HIV试验室风险评价-.docx

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1、HIV抗体初筛实验室风险评估报告1.评估目的获得性免疫缺陷综合症(AIDs)是由人类免疫缺陷病毒(HlV)感染引起的严重威胁人类健康的性传播疾病,临床实验室工作人员每天处理着大量血液标本,因此他们面临着严峻的HIV职业暴露危险,保护临床检验人员的健康,已成为迫切需要解决的问题.此次评估的主要目的是在实验活动中根据HIV可能对个体或群体或实验环境造成危害的上下来制定相应举措的平安防范制度和操作程序,选择相应等级的生物实验室及设备配置,实验人员使用相应举措的防护举措和使用相符的平安防护设备,以及在发生意外泄漏或意外事故时能及时采取有效举措,来到达保证实验工作人员不被感染和实验环境不被污染的目的.2

2、.评估依据2.1 病原微生物实验室生物平安治理条例2.2 实验室生物平安通用要求GB19489-20212.3 人间传染的病原微生物名录2.4 WHO实验室生物平安手册2. 5艾滋病防治条例2.6 中华人民共和国传染病防治法2.7 可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输治理规定2. 8全国艾滋病检测技术标准2021年修订版3、危害程度分类3. 1分类等级在卫生部公布的?人间传染的病原微生物名录?中将此病毒列为第二类病原微生物,属能引起人和灵长类动物发病逆转录病毒科的慢病毒属,但一般情况下对未与HIV无病症携带和艾滋病患者有性接触和血液传播的健康工作者、群体、家畜或环境不会引起危害的

3、病原微生物.3. 2不同实验操作生物平安实验室级别要求HTV抗体检测(包括筛查和确证实验)、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合n级生物安全实验室(BSL-2)要求的艾滋病检测实验室中进行.本实验室是HIV初筛实验室,应用ELTSA方法进行IITV抗体筛查.根据?名录?的规定,未经培养的感染材料的操作可在BSL-2实验室进行.4、生物因子的特性3.6 HIV在病毒分类中属逆转录病毒科慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组.迄今为止,根据血清学反响和病毒核酸序列测定,全球流行的HIV可分为2型:HIV1型和口.2型.在HIV1型内,根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性又进一步分

4、为3个组:M组(主要组)、.组(外围组)和N组(新组或非乂非.组),M组内又可分为AJlO个亚型.在口.1型和口.2型之间,其核昔酸序列有45%的同源性,并且存在免疫交叉反响.应用免疫印迹法(Westblot)可以将二者明确地区别开来.4. 2环境中的稳定性:HIV对理化因素反抗力较弱,56C加热30min可被灭活,但在室温下可存活7天.经化学消毒剂0.5%次氯酸钠、10%漂白粉、50%乙醇、0.3%H2025%来苏儿处理IOmin可被灭活.紫外线对该病毒无杀灭作用.4.3变异性:HIV基因组可发生变异,最易发生变异的基因编码包膜糖蛋白env和调节基因nefc,根据env基因序列异同可将HIV

5、T型分为A、B、C、D、E、F、H、08个亚型.Env的变异率为千分之一.1.4 传染源:主要的是HlV携带者及AIDS患者.1.5 传播途径:主要通过血液传播、母婴传播、性传播、医源性感染.1.6 易感性:免疫功能低下者、结核病患者、器官移植者、输血及用血液制品者、性滥者、同性恋、吸毒者高危性人群易感.1.7 潜伏期:是从HIV感染到出现艾滋病临床病症和体征的时间.平均潜伏期(50%的HIV感染者进展到艾滋病期的时间)为7年8年.在感染后的一般需要2-12周,平均45天左右血液中才可检测到IITV抗体.从感染到机体产生抗体的这一段时间检测不到HIV抗体,医学称之为窗口期.在窗口期虽测不到HI

6、V抗体,但假设被感染,体内同样有HIV病毒,同样具有传染性.4. 8剂量-效应(反响)关系:血液中HIV浓度达1.00X104拷贝/ml,被HlV污染环境的锐器剌伤而感染的比率为0.3%;可致人患艾滋病4. 9致病性:HIV病毒侵入人体后,其外表糖蛋白gpl20与细胞外表受体蛋白CD4以高亲和力结合,吸附到宿主细胞上;gpl20再与宿主细胞外表辅助受体相互作用,使病毒与宿主细胞膜更接近;gp41产生一系列构象变化,其N端的融合肽片段插入宿主细胞膜,导致病毒包膜与细胞膜的最终融合,病毒RNA进入细胞.在HTV感染后,最先能够监测到病毒RNA,然后是P24抗原,最后是抗体.在感染后的1014d内,

