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1、湖南省地方标准多花黄精组织培养育苗技术规程编制说明编制单位：湖南农业大学湖南省农业环境生态研究所2022年9月15日编制说明一、工作简介L标准项目的来源本项目由湖南农业大学、湖南省农业环境生态研究所等单位于2021年10月向湖南省市场监督管理局申请，湖南省市场监督管理局于2022年1月批准立项。起止时间为2022年1月至2022年12月。2 .起草单位、协作单位湖南农业大学、湖南省农业环境生态研究所是该规程编制的主要承担单位，整体负责起草。湖南省棉花科学研究所、湘西土家族苗族自治州农业科学研究院、中南林业科技大学、洪江市农业技术推广中心、湖南省中药材产业协会、新化县中药材产业协会、湖南银鸿农业
2、发展有限公司、新化县天龙山农林科技发展有限公司、湖南华夏湘众药业饮片有限公司、新化县颐朴源黄精科技有限公司、安化中源农业发展有限公司等单位均是多花黄精组织培养育苗技术规程研究和示范推广单位，协助起草本标准，并提出了极其宝贵的意见和建议。3 .主要起草人及分工项目负责人从事中药材绿色种植和黄精研究工作多年，熟悉黄精种植生产过程中的各项环节。项目组成员参与多花黄精组织培养育苗技术的研究与生产，并有参加相关标准编制的经历和工作经验，能保质保量的完成后本标准的编制工作。序号姓名工作单位专业职称分工1严蒋湖南农业大学园艺学实验师项目负责人2宋荣湖南省农业环境生态研究所药用植物副研究员编写组培技术指标3雷
3、艳湘西土家族苗族自治州农业科学研究院园艺学农艺师实验与检验方法4贺璐湖南省棉花科学研究所中药学助理研究员实验与检验方法5熊绍军湘西土家族苗族自治州农业科学研究院农学高级农艺师检验规则6李庠湖南省棉花科学研究所药用植物高级农艺师检验规则7曾建国湖南农业大学中药资源工程教授检验规则8孙梦姗湖南省农业环境生态研究所中药资源工程研究实习员编写组培技术指标9周利湖南省农业环境生态研究所中药资源工程助理研究员编写组培技术指标10谢进湖南省农业环境生态研究所生物化学助理研究员实验与检验方法11徐瑞湖南省农业环境生态研究所植物保护助理研究员实验与检验方法12周佳民湖南省农业环境生态研究所栽培学副研究员数据统计
4、13郑思乡湖南省农业环境生态研究所植物学研究员检验规则14杨子墨湖南省中药材产业协会中药学秘书长检验规则15蒋双辉湖南银鸿农业发展有限公司生产管理董事长验证示范16周伊陶湖南华夏湘众药业饮片有限公司中药学药剂师验证示范17刘智新化县天龙山农林科技开发有限公司管理学董事长验证示范18邹辉新化县颐朴源黄精科技有限公司管理学理事长验证示范19蒋丰登安化中源农业发展有限公司管理学董事长验证示范二、制定标准的必要性和意义多花黄精PolygonatumCyrtonemaHua为百合科(ZHceae)黄精属(PoIygOnatUnI)多年生草本植物，是中华人民共和国药典(2020版一部)规定中药材黄精三种基
5、源植物之一，具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效，有“血气双补之王”的美称，为药食同源植物。随着对黄精的研究深入，黄精的养生保健价值凸显，越来越多的老百姓食用黄精保健养生，市场对黄精的需求愈发旺盛，受黄精生长年限和野生资源大量采挖，野生资源减少的影响，黄精市场价格日趋高涨，老百姓种植积极性，黄精的种植得到大力发展。湖南省中药材种植基地县中安化县、新化县、洪江市、安仁县更是把黄精当做农业种植结构调整和主导农业产业发展，其中安化县“安化黄精”获得国家农产品地理标志，新化县“新化黄精”获得国家农产品地理证明商标，湖南省黄精种植面积逾15万亩，黄精产量占全国50%以上市场份额，黄精产业在湖湘大地上一片
