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1、生化基础实验实验讲义基础实验生物科学与工程学院1生化实验一实验基本操作技能培训一、仪器的洗涤与干燥1.仪器的洗涤化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：(1)用水刷洗用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样,能去除油污和一些有机
2、物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。（3）用铭酸洗液洗铝酸洗液是由浓硫酸和重锯酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用锯酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿，尽量不要选用洗液洗涤。（4）用特殊的试剂洗应根据沾在器壁上污物的性质，采用合适的方法或药品来处理。例如，沾在器壁上的二氧化镒用浓盐酸
3、处理；AgCI沉淀可以用氨水洗涤；硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。洗涤时应遵循“少量多次”的原则，一般以洗三次为宜。2.玻璃仪器的干燥可根据不同的情况，采用下列方法将洗净的仪器干燥：（1）晾干不急用的仪器在洗净后，可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。（2）烘干将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干，放置仪器时，仪器的口应朝下。吹干用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。3.基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作1）量筒量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一，常见量筒的容量有10mL、20mL50mL、IoomL、500InL等,可根据需要来选用。量取液体时，应用
4、左手持量筒，并以大拇指指示所需体积的刻度处，右手持试剂瓶，将液体小心倒入量筒。读取刻度时，应让量筒垂直，使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上，偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用，也不能装热的液体。2）滴定管滴定管是用来进行滴定的器皿，用于测量在滴定中所用溶液的体积。2酸碱滴定管滴定管一般分为两种，一种是酸式滴定管，另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞，可盛放酸液或氧化性溶液，不能盛放碱液，因为碱液会腐蚀玻璃，使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管，它的下端连接一橡皮管，内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以控制溶液的流出，橡皮管下端再连一
5、尖嘴玻璃管，这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液，例如酸或氧化性溶液等。滴定管洗涤：在洗涤前，应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合，活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当，橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径，玻璃珠应圆滑，橡皮管应有弹性，否则难于紧固玻璃珠，操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤，当没有明显污物时，可以直接用自来水冲洗，或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗（注意滴定管刷的刷毛必须相当软，刷头的铁丝不能露出，也不能向旁边弯曲，以免刷伤内壁），然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管，应将其直立，使水流尽，若滴定管的内壁透明并不附着液滴，表示已洗净。
6、洗净后，滴定管用蒸储水淌洗三次，第一次用蒸储水IOnlL,第二次及第三次各用蒸储水5mL。每次加入蒸储水后，边转边向管口倾斜使蒸储水布满全管，并稍振荡，将管直立，使水流尽。在用自来水洗涤后，应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时，把玻璃活塞关闭，用水充满至“0”刻度线以上，直立约2分钟，仔细观察有无水滴滴下，有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转180,再如此直立12分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管，只需装水直立2分钟即可。如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时，把酸式滴定管取下将活塞涂油，碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管。活塞涂油时，把滴定管平放在桌面上，先取下活塞上的橡
7、皮圈，再取下活塞（拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可），用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干，用手指粘少量凡士林擦在活塞两头，沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层（如图3-6所示），但要避免涂得太多，尤其是在孔的近旁，油层要均匀涂满全圈，要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中（不要转着插），插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞，直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活，或出现纹路，表示涂油太多。遇到这些情况，都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时，应该将滴定管放在桌上，一手顶住活塞大头，一手套橡皮圈或系橡皮圈，以免将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法检查是否漏水。按前述方法用
8、自来水冲洗干净以后，分别用蒸储水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时，第一次用IOmL,第二次及第三次各用5mLo每次加入溶液后，也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管，直立以后，打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽，然后再洗第二次。但要特别注意，在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中的标准溶液摇匀，使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要)，混匀后，溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管，而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、滴管等)。一定要注意，不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候，改变它的浓度。滴定管读数：读取滴定管容积刻度的数值，称为读数。正确地读数是减
9、少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则：(1)读数前应观察，管壁是否挂有水珠，管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴，管嘴是否有气泡。读数时应把滴定管从滴定管架上取下，用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位，使滴定管自然垂直，然后读数。每次装入溶液或放出溶液后，应等12分钟，待附着在管内壁的溶液流下后再读数。(3)对于无色和浅色溶液，应读取弯月面下缘实线的最低点，视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液，如KMnO4、12溶液等，视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带，无色溶液就形成了两个弯月面，并且相交于蓝线的中线上，读数时读此交点的刻度。滴定时，最好每次从0.
