PCR质量控制.3.ppt

上传人:p** 文档编号:141971 上传时间:2023-02-07 格式:PPT 页数:66 大小:1.61MB
下载 相关 举报
PCR质量控制.3.ppt_第1页
第1页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第2页
第2页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第3页
第3页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第4页
第4页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第5页
第5页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第6页
第6页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第7页
第7页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第8页
第8页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第9页
第9页 / 共66页
PCR质量控制.3.ppt_第10页
第10页 / 共66页
亲,该文档总共66页,到这儿已超出免费预览范围,如果喜欢就下载吧!
资源描述

《PCR质量控制.3.ppt》由会员分享,可在线阅读,更多相关《PCR质量控制.3.ppt(66页珍藏版)》请在第壹文秘上搜索。

1、医疗机构临床实验室管理办法医疗机构临床实验室管理办法(卫医发(卫医发200673200673号)号)医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法(卫办(卫办医政发医政发20101942010194号)号)医学实验室质量和能力认可准则医学实验室质量和能力认可准则 ISO15189(CNAS-CL02)ISO15189(CNAS-CL02)医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的指南(指南(CNAS-GL26CNAS-GL26)四个区域(试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区)必四个区域(试剂准备区、标本制

2、备区、扩增区、产物分析区)必须是互相独立的须是互相独立的各区间不能直通,应有缓冲间各区间不能直通,应有缓冲间应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备应有充分合理的空间、良好的照明、通风和空调设备( (不能使用不能使用中央空调中央空调) ) 标本制备区有生物安全柜、冲眼器标本制备区有生物安全柜、冲眼器除移动紫外灯外,各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯除移动紫外灯外,各工作区域内应有固定于房顶的紫外灯传递窗传递窗进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制,防进入和使用实验室各区域应有明确的限制和控制,防止患者和其他非相关人员的随意进出止患者和其他非相关人员的随意进出 不同工作区域内的设备、物

3、品不得混用不同工作区域内的设备、物品不得混用分析前分析前患者准备、标本(采集、运送、验收、保存)、医患者准备、标本(采集、运送、验收、保存)、医生报告单申请生报告单申请分析中分析中样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、样本分样、仪器、核酸提取、核酸扩增、产物分析、检测的有效性判断检测的有效性判断分析后分析后试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、试验报告、报告传递、结果的接收、结果的审核、结果解释结果解释标本采集时间对扩增检测结果的影响标本采集时间对扩增检测结果的影响标本的类型和采集量标本的类型和采集量采样及运输容器采样及运输容器采样质量的评价采样质量的评价标本采集中的防污染标本采

4、集中的防污染1 1、血清(浆)血清(浆):无特殊要求无特殊要求2 2、如用泌尿生殖道分泌物做如用泌尿生殖道分泌物做CTCT、NGNG项目:应在抗生素应用前或停项目:应在抗生素应用前或停药两周后采集标本,如不能停用抗生素,应于下次抗生素应用药两周后采集标本,如不能停用抗生素,应于下次抗生素应用前采集。前采集。3 3、如用、如用痰痰做做TBTB:应在抗结核药物应用前或停药两周后采集标本,:应在抗结核药物应用前或停药两周后采集标本,如不能停用抗结核药物,应于下次抗结核药物应用前采集。如不能停用抗结核药物,应于下次抗结核药物应用前采集。 因为因为PCRPCR方法所检测的靶物质为核酸,不受标本生物活性的

5、方法所检测的靶物质为核酸,不受标本生物活性的限制,对于已经死亡的病原体仍可检测出来,即感染后在药物限制,对于已经死亡的病原体仍可检测出来,即感染后在药物治疗有效的情况下,患处仍会有少量已死亡的病原体存在。治疗有效的情况下,患处仍会有少量已死亡的病原体存在。 标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。标本的类型和采集量应根据所测病原体而定。一般来说,如果样本的量对病原体培养够用的一般来说,如果样本的量对病原体培养够用的话,则其量亦足以用于核酸提取及其后的扩增话,则其量亦足以用于核酸提取及其后的扩增检测。检测。采样所用的抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增及采样所用的抗凝剂及相关试剂材料不应对核酸扩增

6、及检测过程造成干扰。如全血、骨髓和血浆标本,用检测过程造成干扰。如全血、骨髓和血浆标本,用EDTAEDTA抗凝,不使用肝素,因其是抗凝,不使用肝素,因其是 TaqTaq酶的强抑制剂,酶的强抑制剂,且在核酸提取过程中很难完全去除。且在核酸提取过程中很难完全去除。 使用玻璃器皿,必须为密闭的、必须经高压灭菌,使用玻璃器皿,必须为密闭的、必须经高压灭菌,以使可能存在的以使可能存在的RNaseRNase永久性失活。永久性失活。血液标本:溶血、严重脂血等应拒收血液标本:溶血、严重脂血等应拒收泌尿生殖道分泌物:镜下观察到上皮细胞存在。泌尿生殖道分泌物:镜下观察到上皮细胞存在。痰液:镜下观察上皮细胞很少,一

