行重复检测测10次次.然后计算均值然后计算均值,SD和和CV.2）批间精密度批间精密度:同一份样本连续检测同一份样本连续检测10天天,每天平行每天平行检测双孔检测双孔.然后计算均值然后计算均值,SD和和CV.Note:Note:用用S/COS/CO比值进行统计计算比值进行统计计算.最好选择临界值最好选择临界值,或弱阳性样本或弱阳性样本.判断标准判断标准:批内批内CVCV小于小于15%,1
16、5%,批间批间CVCV小于小于25%.25%.批内重复性的验证批内重复性的验证n高、中、低三个浓度的样本，在一批检测高、中、低三个浓度的样本，在一批检测内，重复检测内，重复检测20次（孔），计算所得次（孔），计算所得S/CO值的均值和值的均值和SD，计算批内，计算批内CV%。n判断结论：应判断结论：应试剂说明书所标明的批内变试剂说明书所标明的批内变异。异。ELISA的批内变异的批内变异CV%应应10%。批间重复性批间重复性的验证的验证n高、中、低三个浓度的样本，在高、中、低三个浓度的样本，在10天以上时间天以上时间内单次（孔或管）重复进行内单次（孔或管）重复进行20批检测，计算所批检测，计算所得得S/CO值的均值和值的均值和SD，计算批间，计算批间CV%。n判断结论：应判断结论：应试剂说明书所标明的批间变异。试剂说明书所标明的批间变异。ELISA的批间变异的批间变异CV%应应15%。3.敏感性敏感性1）验证方法）验证方法:取取10-20份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计份已知真阳性的样本，用常规检测方法检测，计算检测阳性的样本占样本总数的比例。算检测阳性的样本占样本总数的比例。
