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1、超氧化物歧化酶（SOD）标准曲线测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途超氧化物歧化酶（Superoxideismutase,SOD）标准曲线测定试剂是一种旨在通过比色测定高度可溶性的四嗖盐在超氧化物阴离子的还原作用下产生的水溶性甲腆染料所获得的吸光值，来对应构建已知超氧化物岐化醉活性单位标准曲线的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞和组织样品中超氧化物歧化酶实际活性单位计算的参照依据。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。技术背景超氧化物岐化幅（SOD）,是体内的重要金属酶抗氧化剂，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成过氧化氢（H22）和分子氧（02
2、）。超氧化物歧化酶活性检测试剂使用高度水溶性的四哩盐:WST-I（2（4-Iodophenyl）-3-4-ni（rophenyl）-5-（2,4-disulfophenyl）-2H-IetraZOliUm,monosodiumsalt）；2-（4-碘苯基）3（4一硝基苯基）-5-（2,4.苯二磺酸）-2H-四哩单钠盐。WST-I灵敏度高，氧化态的吸光度低，呈浅黄色，水溶性好，可以100%被SOD抑制，检测不受PH影响，背景噪音低。WST-I被02一还原（呈现深黄色）的还原率和黄噪吟氧化醉的活性成线性关系，该反应能被超氧化物岐化酶（SoD）抑制（完全抑制，WST-I呈现无色）。利用SOD能抑制W
3、ST-I和02的氧化还原能力来测定SOD的活性（波长为450nm的比色分析）。产品内容反应液（ReagemA）10亳升染色液（ReagentB）50微升催化液（ReagenlC）25微升稀释液（Reagent）2亳升补充液(ReagentE)1亳升标准液（ReageniF）200微升产品说明书1份保存方式保存在一20匕冰箱里；染色液（ReagemB）,避免光照，有效保证6月用户自备1.5克升离心管：用于反应液配制的容器2.2亮升离心管：用于反应液配制的容器酶标板或比色皿：用于比色分析的容器酶标仪或分光光度仪：用于比色分析实验步骤实验开始前，将一20七冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移
4、出2毫升反应液（ReagentA）到新的2.2毫升离心管，加入IO微升染色液（ReagentB）,轻柔混匀后，置于喑室里，标记为染色工作液.然后移出200微升稀释液（Reagent）到新的1.5亳升离心管，加入5微升催化液（ReagentC）,轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为催化工作液。然后进行下列操作。一、二倍法系列稀释1 .设定好衡标仪并预热：波长45Onm2 .取出待测的标准液（ReagentF）,置于冰槽里3 .准备1个96孔板，做好1至5号标记，置于冰槽里4 .按下列顺序依次加入下列反应液到96孔板的标记样品孔里：1）分别移取20微升稀释液（Reagent）至U96孔板的2至5号孔里2
5、）移取40微升标准液（ReagentF）到96孔板的1号孔里3）用200微升枪头抽去20微升1号孔里的标准液（ReagentF）到96孔板的2号孔里4）用200微升枪头上下抽吸混匀2号孔5）用200微升枪头抽去20微升2号孔里含有标准液（ReagentF）的稀释液到96孔板的3号孔里6）用200微升枪头上下抽吸混匀3号孔7）用200微升枪头抽去20微升3号孔里含有标准液（ReagentF）的稀释液到96孔板的4号孔里8）用200微升枪头抽去20微升4号孔里含有标准液（ReagentF）的稀释液，扔掉9 ）SoD实际浓度见卜.表管号稀释液(Reagent)标准液（ReagentF）SOD浓度（单
6、位/毫升）1O微升40微升12220微升20微升1号管6320微升20微升2号管3420微升20微升3号管1.5520微升OO二、建立反应体系1 .分别加入200微升含有反应液（Reagent）和染色液（ReagentB）的染色工作液到96孔板的1至5号孔里2 .分别加入20微升含有催化液（ReagentC）和稀释液（Reagent）的催化工作液到96孔板的1至10号孔里三、标准样品测定1 .轻轻摇动96孔板，混匀反应液2 .放进37培养箱孵育20分钟，避免光照3 .即刻放进酶标仪检测，波长为450nm四、构建SoD标准曲线1 .横座标（X轴）为每亳升SOD单位浓度2 .纵坐标（y轴）为标准样
7、品读数（吸光单位OD值）3 .根据测得数据构建曲线注意事项1 .本产品为5次操作2 .操作时，须戴手套3 .操作时，须在4C下进行4 .染色液（ReagentB）为浅黄色，如果有结晶析出，放进37C温育数分钟即可。染色液（ReagentB）一旦被还原，呈现可见黄色或深黄色；如果含有SOD,则会呈现为无色5 .孵育时，避免光照6 .孵育后即刻比色测定7 .样品SoD实际活性单位定义：每亳克样品蛋白或每身升样品含有X单位SoD量8 .标准液（ReagentF）的活性单位定义为25七温度，pH7.8的条件下，抑制50%在黄喋吟氧化酱参与的反应系统中，WST-I和之间的氧化还原能力9 .本公司提供系列超氧化物歧化酶分析试剂产品质量标准1 .本产品经鉴定性能稳定2 .本产品经鉴定检测敏感
