过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响.docx

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1、过氧化氢酶过表达对a粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响苟巧,魏志权,邵帅,佟鹏,王春燕,齐雪松,张伟,苏旭中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所,辐射防护与核应急中国疾病预防控制中心重点实验室,毒理学研究室,北京IoOo88摘要:目的研究过氧化氢酶(CAT)过表达对粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35TI内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响。方法构建PEGFP-CAT真核表达载体,经聚合酶链反应(PCR),酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组质粒及其对照空载体转染至BERP35Tl细胞中,用G418筛选出具有抗性的细胞株,免疫印迹法鉴定CAT蛋白在各细胞株中的表达。通过免疫细胞化

2、学法、噬喋蓝法、划痕愈合实验和锚着独立生长实验分别检测CAT过表达对BERP35TI细胞内DNA氧化损伤(8-0HdG水平)、细胞增殖(细胞存活率)、迁移(划痕相对平均宽度)和锚着独立生长能力(软琼脂克隆形成率)的影响。结果PEGFP-CAr经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实,目的基因CAT的序列完全正确;获得了CAr稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35TX-CAT-J0BERP35TI-CAF7细胞中CAr蛋白表达是对照空载体转染细胞BERP35Tl-PEGFP的5.72倍(P0.01),CATmRNA表达是后者的2.91倍(P0.05).与BERP35Tl-PEGFP细胞相比,BERP35T1-CAT-7细胞内DNA氧化损伤产物8-0HdG水平降低(P0.05),细胞存活率减少(P0.05),划痕相对平均宽度增大(P0.05),软琼脂克隆形成率降低(PVO.05)。结论过表达CA阿能通过降低细胞内DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞增殖、迁移和锚着独立生长能力,从而部分逆转BERP35T1细胞的恶性表型。

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