7、病毒RNA水平是呈指数上升,随后下降并保持在持续稳定的水平上,进入口可无病症期.p24抗原水平随着病毒RNA水平的开展而开展,在急性感染期就可以出现,被认为是病毒复制的间接标志,但由于检测方法的灵敏度不够而使得其检出时间要比RNA晚.从HlV感染到能够检测出HIV抗体这一时期,被称作“窗口期”.在窗口期,能够通过病毒RNA、p24抗原和CD4淋巴细胞水平来确定HIV感染.CD4淋巴细胞水平随着感染的开展而逐渐下降,当其在血液中细胞下降到200个mL时,就会发生严重的免疫缺陷,患者就被确诊为艾滋宿主范围:宿主范围较为广泛.5、流行病学、诊断、治疗和预防5. 1流行病学自1981年美国首次报告艾滋

8、病以来,被西方人成为“20世纪的瘟疫”.这种病以侵袭人体免疫细胞CD4为主,造成细胞免疫功能缺陷,并继发体液免疫功能缺陷.自1985年我国首次报道例以来艾滋病在我国的流行呈逐年上升的趋势,目前已进入快速增长期.随着艾滋病流行趋势的日益严重,临床就诊的患者也越来越多,患者和无病症病毒感染者是本病的传染源.病毒主要存在于感染者的血液、精液、子宫和阴道分泌物中,也可在乳汁、唾液、尿液和眼泪中别离到病毒,但以血液、精液、子宫和阴道分泌物中的病毒滴度最高,而其他体液(唾液、尿液和眼泪)由于病毒滴度低而缺乏以构成传染.高危人群有静脉注射毒者、性病患者、暗娼、HlV感染者的婴儿、局部有偿供血者、屡次输血和血

9、制品者及血透者.HIV传播的先决条件为大量而完整的传染性病毒进入易感者的恰当门户,感染HlV的可能程度取决于接触患者体液的时机、接触次数、病毒量以及是否采取保护举措.5. 2临床表现从感染艾滋病病毒到发病有一个完整的自然过程,临床上将这个过程分为四期:急性感染期、潜伏期、艾滋病前期、典型艾滋病期.不是每个感染者都会完整的出现四期表现,但每个疾病阶段的患者在临床上都可以见到.5. 2.1急性感染期窗口期也在这个时间.HIV侵袭人体后对机体的刺激所引起的反响.病人发热、皮疹、淋巴结肿大、还会发生乏力、出汗、恶心、呕吐、腹泻、咽炎等.有的还出现急性无菌性脑膜炎,表现为头痛、神经性病症和脑膜刺激症.5

10、. 2.2潜伏期感染者可以没有任何临床病症,但潜伏期不是静止期,更不是安静期,病毒在持续繁殖,具有强烈的破坏作用.潜伏期指的是从感染HIV开始,到出现艾滋病临床病症和体征的时间.艾滋病的平均潜伏期,现在认为是2-10年.这对早期发现病人及预防都造成很大困难.5. 2.3艾滋病前期潜伏期后开始出现与艾滋病有关的病症和体征,直至开展成典型的艾滋病的一段时间.主要的临床表现有:.淋巴结肿大此期最主要的临床表现之一;全身病症病人常有病毒性疾病的全身不适,肌肉疼痛等病症;各种感染此期除了上述的浅表淋巴结肿大和全身病症外,患者经常出现各种特殊性或复发性的非致命性感染.5.2.4典型的艾滋病期有的学者称其为

11、致死性艾滋病,是艾滋病病毒感染的最终阶段.此期具有三个根本特点:严重的细胞免疫缺陷;发生各种致命性时机性感染:发生各种恶性肿瘤.艾滋病的终期,免疫功能全面崩溃,病人出现各种严重的综合病症,直至死亡5.3实验室诊断1.3.1HIV抗体检测检测HlV抗体是常规使用的HIV病原学诊断的方法.HIV抗体检测方法有初筛试验和确认试验组成.初筛试验结果阳性者再做确证试验以明确诊断.目前的HIV抗体检测都是使用新一代试剂,可同时检测口印1型和口印2型.初筛检测的方法有间接酶联免疫吸附试验(ELISA).明胶颗粒凝集试验(PA)和金标法(SPOT),确认检测的方法为蛋白印迹试验(WB).医生一般会根据病人的感