6、欣欣向荣。因黄精种植市场前景好,老百姓种植积极性高，发展黄精种植也已成为我省乡村产业发展的重要产业。根据生产调研和研究发现，当前黄精种苗主要通过采挖野生资源和种子育苗与块茎育苗。野生资源经过近3年来的大肆采挖，现在已急剧减少；黄精种子育苗受种子自然萌发率不高，萌发时间过长，导致种子育苗周期长；块茎育苗虽育苗周期短，但需要大量的商品黄精做母本，影响黄精的市场供应，育苗成本高，难以大规模发展，且长时间的无性繁殖，导致种苗带病毒等现象严重，种苗质量不高，这些因素都严重的影响黄精种苗的供应，导致黄精种植快速发展和规模化发展的同时，面临着种苗严重缺乏的问题。同时种植户为了保证产量，大量使用农药，导致农药
7、残留不达标的现象时有发生，这些都严重影响黄精产品的品质和对生态环境的破坏，不利于黄精产业的可持续发展。组织培养技术是一种高效快速繁殖资源缺乏的植物繁殖技术，已成功和广泛的应用在濒危植物与经济作物的扩繁上，为了黄精产业的可持续发展，特编制湖南省地方标准多花黄精组织培养育苗技术规程。根据此生产技术标准操作规程可实现湖南地区多花黄精种苗的工厂化育苗，对我省黄精产业的可持续发展具有十分重要的意义。三、标准起草过程及技术路线1 .标准编制原则本标准编制以国家中药材生产质量管理规范（试行）要求为指导，应用项目组有关黄精草害调查、杂草防控等的科研技术成果，结合湖南省安化县、新化县、洪江市、湘西自治州、新晃县
8、、安仁县等地种苗繁育情况，并充分听取各方的意见，遵循科学性、系统性、可靠性、可操作性、规范性等原则制定本标准。本标准的格式按GB/Tl.l2020标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则、GB/T20001.52017标准编写规则第5部分：规范标准中的原则要求进行编写。2 .前期准备为做好标准编制工作，湖南农业大学、湖南省农业环境生态研究所、湖南省棉花科学研究所、湘西土家族苗族自治州农业科学研究院、中南林业科技大学、洪江市农业技术推广中心、湖南省中药材产业协会、新化县中药材产业协会、湖南银鸿农业发展有限公司、新化县天龙山农林科技发展有限公司、湖南华夏湘众药业饮片有限公司、新化县颐朴源黄精科
9、技有限公司、安化中源农业发展有限公司等单位于2021年12月成立了标准编制工作小组，初步拟定了标准工作方案和工作计划。我们收集了安化县、新化县、洪江市、湘西自治州、新晃县、安仁县等地种苗繁育的相关资料。3 .起草过程2021年10月，湖南省农业大学向省市场监督管理局申请制定多花黄精组织培养育苗技术规程；湖南省市场监督管理局于2022年1月批准立项；1月立项后，项目承担单位牵头成立标准编制项目组并编制实施方案。2022年1月至2022年6月，进行资料收集和整理，总结多年的黄精组织培养育苗试验数据和生产经验，参考相关文献资料，遵循国家标准GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准的结构和
10、编写规则，经项目组多次讨论修改，于2022年7月形成标准征求意见稿。2022年7月，回收专家意见，根据专家意见修改标准,于2022年9月形成标准审查稿，2022年9月报湖南省市场监督管理局挂网征求意见。4 .技术路线标准编制技术路线：前期一一项目查新一一调研项目申报一一项目立项一一资料采集一一数据统计一一标准草案的编写一一编写编制说明一一征求专家意见一一回收专家意见一一根据专家意见进行标准修改一一形成标准挂网征求意见稿一一挂网征求意见一一标准修改一一形成标准审查稿一一专家会议审查一一标准修改一一形成标准报批稿一一报湖南省市场监督管理局审批一一发布实施。四、标准的主要技术内容1.主要条款的说明本