7、般痰液:镜下观察上皮细胞很少,一般102525个。个。实验室应根据待测靶核酸的特性,对各种临床标本的运送条件实验室应根据待测靶核酸的特性,对各种临床标本的运送条件(温度、时间)作出相应规定。(温度、时间)作出相应规定。靶核酸为靶核酸为DNADNA的标本,如在无菌条件下,则可以在室温下运送,的标本,如在无菌条件下,则可以在室温下运送,建议采集后建议采集后8h8h之内送至实验室;之内送至实验室;靶核酸为靶核酸为R RNANA的标本,如在无菌条件下,可在室温下运送,如为的标本,如在无菌条件下,可在室温下运送,如为较长时间,则应在加冰条件下运送,建议采集后较长时间,则应在加冰条件下运送,建议采集后4h

8、4h之内送至实验之内送至实验室;室; 所有标本采集后送至实验室之前,所有临床标本在采集后送至所有标本采集后送至实验室之前,所有临床标本在采集后送至实验室前,均应放实验室前,均应放2 288临时保存。临时保存。淋病奈瑟菌有自溶的特性,标本采集后应立即送检。淋病奈瑟菌有自溶的特性,标本采集后应立即送检。 靶核酸靶核酸( (尤其是尤其是RNA)RNA)易受核酸酶的作用而迅速降解,因此标本易受核酸酶的作用而迅速降解,因此标本的保存对于核酸扩增测定的有效性极为重要(避免反复冻融)的保存对于核酸扩增测定的有效性极为重要(避免反复冻融)靶核酸为靶核酸为DNADNA的标本的标本2-82-8保存保存1-31-3

9、天,天,靶核酸为靶核酸为R RNANA的标本应的标本应2020下保存下保存2020下保存下保存1 1个月个月7070以下可长期保存以下可长期保存如为提取核酸后用于如为提取核酸后用于DNADNA扩增分析的样本,可于扩增分析的样本,可于10TE10TE缓冲液缓冲液mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.5mmol/L Tris,1mmol/L EDTA(pH7.58.0)2-88.0)2-8下保存。下保存。 用于用于RNARNA扩增分析的样本,则应于上述扩增分析的样本,则应于上述 TETE缓冲液中缓冲液中-70-70保存。保存。 标本接收建议在三个测定区之外标本接收建议在三个测定

10、区之外接收的标本应收集在原始容器中,不能接受从接收的标本应收集在原始容器中,不能接受从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本,其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本,因其有较大的发生标本间污染的可能性因其有较大的发生标本间污染的可能性 血清(浆):血清(浆):应应1 1小时内分离血清,抗凝后小时内分离血清,抗凝后4 4小时内分离血浆,然后转移至小时内分离血浆,然后转移至1.5ml1.5ml灭菌离心灭菌离心管中保存。若血清分离不充分,可管中保存。若血清分离不充分,可1500rpm1500rpm离心离心5min 5min 。如甘油三酯含量超过如甘油三酯含量超过6mmol/L6mmol/L或肉眼可见

11、血清或肉眼可见血清/ /血浆呈白色浑浊状的标本,应血浆呈白色浑浊状的标本,应413 000rpm413 000rpm离心离心15min,15min,吸取下层清亮血清或血浆转移至吸取下层清亮血清或血浆转移至1.5ml1.5ml灭菌离心管灭菌离心管中保存中保存 泌尿生殖道分泌物泌尿生殖道分泌物一次性采样管(含保养液)一次性采样管(含保养液)配套棉拭子(不含保养液)配套棉拭子(不含保养液) 痰液痰液结核分枝杆菌结核分枝杆菌DNADNA检测标本:用检测标本:用4%NaOH4%NaOH摇匀,室温下放置摇匀,室温下放置3030分钟左右液化,分钟左右液化,转移至转移至1.5ml1.5ml灭菌离心管,离心,去

