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1、ICS67.050CCSX10团体标准T/CIQAxxx-202x特殊医学用途配方食品中低聚半乳糖的测定一离子色谱法DeterminationofGalacto-Oligosaccharideinfoodsforspecialmedicalpurpose-HighPerformanceIonExchangeChromatography（征求意见稿）2024-XX-XX 实施2024-XX-XX发布中国出入境检验检疫协会发布/1刖S本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责
2、任。本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会(CIQA/TC10)提出并归口。本文件起草单位：南京海关动植物与食品检测中心、上海安谱实验科技股份有限公司、海南天壮营养工程有限公司。本文件主要起草人：范春婷、朱静怡、张炯恺、陆慧媛、李红艳、沈伟健、马海建、张驰中、蓝建芳。本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的，印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。特殊医学用途配方食品中低聚半乳糖的测定离子色谱法1范围本文件规定了特殊医学用途配方食品中低聚半乳糖的离子色谱测定法。本文件适用于特殊医学用途配方食品中低聚半乳糖的测定。2规范性引用文件
3、下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理用水溶解样品中的低聚半乳糖，经乙胎沉淀蛋白，过C18固相萃取柱及0.22m滤膜净化后由离子色谱仪分析，以低聚半乳糖原料中的特征峰作为定性和定量依据，外标法定量。5试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1 试剂5.1.1 乙月青(CNaCN)：色谱纯5.1.2 1.2甲醇(
4、CH3。H)：色谱纯。5.1.3 50%氢氧化钠溶液(NaOH)：色谱纯。5.1.4 1.4无水乙酸钠(CH3C00Na):纯度299.0%。5.1.5 检测样品的低聚半乳糖原料.5.2 标准溶液配制精密称取检测样品的低聚半乳糖原料，加水溶解，并稀释至100omgL,用C18固相萃取小柱过滤后作为储备液。精密量取储备液适量，加水溶解并稀释成IOUgmL.20gmL,50gmL100Pg/mL150gmL200Ug/mL的标准工作溶液，现用现配。5.3 淋洗液配制5.3.1淋洗液A（纯水）：量取2L一级水，超声脱气15min,避免振摇，使用前再脱气30min。5.3.2淋洗液B（25OnlmOl
5、/L氢氧化钠溶液）：量取50%氢氧化钠溶液（5.1.3）13.9mL,用水定容至1L,使用前脱气30min,充氮气可保存一周。5.3.3淋洗液C（100mmol/L氢氧化钠溶液,含1.0mol/L乙酸钠）：称取82.0g无水乙酸钠（5.L4）,用0.8L水溶解后加入50%氢氧化钠溶液（5.1.3）5.6mL,用水定容至1L,使用前脱气30min,充氮气可保存一周。5.3.4淋洗液D（100mmol/L乙酸钠溶液）：称取8.2g无水乙酸钠（5.1.4）,用水溶解并定容至1L,使用前脱气30min,充氮气可保存一周。6仪器和设备6.1 离子色谱分析仪：配备脉冲安倍检测器、金工作电极、Ag/AgCl
6、参比电极、糖四电位波形。6.2 天平：感量为0.001go6.3 超声波清洗器。6.4 涡旋振荡器。6. 5高速离心机，不低于8000rmi11o6.6 固相萃取装置。6.7 C18固相萃取小柱（500mg,3mL）o6.8 0.22m有机滤膜。6.9 色谱柱：阴离子交换色谱柱PA-20（15OnlmX3mm,粒径3.5m）,保护柱PA-20（30mm3mm,粒径3.5m）或等效色谱柱。7分析步骤7.1 试样处理7.1.1 提取7.1.1.1 液态特医食品准确称取适量混合均匀的试样至10mL容量瓶中，精确至1mg,使所取试样中低聚半乳糖含量约为IOing,加水4mL,涡旋混匀后超声Iomir,
7、用乙膈定容后混匀。静置IOmin（必要时延长沉降时间，或转移至离心管中，8000r/min离心3min）,取1mL上清液用水稀释至10mL,混匀待净化。7.1.1.2 粉剂特医食品准确称取适量混合均匀的试样至10mL容量瓶中，精确至1mg,使所取试样中低聚半乳糖含量约为IOing,加水3mL,涡旋混匀后60水浴10min。放至室温后，用乙箱定容后混匀。静置10min（必要时延长沉降时间，或转移至离心管中，8000r/min离心3min）,取InIL上清液用水稀释至IOl11L,混匀待净化。7. 1.2净化将C18固相萃取小柱（6.7）依次用3mL甲静和3mL水活化，并保持小柱湿润。取5mL待净
8、化液通过C18固相萃取小柱过滤，弃去前2mL,收集后3mL滤液过0.22HnI滤膜（6.8）供离子色谱仪测定。7.2色谱参考条件a）离子分析色谱柱（6.9）并配备保护柱（6.10）：b）淋洗液及洗脱程序：详见表1；c）柱温：30；d）进样体积：100PL；e）检测器：脉冲安倍检测器、金工作电极、Ag/AgCl参比电极、糖四电位波形。表1梯度洗脱程序时间min流速mL/min淋洗液A(5.3.1)%淋洗液B(5.3.2)%淋洗液C(5.3.3)%淋洗液D(5.3.4)%00.45584002100.45584002400.451540045450.45154004545.10.400010005
9、50.4000100055.10.40208000600.4020800060.10.45584002650.455840027.3标准曲线的制作将标准工作溶液在7.2的条件下分别进样，综合考虑试样基质本底的干扰、色谱峰的响应以及加标回收情况选择不受试样本底干扰的色谱峰作为特征峰，以标准工作溶液的浓度为横坐标，特征峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液色谱图参见附录A。注：可根据试样中组分的含量，适当增加稀释倍数f,使其不超出标准曲线测定范围。8结果计算与表述(1)试样中低聚半乳糖的含量按公式（1）计算:cV100XPX-mIO6式中：X-试样中低聚半乳糖的含量，单位为克每百克（g100g）
10、；c-根据标准曲线计算得到的试样中低聚半乳糖的浓度，单位为微克每毫升（ugmL）；V-定容体积，单位为毫升（mL）；f-稀释倍数；m-试样的称样量，单位为克（g）；P一低聚半乳糖原料的纯度；100单位换算系数；IO6-单位换算系数。计算结果保留至小数点后两位。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。10其他当称样量为LOOg时，定量限为0.02g/100go附录A（资料性）低聚半乳糖原料的离子色谱图图A.2试剂空白离子色谱图附录B（资料性）添加回收试验采用特殊医学用途全营养配方食品空白辅料（不含低聚半乳糖）进行三个水平的加标回收率验证，具体数据见表B.
11、1。表B.1特殊医学用途全营养配方食品中低聚半乳糖的加标回收率添加水平g100g称样量g检出值g100g回收率%RSD%0.600.9520.6196.51.831.0010.6099.41.0240.59101.41.0050.5896.51.0170.59100.21.0210.61103.40.801.0130.80100.90.811.0000.80100.41.0300.79101.91.0260.79101.71.0200.7899.81.0130.79100.00.901.0090.91102.11.341.0020.8898.41.0160.91102.31.0030.8898.61.0240.88100.21.0060.8998.9
