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1、金黄色葡萄球菌检验原始记录（第二法平板计数法）检验单位检验员检验日期至环境条件温度,相对湿度%检验依据GB4789.10-2016食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验样品名称产品批号仪罂设备及耗材：电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、移液器、涂布棒培养基及试剂：生理盐水：ml配制日期：BP琼脂：ml配制日期：实验过程,1 .样品稀释：根据样品状态，无菌操作，称取25g吸取25InL样品，加入到装有225mL生理盐水无菌均质袋中均质，或加入到装有225InL生理盐水锥形瓶中充分混匀，瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠，制成1:10样品匀液。用ImL无菌吸管
2、或微量移液器吸取1:10样品匀液ImL,沿管壁缓慢注于盛有9mL璘酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml.无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。按以上操作步骤，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次ImI无菌吸管或吸头。2 .样品的接种根据对样品污染状况的估计，选择2个-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取Ilnl样品匀液以0.3ml、0.3mL、0.4InL接种量分别加入三块Baird-Parker平板，然后用无菌涂布棒涂布整个平板，注意不要触及
3、平板边缘。使用前，如Baird-ParkCr平板表面有水珠，可放在25-50的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。3 .培养在通常情况下，涂布后，将平板静置10min,如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36培养Ih;等样品匀液吸收后翻转平板，倒置后于36C1培养24-48h（_/_/时_/_/时）典型菌落计数和确认：注：“一”表示在选择性平板中无可疑菌落生长。样品编号金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落形态：呈圆形，表面光滑、凸起、湿润、菌落直径为2m3mn,颜色呈灰黑色至黑色，有光泽，常有浅色（非白色）的边缘，周围绕以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰带。第稀释度：第二稀释度
4、：3与三稀释度：0.3ml0.3ml0.4ml0.3ml0.3ml0.4ml0.3ml0.3ml0.4ml样品1样品2样品3样品4样品5结果计算：1 .若只有一个稀释度平板的典型菌落数在20-200CFU之间，计数该稀释度平板上的典型菌落，按式（1）计算。2 .若最低稀释度平板的典型菌落数小于20CFU,计数该稀释度平板上的典型菌落，按式（1）计算。3 .若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFU,但下一稀释度平板上没有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落，按式（。计算。4 .若某一稀释度平板的典型菌落数大于200CFL而下一稀释度平板上虽有典型菌落但不在20CFU200CFU范围内，应计
5、数该稀释度平板上的典型菌落，按式（1）计算。5 .若2个连续稀释度的平板典型菌落数均在20CFir200CFU之间，按式（2）计算。计算公式式：TICd式中：T一一样品中金黄色葡萄球菌菌落数；A一一某一稀释度典型菌落的总数；B一一某一稀释度鉴定为阳性的菌落数；C一一某一稀释度用于鉴定试验的菌落数；d一稀释因子。式：,_A1B1/C1+A2B2/C2l.ld式中：T一一样品中金黄色葡萄球菌菌落数；A1一一第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数；B1一一第一稀释度（低稀释倍数）鉴定为阳性的菌落数；C1一一第一稀释度（低稀释倍数）用于鉴定试验的菌落数；A2一一第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数；B2一一第二稀释度（高稀释倍数）鉴定为阳性的菌落数：C2一一第二稀释度（高稀释倍数）用于鉴定试验的菌落数；1.1一计算系数；d一稀释因子（第一稀释度）。结果（根据公式计算结果,报告每g（mL）样品中金黄色葡萄球菌数，以CFUg（mL）表示；如T值为0,则以小于1乘以最低稀释倍数报告。）报告人报告日期复核人复核日期
