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1、ICS67.050CCSX28团体标准T/ZSSPXXXX-XXXX焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）RapiddeterminationofacroleininbakedfoodMicroplatereadermethod（fluorescentprobemethod）（征求意见稿）XXXX-XX-XX实施XXXX-XX-XX发布中山市食品学会发布本文件按照GB/T1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意木文件的某些内容可能涉及专利。木文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中山市食品学会和中山洪力健康食品产业研究院有限公司共同提出
2、。本文件由中山市食品学会归口。本文件起草单位：中山市食品学会、中山市食品药品审评认证中心、暨南大学、中山洪力健康食品产业研究院有限公司、广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、中山海关技术中心、利诚检测认证集团股份有限公司、广州广电计量检测股份有限公司、中山市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、中山市农产品质量安全检验所、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技（中山）有限公司、咀香园健康食品（中山）有限公司、中山市日威食品有限公司、中山市百威食品有限公司、广东药科大学、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。本文件起草人：黎文媛、欧仕益、张朋杰、张延杰、
3、黄才欢、夏雨、孟嫂、黄思韵、郑洁、何晓峰、胡晓涛、谭应职、冯腿、陈丽红、胡志高、龚启宙、郑萍、李蓉、张逸、罗紫明、吴小勇、李向丽、刘霭莎、何雁虹、陈林清、彭丽谕、李菲菲。本文件为首次发布。焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法（荧光探针法）1范围本文件描述了焙烤食品中典型危害因子丙酮醛、乙二醛和a-奥苏糖含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于焙烤食品中典型危害因子丙酮醛、乙二醛和a-奥苏糖含量的定性定量测定。对含有丙酮醛、乙二醛和a-奥苏糖产品的含量检测可参照使用。本文件检出限为*mgg,定量限为*mgg2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期
4、的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法3术语和定义本文件没有需要界定的的术语和定义。4原理焙烤食品试样用2mol/L的NaoH溶液液提取，6mol/L的HCl溶液调节PH至2.0左右，乙酸乙醋萃取后经C18色谱柱分离，紫外一可见光检测器检测，色谱峰保留时间定性，外标法定量。5试剂和材料5.1 试剂除非另有说明，所有试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1.1
5、 甲醇（色谱纯）。5.1.2 乙酸（色谱纯）。5.1.3 乙酸甲醉（色谱纯）。5.1.4 丙酮醛Gnethylglyoxal,MGO）05.1.5 乙二醛（glyoxal,GO）。5.1.6 a-奥苏糖。5.1.7 邻苯二胺（O-Phenylenedianline,OPD）。5.2 试剂配制5. 2.1甲醇水溶液（0.1%）：移取0.25mL甲醇（5.1.1）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。5.2.2乙酸水溶液（0.1%）：移取0.25mL乙酸（5.1.2）于250mL容量瓶中，用水定容至刻度。5.2.3乙酸甲醇水溶液：5.3 标准品5.3.1丙酮醛标准品（C9HsO3,CAS号：501
6、-98-4）：纯度大于98.0%。5.3.2乙二醛标准品（C9HsO3,CAS号:501-98-4）：纯度大于98.0%。5.3.3a-奥苏糖标准品（C9HsO3,CAS号:501-98-4）：纯度大于98.0%。5.4标准溶液的配置根据需要，用纯净水配制成乙二醛、丙酮醛和a-奥苏糖的浓度为IomgzL的混合溶液，用去离子水稀释混匀得到一系列浓度的标准溶液（1000、800、400、200、100gL）分别取4.5mL溶液与0.5mLOPD溶液（Iomg/mL甲醉溶解）涡旋混合均匀，置于60C水浴锅中避光衍生4h,制得一系列标准溶液。有需要时，可继续往下稀释至所需浓度，再衍生。（待步骤化）6仪
7、器和设备6.1. 1液相色谱仪，色谱柱：安捷伦AgilentZORBAXSB-Aq（4.6mm250mm,5m）。6.1.2 粉碎机。6.1.3 天平。6.1.4 离心机（待补充）7检测步骤7.1 试样制备用粉碎机把样品粉碎，精密称取样品5g,置于50mL带盖离心管，加入30mL纯净水，混合均匀，涡旋5min,在IOOoOrmin转速下离心IOnIin,快速移出上清液至容量瓶中；再加入20mL水提取第二次，在IOOOOrmin转速下离心IOnIin,快速把上清液移至容量瓶中；合并2次提取液后，定容至50mL；取4.5mL上清液与0.5mLOPD溶液（Iomg/mL甲醇溶解）涡旋混合均匀，置于6
8、0水浴锅中避光衍生4h,衍生完后过孔径为0.45m的有机系滤膜到液相小瓶，待测。（待步骤化）7.2 色谱测定7.2.1参考色谱条件7.2.1.1色谱柱：AgilentZORBAXSB-Aq（4.6mm250m,5m）7.2.1.2流动相：A相0.1%（v/v）的乙酸水溶液，B相0.1%（v/v）的甲醇7.2.1.3HPLC的检测条件：流动相A0.1%乙酸水，B0.1%（v/v）乙酸甲醇溶液，流速1mLmin,进样体积20L,柱温40,检测波长：314nm,运行时长35min。7.2.1.4梯度条件：B=28-43%0-15minjB=43-75%15.01-30min;B=75%30.01-3
9、5min7.2.2标准曲线的绘制将丙酮醛、乙二醛和-奥苏糖标准曲线工作液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的保留时间和峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。（3种物质标准色谱图见附录A）（待补充到附录A）7.2.3试样测定取样品溶液和标准溶液各20L注入液相色谱进行分析，以其标准溶液目标峰的色谱保留时间依据进行定性，根据峰面积计算样品中待测物质的含量。粗提物色谱图（待补充到附录A）。7.2.4空白实验除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。8分析结果的表述8.1丙酮醛试样中对丙酮醛的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算:式中IX试样中的含值单位为克每千克（m
10、gkg）P试样液中对香豆酸的质量浓度，单位为谩克每亳升（gmL）,V被测试样的总体积总位为亳升（mL）,m称取斌祥的质量,单位为克（g）,l0一换算系数.计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字.8.2 乙二醛试样中对乙二醛的含量由色谱数据处理软件或按式（2）计算:-VIu式中，X试样中的含ft单位为今克每F克（mg/kghP试样液中对香豆酸的质量浓度.单位为总克每毫升3gmL）,V被测试样的总体枳单位为亳升（mL）,m辨取试样的质量,单位为克（g）IOOO一换算系数.计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字.8.
11、3 a-奥苏糖试样中对-奥苏糖的含量由色谱数据处理软件或按式（3）计算:XV1Oi式中IXa样中的含单位为毫克每千克（mgkghP试样液中对香豆酸的质量浓度，单位为微克每毫升（gmL）,V被测试样的总体枳单位为充升（mL）,m称取试样的质量,单位为克（G，l0一换算系数.计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示结果保留三位有效数字.9精密度一般规定本文件的精密度按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%o再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。附录A（资料性）400450500556650TOO图1荧光探针PLACR与不同浓度丙烯醛（从下至上,浓度依次为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10molL）混合后荧光发射光谱图的变化情况（左）及相应的标准曲线（右）。
