HE染色步骤.docx

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1、常筑HE染色步莪(1)二甲苯(I)5-10min(2)二甲苯(三)5-10min95%乙醉(I)1-3min(4) 95%乙醇(11)1-3min(5) 80%乙醉1min(6)蒸锵水1min(7)苏木精液染色5-15min(8)流水稍洗去苏木精液1-3s(9)1%盐酸乙薛1-3s(IO)稍水洗10-3OS(ID促蓝液返蓝10-30s(12)流水冲洗10-15min(13)蒸慵水过洗1-2s(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸饷水稍洗1-2s(16) 80%乙砰稍洗1-2s(17) 95%乙醉(I)3-5min(18) 95%乙砰(11)3-5min(19)无水乙醉5-10min(

2、20)无水乙醇5-10min(21)二甲苯(I)3-5min(23)二甲苯(In)(24)中性树胶封固结果:细胞浆红色,细胞核蓝紫色。转:常规HE染色步歌(1)二甲苯(I)二甲苯(11)95%乙醉(I)(4) 95%乙醉(11)(5) 80%乙醉(6)蒸慵水(7)苏木精液染色(8)流水稍洗去苏木精液(9)1%盐酸乙醇(12)流水冲洗3-5min5-10min5-10min1-3min1-3min1min1min5-15min1-3s1-3s20-30min1-2s(13)蒸储水过洗(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸储水梢洗1-2S(16)80%乙醇梢洗1-2s(17)95%乙醉(

3、I)2-3s(18)95%乙醉(三)3-5s(19)无水乙醇5-10min(20)石炭酸二甲苯无水乙醉5-10min(21)二甲苯(I)2min(22)二甲苯(11)2min(23)二甲苯(In)2min(24)中性树胶封固注:第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30mino第(20)步假如不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醉。1.取材组织块,经固定后,常规石蜡包埋,4m切片。2 .切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醉至水洗:二甲苯(I)5min二甲苯(U)5min100%乙醇2min-95%的乙醉IminT80%乙醉Imin-75%乙醉Imin蒸慵水洗2min。(各两次,然

4、后把水吸干)3 .苏木素染色5min,自来水冲洗。(吸干水)4 .盐酸乙醇分化30s(提插数产)。5 .自来水浸泡15min或温水(约50C)5min。(吸干水)6 .置伊红液2min7 .常规脱水,透亮,封片:95%乙醉(I)min-95%乙醉(U)Imin-Io0%乙器(I)Imin100%乙醇(11)Iminf二甲基石碳酸(3:1)Imin(省略)二甲苯(I)Imin二甲苯(U)IminT中性树脂封固。HE染色步H一、HE染液的配制:1、HarriS苏木素:称取苏木素精Ig一辄化汞0.5g硫酸铝钾20g量取无水乙醉IOml蒸慵水200ml苏木素溶于无水乙砰,钾明机溶于蒸储水,二者混合后煮

5、沸,离火,加入氧化汞,用玻棒搅拌,试剂变为深紫色,马上移入冷水快速冷却,静置一夜,过渡,棕色小磨口试剂瓶密封保存。运用前加入5%冰乙酸4ml(或冰乙酸3滴)。2、0.5%伊红(水溶性):称取伊红0.5g肽取95%乙醉25ml蒸储水75ml先取少量蒸储水加入伊红,用破棒将伊红碾碎并搅溶,再加入全部蒸混水,完全溶解后,再加入乙醉,最终加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液:盐酸3ml蒸储水297ml混匀,白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂:往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干,加入二甲革适量用吸管调勾,有肯定粘稠度即可。试剂二甲苯1瓶Harris苏木素染液无水乙醉2瓶1%盐

6、酸水溶液95%乙爵2瓶05%伊红(水溶性)染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、电吹风吹片或烤片,至溶蜡;2、入二甲苯2)中脱蜡5分钟,用吸水纸吸干液体;3、入二甲苯(II)中脱蜡10分钟(切片透亮),用吸水纸吸干液体;4、入100%乙醇(I)5分钟,用吸水纸吸干液体;5、入100%乙酯(II)5分钟,用吸水纸吸干液体;6、入95%乙醇3分钟;7、入流水2分钟,用吸水纸吸干水分;8、HarriS苏木素染色48分钟;9、自来水梢洗;】0、1%盐酸水溶液分化510秒(切片由蓝变红);11、自来水洗返蓝1530分钟;12、05%伊红(水溶性)染色30秒1分13、95%乙醉(I)脱水5分钟,用吸水纸吸干液体;14、95%乙醉(II)5分钟,用吸水纸吸干液体;15、入100%乙醉(I)5分钟,用吸水纸吸干液体;16、入100%乙醉(11)2分钟,用吸水纸吸干液体;17、入二甲苯(I)中透亮2-3分钟,用吸水纸吸干液体;18、入二甲苯(II)中透亮5分钟;19、中性树胶封片。20、镜下视察结果:细胞核深蓝色,胞浆与纤维组织呈深浅不等的红色。三、留意事项1、苏木索染色时间应依据染液的藤新或陈旧、与着色力确定C2、盐酸分化要恰当,分化不足,会核、浆共染,分化过度会造成核染色过浅。3、水洗蓝化时间应充分,以防褪色。4、封片后,玻片应与时贴上标签并写上编号。

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