11、文件规定了多花黄精（POlygonatUIncyrtonemaHua）组织培养育苗技术规程的组培室消毒处理、外植体采集、外植体处理、培养基制备、组织培养、移栽、出苗、包装、标志、运输及档案管理等技术要求。本文件适用于湖南省内多花黄精组织培养技术的育苗。本文件有3个规范化引用文件GB4285农药安全使用标准、GB/T8321农药合理使用准则（所有部分）、LY/T1882林木组织培养育苗技术规程。本文件有1个术语和定义：多花黄精。2.技术要求第4节“组培室消毒处理”,介绍了组培室室内消毒，超净工作台消毒的方法。第5节“外植体采集”，详细介绍了外植体的选取。试验中分别取黄精的块茎（不带芽）、黄精芽头
12、和黄精茎秆分别进行诱导试验，结果显示，通过诱导培养基培养2个月，只有黄精芽头外植体可诱导产生不定芽，其他两种外植体均未诱导成功，最后确定黄精芽头未最佳外植体。第6节“外植体处理”，详细介绍了外植体的清洗与灭菌方法。外植体消毒过程中，使用0.1%升汞溶液浸泡1015分钟，污染率为20%-40%,成活率接近100%,根据外植体的大小，确定使用0.1%升汞溶液浸泡1015分钟为最佳时间。第7节“培养基制备”，详细介绍了诱导培养基、增殖培养基、生根培养基的配置方法。通过查阅资料文献，确定以MS为基础培养基,使用6-BA、NAA2,4-D、IBA等几中常见植物生长调节剂。通过6-BA和NAA配比试验诱导
13、黄精芽头产生不定芽的试验,设置5个不同试验处理，每个处理设置10个重复，培养2个月后，观察植株长势并记录实验结果，确定具体的配方。2.1 诱导培养基的筛选表2不同培养基对诱导黄精生长的影响试验处理（单位：mgL）成活率是否形成愈伤组织不定芽分化率植株长势处理1：6-BA1.O+NAAO.5100%无30%块茎分化较少，叶片较少处理2：6-BA2.O+NAAO.5100%无100%块茎分化出3-5个芽点，无叶片处理3：6-BA3.O+NAAO.5100%无30%块茎分化较少，叶片生长较为旺盛处理4：6-BA4.O+NAAO.5100%无10%植株叶片生长旺盛处理5：不添加激素100%无0块茎部分
14、黄化结果分析：通过试验可以出，MS培养基中添加6-BA2.0+NAA0.5时，块茎芽点的分化率最高，通过2个月的培养，黄精块茎可分化出3-5个芽点，当6-BA的浓度增大时，如表中处理3和处理4结果所示，黄精块茎芽点分化率很低，但是黄精叶片长势旺盛，该配比更适合植株叶片生长，芽点分化收到抑制，6-BA浓度减少时，黄精芽点分化率也较低。综合各项生长指标，确定黄精的最佳诱导培养基配方为MS+6-BA2.0mgL+NAA0.5mg/Lo2.2 增殖培养基的筛选以MS为基础培养基，通过前期试验，确定2,4D的添加量为0.2mgL,高浓度的2,4-D可抑制芽点的发生。通过6-BA和2,4-D配比试验诱导黄精芽头产生不定芽，使其增殖率达到最大。试验设置5个不同处理，每个处理设置20个重复，培养40天后，观察植株长势并记录实验结果。表3不同培养基对黄精增殖生长的影响处理（单位：mgL）成活率平均增殖系数不定芽分化率处理1：6-BA2.0+2,4-D0.2100%3.8100%处理2：6-BA3.0+2,4-D0.2100%4.2100%处理3：6-BA4.0+2,4-D0.2100%6.2100%处理4：6-BA5.0+2,4-D0.2100%5.4100%处理5：不添加激素100%00结果分析:通过试验可以出，MS培养基中添加6-BA4.0+2,4-D0.2时，黄精芽点的平均增殖系数最
