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1、ICS点击此处添加ICS号点击此处添加中国标准文献分类号DB15内蒙古自治区地方标准DBXX/XXXXX-XXXX规模化奶山羊场羊痘诊断技术Diagnosistechnologyofgoatpoxinlarge-scaledairygoatfarm点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）XXXX -XX-XX 发布XXXX-XX-XX实施内蒙古自治区市场监督管理局本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧科学院提出。本文件由内蒙古自治区畜牧标准化委员会(SAM/TC19)归口。本文件主要起草单位：内蒙古自
2、治区农牧业科学院，内蒙古盛健生物科技有限责任公司，内蒙古杜美牧业生物科技有限公司。本文件主要起草人：王娜、戴伶俐、张月梅、白帆、达来宝力格、赵世华、刘学文、张帆、杨斌、宋越、钱琳娜、谢慧慧、杨文圃、王建光。规模化奶山羊场羊痘诊断技术1范围本文件规定了山羊痘诊断技术。本文件适用于产地、市场、口岸等山羊痘的检疫。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T576-2002绵羊痘和山羊痘诊断技术GB/T22330.12-2008无规定动物
3、疫病区标准（第12部分：无绵羊痘和山羊痘区）3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1山羊痘山羊痘在世界各地流行，主要集中于印度、孟加拉、北美、中非等国家和地区。近年来，我国大力扶持养羊业发展，随着山羊养殖密度的增加，该病已流行于我国部分地区。不同山羊痘病毒毒株的毒力存在差异，易感羊只的病死率较高，部分羊场羔羊的死亡率为100%o该病的发生对我国养羊业健康可持续发展造成威胁，严重影响羊及羊制品的出口。世界动物卫生组织（OlE）将该病列为报告传染病，我国也将其列为I类动物疫病。4诊断4.1临床诊断山羊痘的潜伏期为25d,初期病羊身体迅速发热，体温可达到4142,病羊的皮肤或黏膜上会出现丘疹
4、或疱疹，不喜食干、硬的饲料，并且饮水次数增多，在动物眼、鼻周围黏性脓性分泌物增多。23d后，病羊身体毛少部位的皮肤上开始出现小红斑，小红斑迅速长大形成痘疹，继续经过35d的病程后，丘疹转变为水疱、脓包，最后破裂结痂掉落。由于病羊在患病期间身体经常出现高热，故也会伴有肺炎、肠炎等疾病出现，严重的还会导致病羊失明，孕羊流产，山羊败血病的出现。4. 2病理学诊断4. 2.1病理解剖学观察剖检可见病羊口腔、鼻腔、喉头、气管黏膜有大小不一的圆形疹痘；肺部明显水肿，伴有卡他性肺炎；肺脏表面存在红色疹痘，切开后呈不透明、灰白色胶冻样；瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃黏膜均出现疹痘。4. 2.2病理组织学检查采集发病羊
5、只肺脏组织，制作石蜡切片。经HE染色可见肺泡间质变宽，腔内存在脱落的上皮细胞；II型肺泡上皮细胞增生，并化生为腺泡样状；支气管腔内存在大量的炎性细胞.4. 3血清学诊断病羊血清经山羊痘病毒抗体高敏荧光检测试剂盒检测，检测结果大于16,提示山羊痘病毒抗体检测呈阳性。4. 4分子生物学诊断根据参考文献设计P32基因PCR扩增引物，上游引物(GTPV-P32-F)序列：5,-Caccgaattcaccatggcagatatcccattatat-S,下游引物(gtpv-P32-R)序列：5-GATGGCGGCCGCACTTTCGTTAC-3,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。预期扩增产物片段大小
6、为983bpo以“1.2.3.1”项下提取的山羊痘病毒基因组DNA作为模板进行PCR扩增。PCR反应条件：94预变性5min；94变性30S160退火30St72C延伸60S,30次循环；72保持7minoPCR反应体系(25L)：PCRmix12.5L1上游引物(GTPV-P32-F)0.5L1下游引物(GTPV-P32-R)0.5L1模板LOuL,ddH2010.5uLo阴性对照以ddH20为模板，阳性对照以提取的山羊痘病毒活疫苗DNA为模板。PCR扩增产物用1.0%琼脂糖凝胶电泳初步鉴定后，低温寄送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。利用NCBI数据库中的BLAST模块进行P32基因序列比对，利用MegAlign8.0软件构建系统发育树。5试验结果判定一符合4.1、4.2、4.3其中一条特性的特性及分子生物学诊断阳性的样品，最终判定为阳性。6废弃物处理和防止污染的措施检测过程中的废弃物，应收集后高压灭菌处理。