12、染史,如供血史、受血史、性接触史、吸毒、高危职业等结合临床体征对病人进行HlV检测.检测出HlV抗体的时间取决于HIV感染者的反响性和HIV病毒的特性,一般在感染后1一3个月出现HIV抗体.HIV抗体初筛结果阴性者或可疑者,半年后可进行第二次检测,但不需要屡次检测.HIV抗体初筛结果阳性者,须进一步做确证试验.确证试验报告HIV抗体可疑的病人,应在3个月后进行复查.确证结果阳性者都具有HIV特异的带型,确认结果是可靠的.1.3.2P24抗原检测P24抗原检测是诊断早期HIV感染的一种方法.HIV感染者多数在感染13个月才出现HIV抗体,抗体出现之前的这个时期称为“感染后窗口期”.在窗口期,HI

13、V抗体是检测不到的.P24抗原的检测有助于多数急性感染者血清HIV抗体阳转之前的诊断,大约可以使抗体窗口期缩短1周,由于估计检测P24抗原到检出P24抗体间隔只有1周时间.但由于不是所有新近感染的人都可以检出P24抗原,加上该项检测费用较高,所以一般不作为常规诊断工程.1.3.3白细胞和淋巴细胞检测医生对HIV抗体确认为阳性者进行临床分期或治疗时,才需要做一些辅助性实验室检查,如白细胞和淋巴细胞检测.AIDS病人周围白细胞及淋巴细胞总数是下降状态,淋巴细胞的变化可用于评价机体免疫系统损害的程度,CD4值对于评价HIV感染的病期及预后极为重要,特别是病程后期更为重要.(1) WBC、Hb下降.(

14、2) CD4T淋巴细胞总数下降,200mm3,或为200-500/mm3.(3) CD4/CD8比值Vl(正常时,CD4CD8比值1).(4)测定82微球蛋白,AIDS病人明显增高.1.1.4PCR检测HIV核酸聚合酶链反响(PCR)是检测特定的DNA和RNA片段的非常敏感的方法.定量PCR技术是测定HIV载量、预测疾病进程的主要方法.尽管HIV和PCR检测有上述一些用途,但是它不能作为HIV感染的常规诊断方法,只能用于特殊情况下的早期HIV感染、判断婴儿HlV感染,以及血清学不确定结果的验证和补充.在HIV的根底研究如测定HIV载量、分析HIV基因的亚型和变异等方面,PCR方法具有重要的用途

15、.1.1.5病毒别离培养及别离HIV需要在特定的P3实验室进行,且HTV的别离率在30%60%,这项试验仅用于HIV株的保存和科学研窕.5. 4诊断原那么艾滋病和HIV感染是因感染HlV引起人体产生以免疫缺陷为主要特征的慢性综合病症,流行病学资料有一定的参考价值,临床表现特异性不强,需与其他病因引起的类似病症相鉴别,但有些特殊的时机性感染和肿瘤可作为诊断和临床分期的指征.HIV/AlDS的诊断原那么是以实验室检测为依据,结合临床表现和参考流行病学资料综合进行.5.5艾滋病诊断标准:5.5.1艾滋病病毒抗体阳性,又具有下述任何一项者,可为实验确诊艾滋病病人.(1)近期内(3-6个月)体重减轻10

16、%以上,且持续发热达38C一个月以上;(2)近期内(3-6个月)体重减轻10%以上,且持续腹泻(每日达3-5次)一个月以上.卡氏肺囊虫肺炎(PCR)卡波济肉瘤KS.(5)明显的毒菌或其他条件致病感染.5.5.2假设抗体阳性者体重减轻、发热、腹泻病症接近上述第1项时,可为实验确诊艾滋病病人.(1)CD4/CD8(辅助/抑制)淋巴细胞计数比值VI,CD4细胞计数下降;(2)全身淋巴结肿大;(3)明显的中枢神经系统占位性病变的病症和体征,出现痴呆,辩别水平丧失,或运动神经功能障碍.5.6治疗:应用核甘类逆转录酶抑制剂药物:叠氮胸苜(ACT)、2,3-双脱氧肌酎(DDI)、拉米夫定能干扰病毒DNA合成.非核昔类逆转录睡抑制剂药物:德拉维丁、耐维拉平、赛科纳瓦、瑞托纳瓦、英迪纳瓦还有鸡尾酒疗法.5.7预防:因现无艾滋

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