10、0OmL开始，或从“05mL”的范围内的任一刻度开始，这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至0.OlmLo读取的读数立即记录在实验记录本上。滴定操作：使用酸式滴定管时，用左手控制活塞，大拇指在管前，食指和中指在管后，三指轻轻捏住塞柄，无名指和小指向手心弯曲，手心内凹，以防活塞被顶出造成漏液（如图3-9所示）。滴定时，右手握锥形瓶上部，将滴定管下端伸入锥形瓶口约ICnb然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快，一般为34秒滴左右，但不能滴成水线，应呈“见滴成串”。接近终点时，应逐滴加入，即加一滴摇动后再加，马上到达终点时，应控制半滴加入，即将活塞稍稍转动，使半滴悬于管口，
11、用锥形瓶内壁将其沾下，再用洗瓶吹洗内壁，使附着的溶液全部流下，然后摇动锥形瓶。如此继续滴定至滴定终点为止。酸式滴定管的操作碱式滴定管的操作使用碱式滴定管时（如图3T0所示），左手捏住乳胶管，拇指在前，食指在后，其余三指辅助夹住出口管，用拇指和食指捏住玻璃珠中上部，向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管，使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝，溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠，也不要使玻璃珠上下移动，更不要捏玻璃珠下部的乳胶管，以免进入空气形成气泡，影响读数。4滴定通常在锥形瓶中进行，必要时也可以在烧杯中进行（如图3-11所示）。把烧杯放在实验台上，滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约ICnI为宜。滴定管的下端
12、应在烧杯的左后方处，如放在中央，会影响搅拌；如离杯壁过近，滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液，右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动，不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时，可用玻璃棒下端轻轻沾下，再浸入烧杯中搅匀。3）容量瓶容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃在烧杯中滴定塞，细颈上刻有环形标线，瓶上标有容积（mL）和标定时的温度（一般为20）。在指定的温度下（一般为20）,当液体充满到标线时，液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、25mL.50mL、100mL、250mL、1000mL200OmL几种规格,并有白、棕两色，棕色的用来配制见光易分解的试剂
13、溶液。容量瓶不能加热，磨口瓶塞是配套的，不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。在使用容量瓶之前，要选择好容量瓶：（1）要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。（2）要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。选好容量瓶后，首先仔细检查有无裂痕破损，然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水，可在瓶中放入自来水到标线附近，将瓶塞塞好，左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子，右手指尖顶住瓶底边缘，倒立2分钟左右，观察瓶塞周围是否有水渗出，如果没有，把瓶直立，转动瓶塞180。后，再倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的，因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位
14、置都是密合的。容量瓶在使用前要充分洗涤干净，无论用什么方法洗，绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时，盖好瓶塞，充分振荡，洗完后立即将瓶塞塞好，以免灰尘落入或瓶塞被污染。用容量瓶配制溶液时，如果是用固体配制准确浓度的溶液（或称标准溶液），一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中，往其中加入少量的蒸储水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热，都需待溶液至室温时，才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时，要把溶液顺玻璃棒加入，玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁，使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方，不要高到接近瓶口，玻璃棒稍向瓶中心倾斜，烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒，使溶液完全顺玻
15、璃棒流入瓶内，待溶液全部流尽后，将烧杯轻轻向上提（烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒），同时直立，使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内，然后先把玻璃棒放入烧杯中，才能把烧杯拿开放在桌上，用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分3次，每次用水应尽量少些为宜，每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸储水至接近标线稍低ICrn左右，等12分钟，使黏附在瓶颈内壁的水流下后，再用细而长的滴管加蒸储水恰至标线，这一过程称为定容。用滴管加水时，视线要平视标线，然后将滴管伸入瓶颈使管尽量接近液面，稍向旁倾斜，使水顺壁流下，注意液面上升，滴管应随时提起，勿使溶液接触滴管，直到弯月而下缘最低点
16、与标线相切为止。定容以后，塞好瓶塞。左手拇指在前，中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标线以上部分，右手托住瓶底。如果容积小于IOOmL的容量瓶，就不必用右手托住容量瓶瓶底，以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，再充分振荡，如此反复35次，即可摇匀。容量瓶不能久贮溶液，尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞，使瓶塞无法打开，配制好溶液后，应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。54）移液管、吸量管用于准确移取一定体积的溶液的移液管，通常有两种形状，一种移液管中间有膨大部分，称为胖肚移液管（胖肚吸管），常用的有5mL、10mL、25mL、50mL等几种;另一种是直形的，管上有刻度，称为吸量管（刻度吸管）,常用的有ImL、2mL、5mL、IOmL等多种（如图3-15所示）。移液管和吸量
