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1、嵌合抗原受体-T细胞免疫治疗桥接异基因造血干细胞移植患者的免疫重建异基因造血干细胞移植是治疗血液系统恶性肿瘤的最有效方法之一，但对于难治易复发的B急性淋巴细胞白血病(refractoryorreIapsedB-1ineageacuteIymphobIasticleukaemia,RR-B-A1.1.)即使高强度化疗及移植复发率依然很高，随着嵌合抗原受体(ChimeriCantigenreceptor,CAR)-T特异性靶向肿瘤细胞的应用，国内外很多研究共同表明1,2,3在RR-B-A1.1.患者移植前使用CAR-T细胞免疫治疗用于清除残存的肿瘤细胞，从而减少了此类患者的移植后复发率，改变了RR
2、-B-A1.1.患者预后。然而免疫功能重建与移植预后、感染及移植物抗宿主病等移植相关并发症密切相关，是移植后患者共同面对的问题。本研究对比描述CAR-T细胞免疫治疗与常规治疗的非CAR-T细胞免疫治疗患者病例特征及在移植前后多时间点免疫细胞亚群的差异性，进而探讨维持CAR-T治疗桥接移植后患者免疫功能状态正向重建的影响因素。资料与方法一、对象回顾性分析2018年8月至2021年12月期间在北京陆道培医院接受CAR-T细胞桥接异基因造血干细胞移植(alIogeneichematopoieticstemceIItranspIantation,alIo-HSCT)治疗的所有急性B淋巴细胞白血病(B-
3、A1.1.)患者61例病历资料，其中行自体CD19-CAR-T细胞免疫治疗患者32例，非CAR-T细胞免疫治疗患者29例。随访截至2022年1月31日，采用电话随访或查阅门诊/住院病历方式获得患者生存信息。入组患者均已签署知情同意书，本项目已通过陆道培医疗伦理委员会批准(DPEC202108)。二、移植类型与预处理均选用清髓性预处理，其中全身照射(totalbodyirradiation,TBI)/CY方案52例(TBl200CGY义5次；CY1.518gm2,-5至-4d),BU/CY方案9例(BU0.81.2mg/kgQ6,-9至-6d;CY1.51.8gm2,-5至-4d)。兔抗人胸腺细
4、胞免疫球蛋白(rabbitanti-humanthymocyteimmunoglobulin,ATG)57.5mg/kg,于-5至-2d分次给药。三、造血干细胞来源和回输采用重组人粒细胞集落刺激因子动员后骨髓联合外周血干细胞输注，重组人粒细胞集落刺激因子剂量为7.510.0gkg,患者回输前34d开始应用至采集结束。四、移植物抗宿主病预防采用环抱素+霉酚酸酯+短疗程甲氨蝶吟方案。从预处理-9d开始应用环抱素(起始剂量为每日1.252.5mg/kg,静脉谷浓度维持IOol50ngml）及霉酚酸酯（用量为每日30mgkg,口服）。无移植物抗宿主病（graft-versus-hostdisease,
5、GVHD）患者1个月内霉酚酸酯减停，1个月后环抱素改为口服（谷浓度维持100ngml）o短疗程甲氨蝶吟指第1天15mgm2,第3、6、11天分别为10mgm2,次日亚叶酸钙6mgX2次解救甲氮蝶吟。五、入组标准及相关疾病诊断标准1 .急性B淋巴细胞白血病：依照EGI1.1995诊断积分系统4结合WHO2016诊断分型标准5。2 .CAR-T细胞免疫治疗：纳入标准为（1）诊断为难治性/复发性急性B淋巴细胞白血病，即难治指诱导治疗未能取得微小残留阴性的完全缓解；复发指完全缓解后外周血或骨髓任一肿瘤负荷25%,或微小残留阳性，或出现新发髓外病灶；（2）流式细胞术检查肿瘤细胞表达CDI9。排除标准为（
6、1）合并其他进展期的恶性肿瘤。（2）合并严重/持续感染且未得到有效控制。（3）存在症状性的中枢神经系统紊乱，如痴呆、癫痫等。3 .移植物抗宿主病：根据2020年版NCCN临床实践指南，造血细胞移植-移植前受者评估以及移植物抗宿主病的管理方法定义6。4 .病毒激活与转阴：应用PCR方法检测血浆中人巨细胞病毒、EB病毒DNA定量500拷贝/ml,定义为病毒激活。六、标本采集及上机前处理移植物骨髓标本为采髓术后经乙二胺四乙酸二钾抗凝的骨髓血24ml,外周标本为重组人粒细胞集落刺激因子动员后进入外周循环的单个核细胞。在患者接受造血干细胞移植术后第1、2、3、6、8、10、12个月，采集受者肝素抗凝静脉
7、血5ml行流式检测。所有样本按照厂家说明书推荐方法进行标记。胞膜管为：每管样本中按照细胞计数加入样本,保证加入2义106个细胞数量，按照说明书在每支试管中加入520I不同荧光素标记的抗体，充分混匀后常温避光孵育15min,加入3mlBDFACS1.ysingSolution溶血素，混匀后室温避光孵育10min,300Xg离心5min去上清，加入3ml磷酸盐缓冲液混匀后离心洗涤1次，加入0.5ml磷酸盐缓冲液上机检测。七、主要仪器及试剂流式细胞术试剂组合方案，第1管为CD3FITC/CD56PECD45PerCPCy5.5CD4PECY7CD19APCCD8APCCY7,第2管为CD4FITCC
