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1、专题专题2 :2 :微生物的培养与应用微生物的培养与应用大肠杆菌大肠杆菌菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌落细菌的菌落特征因种而特征因种而异异 大肠杆菌大肠杆菌单个菌落单个菌落实验实验操作操作-大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养（一）（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计算称量溶化调计算称量溶化调PH值灭菌倒平板值灭菌倒平板（二
2、）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有：最常用的接种方法有：平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法（冷却至（冷却至50）1.操作开始时灼烧操作开始时灼烧接种环：接种环： 每次划线前灼烧接种环：每次划线前灼烧接种环：划线划线结束后灼烧接种环：结束后灼烧接种环： 避免接种环上可能存在的微生物污染培养物避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，
3、使每次划线时菌种的数目逐渐减少，的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。以便得到菌落。及时杀死接种环上残留的菌种，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感避免细菌污染环境和感染操作者染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？次划线的末端开始划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。划线后，线条划线后，线条末端末端细菌的数目比细菌的数目比线条起始处线条起始处要要少
4、少， 每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落单个细菌繁殖而来的菌落第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域灼烧接种环冷却 划线 （第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却 划线 （第二区域）灼烧接种环冷却 划线 （第三区域）灼烧接种环冷却 划线 （第四区域）灼烧接种环冷却 划线 （第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养 1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、长期保存：、长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法
