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1、2024成人呼吸系统感染性病原诊断呼吸道病原学检测标本的采集方法呼吸道病原学标本的采集方法见表1O表1呼吸道病原学标本类型及采集方法标本类型采集方法痰液自主吸，诱期拭子口咽拭子，鼻咽拭子保护性毛刷经支气管镜引导下采集经人工3道内吸引收集分泌物经人工气道，在负压吸引装置前连接无菌集痰器，操作前应听诊痰液聚集部位，必要时给予体位引流或物嘲瞰，以增力面本的采集量支3管肺泡灌洗液根据病变部位选择灌洗叶段，使用生理盐水在肺段或亚段进行灌注并回收，通过细胞计数进行灌洗液质量控制，回收率应在30%以上胸腔积液细菌培养标本量应1mL,真菌培养10mL,分枝杆菌培养10mLo如核糜T细(T-SPOT)畸;斑忝加
2、肝素顺组织活检标本可选择电视辅助胸腔镜手术，气管支气管内超声引导下肺组织或淋巴结活检，经气管镜肺活检术，CT或B超引导下经皮肺穿刺活检术。标本的运送.储存和预处理1 .标本的运送和储存原则首先标签应准确，信息完整，贴在容器上，而不是容器盖上。不同病原体检测标本的采集和转运原则见表2o表2不同病原体检测标本的采集、收集和转运原则病1原体标本及采集方法收集装置、保存温度和转运原则氧菌培养组织、体液或灌河E液等无菌容器，室温,立即送检拭子标本（次选）：推荐使用凄萨志K祥量大，易拭子转运管，室温，2h内沆月兄，他出率同）厌氧菌培养组织、体液及灌洗液等无菌厌氧瓶，室温，立即送检拭子标本（次选）：推荐使用
3、-植绒尼龙拭子（采样量大，容厌氧拭子转运管，至温，2h易洗脱，检出率高）内Si菌培养组织、体液及灌洗液等无菌容器，室温，2h内拭子标本（次选，仅适用于酵、母菌和浅表部位MTB感染）拭子转运管，至温，2h内病毒培养组织、体液及灌洗液等病毒转运培养基，冷藏保存立即送检拭子标本：推荐使用植绒尼龙存上甘、_生去/0.拭子（采样量大，容易洗脱，智田拭子转您吕，至皿，2h检出率高）内探3仕物皿怖应遵守国家关于此类标本的采集要求（可参考美国疾病预防控誓普那铲制中心网站：httpsemergency病原体标不cdc.gov/labissues/index.asp）不同类型标本采集量、保存和转运时间见表3o表3
4、不同时间标本的采集量、保存和转运时间标本类型标本采集量收集装置、保存温度和转 运时间E清学标Ioml血液或5 ml血清血清分离胶促凝采血管, 室温,2 h内抗原或抗血液、脑脊液、尿液等（根宓闻去哭史:日2h内体检测据实验室的具体要求）q团合崩，至皿，2h内核酸扩增10 ml血液或5 ml血浆含EDTA采血管，室温，2h内2 ml病毒转运培养基密闭容器，室温，2 h内2 .针对不同病原体的检测方法标本采集后应及时进行质量控制，合格的标本应尽可能短期内送检。某些特殊病原体标本的转运、保存和检测方法见表4o表4特殊病原体标本的转运、保存条件及检测方法特殊病原体标本转运条件和时间标本保存条件检测方法细
5、菌无菌容器，至温，2h4,24h革兰染色，定量培养努卡菌革兰染色，弱抗酸染色,培养军团菌培养，核酸检测，抗原检测真菌无菌容器，室温，2h4,24h氢氧化钾压片或荧光白染色，真菌培养曲零氢氧化钾压片或荧光白染色，真菌培养，半乳甘露聚糖（GM）幡肺抱子菌六胺银染色，核酸检测，抗原检测隐球菌墨汁染色，真菌培养，隐球菌英膜多糖抗原分枝杆菌无菌容器，室温，2h4,24h涂片抗酸染色，培养，核酸检测病毒病毒转运培养基，室温，2h4,5d核酸检测，抗原检测，分离培养寄生虫无菌容器，室温，2h4,24h直接镜检，核酸检测，抗原检测病原特殊结构雌HiSS荚膜染色，LoeffIer多色亚甲蓝舱鞭毛银盐染色法，复红