8、D127PECD3PerCPCy5.5CD25APCo第3管为CD45FITC/CD34PE/7-AAD。淋巴细胞亚群抗体为旷博公司产品，CD34检测试剂（SCE）为美国BectonDickinson公司产品。溶血素为美国BectonDickinson公司产品。流式细胞仪为美国BectonDiCkinSon公司3激光10色BD1.yric流式细胞仪，获取软件为BDFACSiite,每样本管获取30万个活细胞，分析软件为BDDiva8.O.2o八、统计学分析用SPSS23.0统计软件进行数据分析。首先对所有计量资料行正态性检验，符合正态分布的计量资料以S表示,2组均数比较采用独立样本t检验；不符
9、合正态分布的计量资料以M(Q1,Q3)表示，比较采用Mann-WhitneyU检验。计数资料以百分数表示，两组间比较采用2检验。不同结局下各单因素的生存曲线采用Kaplan-Meier法，1.og-rank检验。以P0.05)见表3。表161例RR-B-A1.牌者病历资料.6.4飘州0病例特征mtCAR-T细胞治疗组（29例）CAR-T堀88洽行组（32）统计值梅物S-生科死亡（例）27/225/7/3.2240.073毒杳性别美/女（例）19/1020/12无无受供者性疑不合（制）1912/=3.3460.067受供含血益不管（制）1313-0.3880.610移的族居融（例）2629K=O
10、.0221.000诊素距诙移植天数d,Q.Q）854.00(327.25.1228.75)604.00(223.00.1244.00)(/-263.0000.004惠舍格植葭免望塔里三（g1.）2G矶(0Q)】6.78(5.27.9.26)5.54(4.04.7.09)29,5000.017IaAloX,M(Q1,Q3)1.03(0.63.1.56)0.18(0.06.0.49)3103.5000,001Mg1.,(,()0.40(0.26.0.71)0.18(0.05.0.30)-166.0000,001全身幽预处理方案（CGY）2428-02720.724ATG长遵剂量mg/kg,0.Q)
11、7(5.7.5)5(5.7.5)(288.5000.018移植吻834+叵贰剂量（106kg）4.51(4.00,5.93)5.91(4.23.6.02)=291.00.012急性移植吻抗君王鼎（例）16190.1100.799建性移植物杭有主轲（的）119=0.6640.586环旭索应用时长d./Q,0）197.00(102.50.450.50)167.00(119.25.299.50)-421.0000.001巨日抱我备血役（例）1318/-0.7940.446EBfm（例）4602730.735注：RR-BA1.1.为送8易昼急性淞血病,CAR-T为云合护源受体Teg.ATG为免抗人闷蝉
12、爆免疫黑第3q未CART0.2/CART后P=O.0730200400600800100012001400生存时间（d）注：MSVHD为急性移植物抗宿主病,CGVHD为慢住移植物抗痞切图161例患者GVHD及生存曲线表261例患者移植前外周血淋巴细胞亚群绝对计数个,(Q,G)CAR-T如胞沿行淋巴侬gCD3+TCD4+TCD8+TB淋巴!8CD4/CD8目杀伤烟胞Treg1052.00860.00162.50478.0033.000.25115.005.00无(545.75.1(391.00.1(66.00.(143.50,(8.00.(0.15.(50.00.(3.00.812.50)419
13、.75)384.75)992.25)220.00)0.43)223.00)9.00)833.00686.146.00343.22.000.25115.004.50有(335.00*1(233.00,1(40.50.(56.50.924.00)(6.00,(0.15.(50.00.(3.50.727.50)307.00)327.50)186.00)0.54)217.00)7.50)6404.0406.0494.0483.5498.0798.5618.5520.0PS0.0010.0010.0020.0010.0020.8050.0550.295注：CAR-T为故管抗原受体BiS.Treg为丽性TasS表361例思者移植后不同月份外周血淋巴细胞亚群绝对计数项目CAR-T1个月2个月淋巴酶(W,0.0)】元296.00(106.00,550,00)668.00(319.50.1154.00)有238.00(93.50,377.75)634.00(287.00,1440.00)CD3+T个*(Q.0)1无214.00(52.50,404.50)214.00(52.50,
