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1、专题二专题二 微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题一课题一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1 1、形态：球形、杆形、螺旋形。、形态：球形、杆形、螺旋形。螺旋菌螺旋菌球菌球菌杆菌杆菌一、细菌一、细菌2 2、繁殖、繁殖 二分裂二分裂2020分钟分钟3030分钟，分裂一次分钟，分裂一次 无鞭毛的球菌：无鞭毛的球菌：菌落较小较厚、边菌落较小较厚、边缘整齐缘整齐. . 有鞭毛的细菌：有鞭毛的细菌：菌落大而扁平、边菌落大而扁平、边缘波状或锯齿状缘波状或锯齿状. .问：菌落在生态学问：菌落在生态学上属于什么单位？上属于什么单位？二、菌二、菌 落落菌落可以作为菌种菌落可以作为菌种鉴定的重要依据。鉴定
2、的重要依据。几种菌落一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养（一一）培养基培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质求，配制出供其生长繁殖的营养基质 一般的培养基均需要一般的培养基均需要碳源、氮源、生长碳源、氮源、生长因子、无机盐和水因子、无机盐和水等。等。1、培养基的基本成分、培养基的基本成分不同培养基要满足不同微生物对不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营、特殊营养物质及氧气的需求。养物质及氧气的需求。 2、培养基的种类、培养基的种类（1 1）按）按物理状态物理状态来分：来分： 分为分为固体培养基固体培养基和和液体培养基液
3、体培养基(还有半还有半固体固体)。其中固体培养基用于菌种分离、。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。鉴定菌落等。（2 2）按）按功能功能来分：来分： 分为分为选择培养基和鉴别培养基选择培养基和鉴别培养基。（3 3）按）按成分成分来分：来分： 分为分为天然培养基和合成培养基天然培养基和合成培养基。（二二）无菌技术无菌技术消毒消毒 灭菌灭菌 使用较为温和的方法来杀死使用较为温和的方法来杀死部分部分对人体对人体有害的微生物。有害的微生物。 对实验操作的空间、操作者的衣着和手进对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行行 ； 将培养皿、接种用具进行将培养皿、接种用具进行 ； 接种的过程要在接种的过程要
4、在 附近进行。附近进行。使用较为强烈的理化因素杀死物体内外使用较为强烈的理化因素杀死物体内外的的所有所有微生物（包括芽孢和孢子）。微生物（包括芽孢和孢子）。清洁消毒清洁消毒灭菌灭菌酒精灯酒精灯1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法: :用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒; ;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方
5、法：1.1.灼烧灭菌：灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的放在酒精灯火焰的充分燃烧层充分燃烧层中进行灼烧灭菌。中进行灼烧灭菌。（2）常用的灭菌方法）常用的灭菌方法2.2.干热灭菌：干热灭菌：将将玻璃器皿、金属用具玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160160170170OC C中加热中加热1 12h2h即可。即可。3.3.高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材灭菌锅内（见教材1616页图页
6、图2-42-4）煮沸，待冷空气排尽后，）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到密闭继续加热至锅内压力到100kPa100kPa，温度到，温度到121121OC C后，后，维持维持151530min30min即可。即可。 二、实二、实 验验 操操 作作（一一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.计算计算 2. 2.称量称量 3. 3.溶化溶化 4. 4.灭菌灭菌 5. 5.倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050OC C左右左右（P P1717）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的平板
7、冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。（二二）纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌1.1.平板划线法平板划线法 在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的在数次划线后可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体称肉眼可见的子细胞群体称菌落菌落。 1、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼、为什么在操作的第一步以及划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环
8、？烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环？杀灭残留在接种环的微生物。杀灭残留在接种环的微生物。 2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？行划线？ 3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？是从上一次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。 划线后，线条划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着使细菌的数目随着
9、划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。繁殖而来的菌落。 2. 2.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即稀释涂布平板法操作过程分两个步骤，即系列稀系列稀释操作和涂布平板操作释操作和涂布平板操作。系列稀释操作系列稀释操作101102103104105106 (1) (1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水的试管灭菌并编号。水的试管灭菌并编号。 (2) (2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培养的菌液，注入第二支试管中，培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。轻压橡皮头，吹
10、吸三次使之充分混匀。 (3) (3)从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入第三支试稀释液，注入第三支试管中，重复步骤管中，重复步骤2 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。涂布平板操作（涂布平板操作（P19）(1)(1)将涂布器浸在盛有将涂布器浸在盛有7070的酒精的酒精的烧杯中。的烧杯中。(2)(2)取少量菌液（不超取少量菌液（不超0.1mL0.1mL），滴加到培养基表面。），滴加到培养基表面。(3)(3)将沾有酒精的涂布器在火焰上将沾有酒精的涂布器在火焰上引燃引燃，火熄后，火熄后冷冷却却8 810s10s。(4)(4)用涂布器将菌液均匀地涂布在培
11、养基表面。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布平板操作后，涂布平板操作后，3737度恒温培养，如果在培养基上度恒温培养，如果在培养基上观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。观察到不同形态的菌落，请分析其可能的原因。 无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能无菌操作未达到要求：可能是培养基灭菌不彻底；可能是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了是接种时发生了污染；也可能是在培养的过程中受到了污染。污染。两种两种纯化细菌纯化细菌的方法的比较的方法的比较项目项目优点优点缺点缺点平板平板划划线法线法可以观察菌落特征，可以观察菌落特征，对混合菌进行分离对混合菌进行分离不能计数不
12、能计数稀释稀释涂涂布平布平板法板法可以计数可以计数，可以观，可以观察菌落特征察菌落特征吸收量较小，较麻吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延果不好，容易蔓延1、下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。、下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：实验步骤：(1)制备稀释倍数为制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。法接种样品。(3)适宜温度下培养。适宜温度下培养。结果分析：结果分析：(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数
13、为测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是，其理由是_ 。A一个平板，统计的菌落数是一个平板，统计的菌落数是230B两个平板，统计的菌落数是两个平板，统计的菌落数是220和和260，取平均值，取平均值240C三个平板，统计的菌落数分别是三个平板，统计的菌落数分别是210、50和和520，取平均值，取平均值260D四个平板，统计的菌落数分别是四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和和250，取平，取平均值均值250(2)一同学在稀释倍数为一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上
14、菌落数的平均值的培养基中测得平板上菌落数的平均值为为234，那么每毫升样品中的菌落数是，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用涂布平板时所用稀释液的体积为稀释液的体积为0.1 mL)。稀释涂布平板稀释涂布平板D 在设计实验时，一在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理2.34108(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得
15、的数量数量_，因为，因为_多多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落2制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的下列操作中，不正确的是制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的下列操作中，不正确的是A操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板B将称好的牛肉膏连同称量纸一同倒入烧杯中再加水、去纸将称好的牛肉膏连同称量纸一同倒入烧杯中再加水、去纸C灭菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加灭菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%琼脂，并使其溶解琼脂，并使其溶解D将培养基冷却到约将培养基冷却到约50 时，在酒精灯火焰附近倒平板时，在酒精灯火焰附近倒平板C