12、上清,留沉淀用于核酸提取。需注意的灭菌离心管,离心,去上清,留沉淀用于核酸提取。需注意的是液化时不能加热,液化时间不能过长。是液化时不能加热,液化时间不能过长。 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌DNADNA检测标本:痰标本在室温悬浮于灭菌生理盐水中,充分检测标本:痰标本在室温悬浮于灭菌生理盐水中,充分震荡混匀,促使大块黏状物下沉,取上清离心,去上清,留沉淀用于核酸提震荡混匀,促使大块黏状物下沉,取上清离心,去上清,留沉淀用于核酸提取。取。切记不能用切记不能用NaOHNaOH液化痰标本液化痰标本。 分册建立仪器档案分册建立仪器档案定期维护保养定期维护保养定期校准或检定(校准周期、校准单位、校准定期校

13、准或检定(校准周期、校准单位、校准参数、合格的校准报告)参数、合格的校准报告) 冰箱温度、温湿度计、移液器、恒温金属浴、冰箱温度、温湿度计、移液器、恒温金属浴、生物安全柜、高速冷冻离心机、扩增仪、杂交生物安全柜、高速冷冻离心机、扩增仪、杂交仪仪结构:温度控制及导热系统、光路系统、结构:温度控制及导热系统、光路系统、 检测系统检测系统 维护:维护: 75%75%乙醇定期清洁热盖和反应槽或孔乙醇定期清洁热盖和反应槽或孔 用无水乙醇清洁光路部分用无水乙醇清洁光路部分校准:校准: 校准周期:定期校准、仪器搬动校准周期:定期校准、仪器搬动 校准参数:光路部分、背景荧光、温控部分校准参数:光路部分、背景荧

14、光、温控部分(温度准确度、均一性、温度升降速率)(温度准确度、均一性、温度升降速率) 维护:维护:75%75%乙醇擦拭加热孔乙醇擦拭加热孔校准:校准: 温度准确度(应涵盖试验过程中所涉及的温度)温度准确度(应涵盖试验过程中所涉及的温度) 孔间温度的均一性(自校应规定测定孔的选择、孔间温度的均一性(自校应规定测定孔的选择、测量时间、各孔温度偏差允许范围)测量时间、各孔温度偏差允许范围)维护:维护: 75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭校准:校准周期、外校(厂家、计量所)、校准:校准周期、外校(厂家、计量所)、 校准量程校准量程内部校准内部校准- -参照参照定量、可调移液器试行检定定量、可调移液器试行检定

15、规程规程(JJG646-90)(JJG646-90),注意环境的要求、校准,注意环境的要求、校准点涵盖试验过程中所涉及的量程点涵盖试验过程中所涉及的量程清洁清洁: 75%: 75%乙醇擦拭乙醇擦拭, ,不得用次氯酸钠溶液清洁不得用次氯酸钠溶液清洁检定:有资质的第三方检测机构检定:有资质的第三方检测机构检定参数:高效过滤器完整性、流入气流流速、检定参数:高效过滤器完整性、流入气流流速、下降气流流速、气流模式下降气流流速、气流模式 维护保养:维护保养:75%75%乙醇擦拭乙醇擦拭校准:转速、温度校准:转速、温度耗材耗材 带滤芯吸头、离心管爆管和抑制物质检带滤芯吸头、离心管爆管和抑制物质检试剂盒的质

16、检试剂盒的质检 包括外观质检和性能质检包括外观质检和性能质检 选择或更换试剂品牌:试剂性能评估选择或更换试剂品牌:试剂性能评估 更换试剂批号:评价核酸提取效率和扩增效率更换试剂批号:评价核酸提取效率和扩增效率设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照设置空白对照、阴性对照、低值阳性对照试剂不合格试剂不合格 1)1)低值阳性对照和标准品均未检出,或低值阳性对照未检出而标低值阳性对照和标准品均未检出,或低值阳性对照未检出而标准品检出率大幅下降,表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。准品检出率大幅下降,表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。 2)2)低值阳性对照未检出,标准品检测正常,提示样品提取液存在低值阳性对照未检出,标准品检测正常,提示样品提取液存在问题。重复新旧提取液阳性对照实验,确定提取液失效问题。问题。重复新旧提取液阳性对照实验,确定提取液失效问题。 3) 3) 阴性对照有扩增,排除其他污染可能性后,提取液存在污染阴性对照有扩增,排除其他污染可能性后,提取液存在污染可能。可能。 4)4)低值阳性对照检出,标准品未检出或扩增曲线明显系统性低值阳性对照检出,标准品未检出或扩增曲线明显系统性CTCT

展开阅读全文
相关资源
猜你喜欢
相关搜索

当前位置:首页 > 医学/心理学 > 检验医学

copyright@ 2008-2023 1wenmi网站版权所有

经营许可证编号:宁ICP备2022001189号-1

本站为文档C2C交易模式,即用户上传的文档直接被用户下载,本站只是中间服务平台,本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。第壹文秘仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私,请立即通知第壹文秘网,我们立即给予删除!