菜豆荚斑驳病毒RT-PCR试剂盒说明书.docx

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1、菜豆英斑驳病毒RTPCR试剂盒说明书1、试剂盒简介货为了适应瓜类菜豆荚斑驳病毒RT-PCR试剂盒快速检测和疫病研究的需要,本公司参照OIE国际标准中规定的引物序列,经多次实验及系统优化,开发生产了本试剂盒。应用本试剂盒进行检测具有快速、灵敏、特异、准确、安全操作简单、应用广泛和高通量检测等特点及优点。2、试剂盒组成:试剂盒组成包括核酸提取试剂和核酸扩增试剂,具体组成参见表1:s表L试剂盒组成(50test/盒)组成成分体积梅DNA提取液15mlXl管样品DNA提取液2500l1管核酸扩增试剂:DEPC水5mlXl管BPPCR反应液750lX1管Taq酶(5Uul)40lX1管阴性对照ImIXI

2、管BP阳性对照ImIXl管操作流程:1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4C。2 .设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50uL;3 .样本孔中加入待测样本50uL:空白孔不加。4 .除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100uL,用封板膜封住反应孔,37C水浴锅或恒温箱温育60min.5 .弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350UD,静置Imin,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板).6 .每孔加入底物A、B各50nL,37C避光孵育15min,7 .每孔加入终止液5

3、0uL,15min内,在45Onnl波长处测定各孔的OD值。样本:血清血浆组织匀浆等液体样本标记物,血清血浆组织匀浆等应用,仅用科研实验检测定量,定性检检测方法:夹心法技术要求I全程按说明书步骤检测,操作规范,专业,仪器设备齐全。规格:48t96t性状:液体运输方式:快递发货有效期:6个月品特点:灵敏性高,-一性,吸附均匀,吸附性好,回收利用率高,是一款可以让您放心选购的产品。使用范围:此产品供科研实验使用,不得用于-一0用途:用于测定人血清、血浆、组织及相关液体样本中的含量或活性。注意事项:1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,醉标包被板开封后如未用完,板条应装入

4、密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。2 .各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。3 .请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔di一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(XnX5).4 .封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。5 .底物请避光保存。6 .严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.7 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。8

5、 .本试剂不同批号组分不得混用。9 .不能使用过期产品。10 .如与英文说明书有异,以英文说明书为准。每个样品测试反应体系配制见卜.表2.:表2每个样品测试反应体系配制表试齐1PCR反应液Ta酶合计用量14.5L0.5UL15UL样本处理及要求:1.血清:全血标本请于室温放置2小时或4C过夜后于100Og离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20C或-80C保存,但应避免反复冻融。2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8CIOoOg离心20分钟,或将标本放于-20C或-8(C保存,但应避免反复冻融。3. 组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲

6、洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如Ig的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。将匀浆液于500OXg离心5、10分钟,取上清检测。4. 细胞培养物上清或其它生物标本:10OOg离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20或-80C保存,但应避免反复冻融C注:本公司提供试剂盒免费代测服务。需要其他检测试剂盒请咨询销售人员。试剂盒组

7、成及试剂配制:1 .酶联板(Assayplate):一块(96孔)。2 .标准品(Standard):2瓶(冻干品)。3 .样品稀释液(SampleDiluent):l20ml三4 .生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibodyDiluent):IXlOml/瓶。5 .辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液(HRP-avidinDiluent):IXlOmI/瓶。6 .生物素标记抗体(Biotirantibody):1X120U1/瓶(1:100)7 .辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1X120U1/瓶(1:100)8 .底物溶液(TMBSubstrate):IXIOInl/瓶。9 .浓洗涤液(WashBuffer):lX20ml瓶,使用时每瓶用蒸镯水稀释25倍。10 .终止液(StopSolution):1。IOnd/瓶(2NH2S04)。

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