6、染色法芽抱孔雀绿染色法，石破酸蕃红染色法呼吸道病原体检测方法的优缺点不同检验方法的优缺点见表5。表5病原体不同检测方法的优缺点聚合酶链反应（如直接PCR.mPCR.RT-PCR.qPCR）简单，快速，便宜，可定量假阳性率高，港染风险高，引物可能失效，用于诊断常见和某些t热病原体（如肺抱子菌、核分枝杆菌等）等温（恒温）扩增技术（LAMP、NASBA.RPAfflSDA）快速，敏感，特异假阳性率高，污染风险高，引物可能失效，用于诊断常见和某些特殊病原体芯片技术（多病原等温扩增微流控芯片技术、POCTW）快速，敏感，特异，污染率低无需PCR认证大部分检测仍需在扩增前进行样本和速算提取，未完全实现样品
7、前处理自动化靶向通用引物多重PCR和一代测序（如16s、ITS）融向NGS宏基因组NGS血清学试验（如酶联免疫和免疫层析等检测）涂片显微镜检查病原体培养引物可能失效，诊断某些特定病原体，难以区分可对病原体按照科、属、种进三三三圾器常需杂有二八*fifrSEfrr5T+SS口J上断呆”特TEtfy病原体f伊格昂K日耗时/月圾,类,敏感度局，RJ0可能被环境物种污染，难以区分定植雌物批原微生物春罂篇器原褊窿栗可能存在宿主核酸滑染，价格昂贵（2-32sHS三l&膘翳境物种污染，难以区分定植微新型致病病原体生物和病原群物血清特异性抗体检测在感染早期可能呈假阳性，包括对血清特异性抗体检测和需要采集急性期
8、和恢复期双份血清进行检测腌快速抗原检测,价格便宜，可果评价；体液免疫缺陷会导致假阴性，受一些因诊断急性感染素影响也可能会出现假阳性结果；抗原检测结果不受机体免疫状况影响，但准确率较氏快速（数分钟至数小时），可通过计算分析标本中各种微生耀蠹瀛耦髓敏感度及特异度低，受酢者鳍的限制据疑诊病原体采取特殊染色进ff经京，标本容易收集，并可结敏感度及特异度低，无法检测非培养病原体，某合体外药敏试验结果为治疗提些病原培养十分耗时，某些病原微生物培养困难供有用的信息或无法进行体外培养基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱技术敏感度高，培养后检测快速需要病原体培养结果和已知病原体蛋白谱检测方法优点缺点注：PCR:聚
9、合酶链式反应;RT-PCR:实时逆转录PCR;mPCR:多重PCRjqPCR:实时荧光定量PCR;LAMP:环引物介导的等温扩增；NASBA:核酸序列扩增；RPA:重组聚合酶扩增；SDA:链置换扩增；POCT:即时检验或床旁检测；ITS:内部转录间隔区；NGS:二代测序技术病原检测结果的判读及其临床价值病原学检查结果的判读应该综合考虑患者的年龄、基础疾病、免疫状态、临床特点、病情严重程度以及先期的抗感染治疗等情况。1 .直接抗原快速检测胶体金法病毒抗原快速检测方法简便、快速、成本低。病毒抗原快速检测的特异性较好，但存在敏感度低、假阴性率较高的问题。当临床高度怀疑为病毒感染，但病毒快速检测结果为
10、阴性时，应加做病毒核酸检测，以排查假阴性。2 .血清特异性抗体检测适合在门诊、急诊或基层医院用于病原体的筛查。但由于早期阳性率较低，需要采集急性期及恢复期双份血清进行检测和效果评价，但体液免疫缺陷的患者可呈假阴性。3 .涂片所获取的各种标本均应行病原学涂片检查。在结果判读时，需要结合患者的临床症状和影像学表现，排除操作过程或环境污染的可能。BALF离心沉淀后六胺银染色、抗酸染色和革兰染色可分别用来检测肺泡子菌、分枝杆菌和部分细菌等。肺穿刺标本和胸腔积液涂片发现病原体对确诊具有重要意义。4 .培养在进行痰培养前必须确定是合格痰标本，并排除操作不当或环境污染的情况。定量培养有助于区分致病菌和定植菌。5 .核酸分子扩增检测和基因芯片检测核酸分子扩增及等温扩增基因芯片检测等方法可实现快速分子诊断，所需时间短，但现有核酸分子扩增技术也存在一定的局限性，尤其是难以快速检测和确定多药耐药病原菌的耐药基因突变部分。
